187130. lajstromszámú szabadalom • Eljárás iridoid-glikozidok és szekoiridoid-glikozidok előállítására
1 .187 130 2 A találmány tárgya eljárás iridoid-glikozidok és szekoiridoid-glikozidok izolálására. Az iridoidok, illetve a szekoiridoidok természetes eredetű vegyületek. Közös szerkezeti jellemzőjük a ciklopenta- (c) pitán vázrendszer, melyet az (I) képlet szemléltet, illetve annak 7-es és 8-as szénatomjai között felnyílt változata, amelyet a (II) képlet szemlélet. Az iridoid-vegyületek számos népi gyógyszernek aktív alkotórészei; a népgyógyászatban mint vizelethajtó, hashajtó, izzasztó, nyugtató hatású és bőrfertözés elleni szerek használatosak. Az izolált iridoidok részletes biológiai hatását azonban viszonylag kevés esetben vizsgálták. így például gombaölő hatást mutattak ki az aukubin, plumierid, plumericín esetén, analgetikus és antiflogisztikus hatást a harpagozid esetén, szedatív hatást a valepotriátok esetén, hashajtó hatást az aszperulozid, genipozid, verbenalin esetén; leukémia ellenes hatást az allamandin esetén és vérnyomáscsökkentő hatást az aszperulozid esetén. A s/ekoiridoid-vegyületeket tartalmazó drogok egy része (pl. Menyanthes trifoliata, Gentiana fajok) a népgyógyászatban keserűanyagként használatosak. Az izolált, szekoiridoidokhoz tartozó oleuropeinnek vérnyomáscsökkentő és koronaértágító hatása van. Biokémiai és preparatív kémiai vizsgálatok igazolják, hogy az (V) képletű szekologanin a biológiailag aktív alkaloidok jelentős képviselőinek, például az indolvázas alkaloidoknak, Ipecacuanha, Cinchona alkaloidoknak a bioszintézisénél kulcsszerepet játszik. A (III) képletű aszperulozid izolálását Trim A. B. és Hill R. szerint [Biochem. J.50. 310-319 (1952)] Galium aparine, Rubia tinctorum és Daphniphyllum macropodum növényi anyagból a következőképpen végzik:A drogot 0,33 n sósavval szobahőmérsékleten extrahálják, az iridoidvegyületeket aktív szénen adszorbeáltatják, az aktív szenet leszűrik, vízzel mossák, majd alkohollal eluálják. Az alkoholos oldat bepárlása után az aszperulozidot kristályosítással nyerik, majd kétszer átkristályosítva tovább tisztítják. A módszer hátránya, hogy az iridoid-vegyületek ismert savérzékenysége miatt az aszperulozid a sav hatására bomlik, és a tiszta aszperulozid izolálásáig végzett nyolcszor! szűrés sok munkát és időt igényel. Az aszperulozid izolálásának egy másik ismert módszere Borisov M. I. és Borisyuk Y. G. szerint [Farmatsevt. Zh. (Kiev) 18.43/1963] Galium ruthenicumból abban áll, hogy a száraz drogot 96%-os etanollal extrahálják, majd az alkohol lepárlása után a vizes maradékot éterrel kirázzák a klorofill eltávolítására. A megtisztított vizes oldatot poliamid oszlopon kromatografálják. Az aszperulozid frakció eluálása vízzel történik, majd a kapott oldat betöményítése után az aszperuozidot etanol és kloroform I ; 1 arányú elegyével 100 ml-es részletekben 20-szor kirázzák. A szerves oldószer lepárlása után az aszperulozidot kristályosítják. A módszer hátránya, hogy nagy térfogatú szerves oldószert igényel, és a használt oldószerek nem regenerálhatok. A klorofill eltávolítására végzett éteres kizárás erős emulzióképződéssel jár, ami nagy anyagveszteséget okoz. A többszöri kirázás nehézkessé teszi a módszert. Az aszperulozid izolálásának harmadik ismert módszere Sticher O. szerint [Pharm. Acta Helv. 46, 121 (1971)] Asperula odorataból abban áll, hogy a friss növényi anyagot forró etanollal extrahálják, majd a kivonatot etanol-mentességig betöményítik. A vizes maradékot a klorofill eltávolítására éterrel kirázzák, majd szilikagél-oszlopon metanol és diklór-metán elegyével kromatografálják. A módszer hátránya, hogy az aszperulozid hőérzékeny vegyület, és így forró etanolos kivonáskor bomlik. A klorofill eltávolítását itt is éteres kirázással végzik, ami - mint fent említettük - az emulzióképződés következtében nagy anyagveszteséget okoz. A módszer további hátránya, hogy az oszlopkromatográfiával nyert aszperulozid-frakciók nagy mennyiségű flavonoid típusú vegyületet tartalmaznak, melyeket csak többszöri átkristályosítással lehet eltávolítani az aszperulozid mellől, ez pedig további anyagveszteséget jelent. Az (V) képletű szekologanin izolálását Souzu I. és Mitsuhashi H. szerint (Tetrahedron Letters 1970. 191) Lonicera morrowii A. Gray-ből úgy végzik, hogy a növényi anyagot etanollal extrahálják. A kivonatból celit-szén oszlop segítségével nyert glikozidelegyet szilikagélen kromatografálják. A közlemény nem közöl részletes előíratot az izolálásra. A szekologanin izolálását egy másik irodalmi módszer [KinastG. és TietzeL. F.: Chem. Bér. 109, 36-40 (1976)] szerint Lonicera tatarica frissen gyűjtött leveles hajtásaiból úgy végzik, hogy a drogot 25 °C-on metanollal extrahálják. A kivonatot semlegesítik, betöményítik, majd éterrel kirázzák a klorofill és a lipoidok eltávolítása céljából. A vizes fázis betöményítése után viszkózus olajat kapnak, melyet négyszer, esetenként 6 órán keresztül acetonnal kevernek, és így nyerik ki a szekologanint. Az egyesített acetonos kivonatok bepárlásával habot nyernek, mely 90%-ban szekologanint tartalmaz. Ezt szilikagél-oszlopon kromatografálva, eluálószerként aceton és benzol 5 : 2 arányú elegyét használva tovább tisztítják. A fenti eljárás gondos és ismételt kísérletekben sem volt reprodukálható. Célul tűztök ki olyan eljárás kidolgozását, melylyel a fenti hátrányok kiküszöbölhetők, és az iridoid- és szekoiridoid-glikozidok nagyobb kitermeléssel és tisztább formában izolálhatok. A találmány alapja az a felismerés, hogy a fent nevezett glikozidok mellől az extraktumból a flavonoid típusú vegyületek és a klorofill egyszerű alumínium-oxidos rázatással és az alumínum-oxid kiszűrésével, míg a glikozidoknál hidrofilebb komponensek, például a cukrok acetonos hígítással eltávolíthatók. Szekoiridoidok kinyerésére különösen előnyös az a felismerés is, hogy a drog vízzel telített butanolos extraktumából egyszerűen kivitelezhető fáziscserékkel az izolálandó anyagok feldúsíthatok, és nagyobb kitermelés érhető el. A találmány további alapja az a felismerés, hogy iridoid-glikozidok izolálás esetén a szilikagél-oszlopon végzett kromatográfiánál a diklór-etán mint I 5 10 15 20 25 30 :5 0 45 50 55 60 65 2
