187130. lajstromszámú szabadalom • Eljárás iridoid-glikozidok és szekoiridoid-glikozidok előállítására
1 187 130 2 (Merck, 0,05-0,2 mm, forró vízzel mosva, majd 160 °C-on 6 órán át szárítva), melyet 80,0 g azonos minőségű szilikagélbő! készült oszlopra rétegzünk. Az eluciót 10% metanol tartalmú diklór-etánnal végezzük, és 200 ml-es frakciókat szedünk. Az 5-től 9-ig terjedő frakciókat egyesítjük és vákuumban bepároljuk. A kapott 3,4 g anyagot 8 ml víz és metanol 1 : 3 arányú elegyéből kristályosítjuk és így 2,7 g aszperulozidol nyerünk, friss növényanyagra 0,45%, száraz drogra számítva kb. 3% kitermeléssel. Az aszperulozid fizikai jellemzői a következők: színtelen kristályok, op.: 132-134 °C (etanol); UV.: 234,5 nm (loge: 3,83); IR(KBr): 3600-3050 cm (vOH assz.); 1758 cm-' (vC=Ov—lakton); 1745 cm-1 (vC=0, észter); 1660 cm 1 (v > C=C—O). 2. példa Aszperulozid izolálása Galium verumból (Rubiaceae csatád) A növényi anyagot az extrakció előtt 9 hónapig tároltuk. 250 g 60 °C-on szárított drogot (föld feletti rész) turmixgépben felaprítjuk és 8400 ml víz és aceton 1 : 6 arányú elegyével perkoláljuk. A perkolátumot vákuumban 40 °C-on 500 ml térfogatig betöményítjük, és a Galium schulthesiinél ismertetett módon alumínium-oxiddal rázatjuk, majd a vizes oldat szűrése és bepárlása után a kivonatot szilikagél-oszlopon kromatografáljuk az 1. példában ismertetett módon. Az 5-től 9-ig terjedő frakciókból nyert 6,3 g anyagot tömény vizes oldatban 50 g poliamidból készült oszlopra visszük fel, és vízzel eluáljuk. A frakciókat 50 ml-ként szedjük. A 4-től 7-ig terjedő frakciókat egyesítjük, és vákuumban 40-50 °C-on bepároljuk. 3,6 g anyagot nyerünk, amelyet 8 ml víz és metanol 1 : 3 arányú elegyéből átkristályosítunk és így 2,7 g kristályos aszperulozidot kapunk. 3. példa Aszperulozid és Vx iridoid izolálása Galium verumból (Rubiaceae család) A drogot extrakció előtt 1 hónapig - 20 °C-on tároltuk. 900 g drogot 150 g-os részletekben esetenként 240 ml víz, 240 ml aceton és 3 g kalciumkarbonát jelenlétében turmixgépben felaprítunk, majd 15 percig rázatunk, végül vásznon leszűrjük. Szűrés után a drogot 400 atm. nyomáson kipréseljük, a kipréselt oldatot a szűrlettel egyesítjük, majd bepároljuk 800 ml-re, 40 °C alatti hőmérsékleten. 90 g alumínium-oxiddal 10 percig rázatjuk az oldatot, vásznon szűrjük, a szüredéket kétszer 120 ml vízzel mossuk, majd Büchner-tölcséren ismét megszüljük. A vizes oldatot 40 °C alatti hőmérsékleten 140 ml térfogatig bepároljuk vákuumban, utána intenzív rázogatás közben 900 ml acetont csepegtetünk hozzá, majd 2 óra hosszat + 5 °C-on tároljuk. Az acetonos oldatot leöntjük a kivált olajról és bepároljuk. 20 g olajos terméket kapunk, melyet metanolos oldatból 35 g szilikagél felületére egyenletes rétegben rápárolunk, és 110 g szilikagélből készült 30 mm átmérőjű oszlopra rétegzünk. Az eluciót 10 térfogat% metanol tartalmú diklór-etánnal végezzük, 200 ml-es frakciókat szedünk. A 4-től 10-ig terjedő frakciókat egyesítjük és bepároljuk. 8 g szilárd terméket, az ún. aszperulozid-frakciót kapjuk, mely az aszperulozid és a V,-iridoid keveréke. Az aszperulozid-frakciót feloldjuk 15 ml vízben, és 40 g-os 35 mm átmérőjű poliamid- (Serva) oszlopon vízzel kromatografáljuk, 50 ml-es frakciókat szedünk. A 4., 5., 6., 7. frakciókat egyesítjük, és vákuumban bepároljuk. így 6,7 g kristályos aszperulozidot kapunk. A 7-től 14-íg terjedő frakciókat, -melyek a Vj-iridoidot tartalmazzák kismenynyiségü aszperuloziddal szennyezve - szintén bepároljuk, a 0,9 g anyaghoz jutunk. A 0,9 g anyagot újra kromatografáljuk 5 g-os poliamid oszlopon. 5 ml-es frakciókat szedünk. A 7-17. frakciók tartalmazzák a V\-iridoidot, melyet bepárlunk és 0,8 g V,-iridoidot kapunk, amelyet metanolból átkristályosítva 0,5 g kristályos vegyülethez jutunk. A kivált kristályok nem szűrhetők, mert szűrés közben elfolyósodnak. Az oldószer pipettával történő leszívása után színtelen kristályokat kapunk. A Vi-iridoid fizikai jellemzői: színtelen kristályok, op.: 118-120 °C (metanol); [M]^, = - 920 (metanol, c = 2,22%; UV (etanol): Xmm 226 nm (log e = 4,14; 280 nm (log e = 3, 17; IR(KBR): 3360-3000 cm-' (vOH assz.) 1740cm-' (vC=0; 1657cm-' (^C=C—O); 1610, 1596, 1520cm-1 (vC=C aromás). 4. példa Szekologanin izolálása Lonicera tatarica (Caprifoliaceae család) növényből A drogot - 20 °C-on mélyhűtőben tároltuk. 25 g drogot 0,30 g kalcium-karbonát 38 ml víz és 42 ml aceton jelenlétében turmixgépben felaprítunk, majd 15 percig rázatunk, végül vásznon megszűrjük. Szűrés után a drogot kipréseljük, a szűrletet 40 °C hőmérsékleten 22 ml térfogatra bepároljuk. Az oldatot 2,5 g alumínium-oxiddal 15 percig rázatjuk, vásznon megszűrjük. A szüredéket kétszer 4 ml vízzel mossuk, majd az egyesített vizes oldatokat Büchner-tölcséren szűrjük, végül állandó súlyig bepároljuk. A szilárd hab formájú, 1,65 g maradékot 2,5 ml vízben feloldjuk, majd intenzív rázás közben, kis részletekben 25 ml acetont csurgatunk hozzá, végül 2 óra hosszat +5 °C-on tártjuk. Ezután az acetonos-vizes oldatot a kivált olajról leöntjük és szárazra pároljuk. A maradék súlya: 0,847 g. Ezt az anyagot metanolban feloldjuk, 2,2 g szilikagélre (Kieselgel 60) rápároljuk, és 6 g szilikagélből (Kieselgel 60) készült 1 cm átmérőjű oszlopra rétegezzük. Az eluciót etil-acetáttal végezzük. 10 ml-es frakciókat szedünk. A 6-tól 20-ig terjedő frakciókat szedünk. Á 6-tól 20-ig terjedő frakciókat egyesítjük és bepároljuk. 0,344 g kromatográfiásan egységes szekologanint kapunk. A 21-től 24-íg terjedő frakciókból (4x50 ml térfogat) 0,121 g há-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
