187130. lajstromszámú szabadalom • Eljárás iridoid-glikozidok és szekoiridoid-glikozidok előállítására
1 187 130 2 romkomponensű keveréket kapunk (alacsonyabb Rf értékű glikozidok). A módszer tetszőleges mennyiségű drog extrakciójára alkalmas, arányosan véve a felhasznált oldószereket, adszorbenseket stb. Frissen gyűjtött, — 20 °C-on tárolt és liofilizett drog feldolgozására egyaránt alkalmazható. A szekologanin vékonyrétegkromatográfiás ellenőrzését a következőképpen végezzük: az oszlopkromatográfiánál gyűjtött eluatumokból 5, 10, 20 mikrolitert cseppentünk fel Kieselgel 60F2S4 (DC Alufolien Schichtdicke 0,2 mm) lemezre. Fejlesztés: metanol és klroform 1 : 4 arányú elegyében. Szárítás után a kromatogramot 2,4-dinitro-fenil-hídrazinnal telített 2 mólos sósav oldattal bepermetezzük, majd UV lámpa alatt (254 nm) 1 percig besugározzuk. A szekologanin világos sárga foltban jelentkezik, a háttér világosbarna. A szekologanin fizikai jellemzői a következők: UV (etanol): >w 234,5 (loge = 4,13); IR(KBr): 3650-3050 cm“' (vOH assz.); 1710 cm’1 (vC=0); 1630 cm ' (v C=C—O); tetraacetát: színtelen kristályok, op.: 114-115 °C. 5. példa Szekologanin izolálás Lonicera xylosteum ssp. leiophyllum levélből ( Caprifoliaceae család) A friss vagy - 20 “C-on mélyhűtőben tárolt drog 25 g-ját ötszörös mennyiségű n-butanolban 12 órán át szobahőmérsékleten áztatunk, turmixoljuk és 4 óra hosszat kevertetjük, végül szűrjük és kipréseljük. A szűrletet 45 °C-on butanolmentesre sűrítjük, a kivált klorofilltől szűrjük, ezáltal a klorofill nagy részét könnyen eltávolítjuk. A sűrítményben maradó klorofillt és egyéb lipofil ballasztanyagot azonos térfogatú kloroformmal történő kirázással távolítjuk el. A vizes fázisból háromszoros mennyiségű etilacetáttal való kirázással szelektíven oldjuk a glikozidok egy részét. A vizes fázisban maradó szkoiridoidokat a vizes oldattal azonos térfogatú n-butanollal való háromszori visszarázással nyerjük. Az etilacetátos fázis bepárlása után 0,180 g 70%os tisztaságú szekologanint nyerünk, melyet egyszeri átcsapással tisztítunk. A butanolos fázis állandó súlyig szárítása után 0,658 g, 60%-os tisztaságú szekologanint kapunk, együttesen 0,838 nyersterméket izolálunk, amely a friss levélsúlyra vonatkoztatva 3,35%-os kihozatalt jelent. (Szárazanyagtartalom: 57,6%). Az utóbbi módon nyert szekologanin-dús nyersterméket a 4. példában leírt módon oszlopkromatográfiávai tisztitjuk, és egységes szekologanint kapunk. Az izolált szekologanin fizikai jellemzői a 4. példában szereplő adatokkal egyezőek. 6. példa Szekologanin izolálása Amsonia illustris (Apocynaceae család) növényből 34 g liofilizált drogot (150 g friss növényi anyagoknak felel meg) a 4. példában ismertetett kivonási, tisztítási és oszlopkromatográfiás módszerrel dolgozunk fel. A felhasznált oldószerek, adszorbensek mennyisége az idézett példában megjelölt mennyiségeknek 6-szorosa. 7. példa Szekologanin igazolása a Rhazya orientalis (Apocynaceae család) hajtásából 1150 g (53% szárazanyagtartalmú) virágzó hajtást metanolos áztatás után 400 kg/cm2 nyomáson kipréseltük, a drogmaradékot 50%-os metanollal extraháltuk. A présnedvet és az extraktumot egyesítettük, szárazra pároltuk és desztillált vízzel felvettük, majd szűrtük. A vizes oldatot azonos térfogatú kloroformmal tisztítottuk. A vizes fázis etilacetátos kirázása és az etilacetátos rész vízmentesítése, majd állandó súlyig szárítása után 9 g szekologanint (száraz drogra számolva 1,48%) izolálunk. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás iridoid- és szekoiridoid-glikozidok izolálására, azzal jellemezve, hogy valamely, a glikozidot tartalmazó növényi anyagot felaprítunk, ezt víz és aceton vagy víz és alkohol elegyével extraháljuk, az extraktumot betöményítjük, a nyert vizes maradékot alumínium-oxiddal keverjük vagy rázzuk, leszűrjük, a szűrletet bepároljuk, a kapott maradékot a) szilikagél-oszlopon metanol és aprotikus oldószer elegyével eluálva kromatografáljuk, vagy b) vízben feloldjuk, és intenzív keverés közben acetonnal hígítjuk, a kivált olajos anyagról a vizesacetonos oldatot dekantáljuk és bepároljuk, a maradékot szilikagél-oszlopon metanol és aprotikus oldószer elegyével eluálva kromatografáljuk, az így kapott végterméket tartalmazó eluátumokat egyesítjük és bepároljuk, majd kívánt esetben kristályosítjuk, vagy átkristályosítjuk, vagy kívánt esetben poliamid-oszlopon kromatografálva tovább frakcionáljuk, majd átkristályosítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy növényi anyagként friss, mélyfagyasztott vagy liofilezett növényi anyagot használunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatositási módja, azzaljellemezve, hogy a növényi anyag aprítását az extrakcióhoz használt oldószerelegyben végezzük. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az extrakciót a friss növényi anyagra számított 3-4-szeres mennyiségű víz és aceton vagy víz és alkohol 1 : 1 és 1 : 6 közötti arányú elegyével végezzük. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
