187046. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fehérjekészítmény előállítására élelmiszeripari célokra
1 2 essential amino-acids in compound feeding-stuffs Analyst, 97.138-141. Szabad aminosav-tartalom meghatározása: ónklorid-ninhidrin reagenssel, L-lizin standardhoz képest NPU érték: B — Bi, . —_.ioo I tört szerint, amelyben B = vizsgált fehérjével etetett állat nitrogéntartalma B^ = kontroll állat nitrogéntartalma 1 = összes állat nitrogéntartalma a felvett tápban Hamutartalom meghatározása: platinatégelyben 650 °C-on izzítva. Színmérés: Official Recommendations on Uniform Color Spaces Color-Difference Equations, Metric Color Terms. May 1976 — Supllemet No. 2 to CIE Publication No. 15, Colorimetry (E-l.3.1) 1971, 19 p. Hemintartalom meghatározása: Ganther, Gy.: A hem savas-acetonos elválasztása (Húsipar, 7, 159) mg hemin/g dimenzióban. Emulzió-aktivitás meghatározása: Yusamatsu, K. és #mtsai: Agric, Biol. Chem. 36,719 (1972). Habképződés meghatározás: Gunter, R.C.: Chemistry and Characteristice of Enzymes-modifted Whipping Proteins J. Am, Oil Chemists’ Soc. March 1979 (V. 56.) MORUP ÖLESEN index: 10 Int. Cong. Nutr. Abstr. 100 1235 (Kyoto 1975). Aminosavak speciális bontási helyeinek meghatározása: Ichishima E. et al. 1983: (Food Chemistry 11,187-200) 1. példa 25 cm3 sűrűvérhez 75 cm3 vizet adunk és 5 N nátriumhidroxiddal 10,5 pH-értéket állítunk be. A sűrűvért teljesvérből készítjük, amelyet csőkéssel vettünk, nátríumacetáttal vagy -foszfáttal stabilizáltunk és a plazmát (vérszérum) centrifugálással vagy szeparálással különítettünk el. A vízzel hígított és megfelelő pH-értékere beállított sűrűvért 120 percig mágneses keverővei kevertetjük, levegővel érintkeztetjük. A lúgos pH és a molekuláris oxigén hatására a fehérje denaturálódik és a hemoglobin oxidálódik. 100 cm3 hemoglobin oldathoz 0,160, AU 1:32 enzim-szubsztrát arányú Alcalase 0,6 L enzimet adunk és 55 °C-on az oldatot kevertetjük 240 percig. Ezután koncentrált sósavat adunk hozzá, a pH-értéket 4,5-re csökkentjük. Az oldatot centrifuga-csövekbe töltjük és 3000 f/min mellett 30 percig ülepítjük. Olepítés során a hemintartalmú rész üledéket képez. A felülúczót 85 °C-on 10 percig hőkezeljük, majdliofilezzük. A liofilezett termék jellemzői: fehérjetartama: 80% maradék hemintartalma:0,65 mg/g CIE világossági tényező Y = 30,4 hamutartalom: 8% szabad aminosav-tartalom: 10% 2. példa 25 cm3 1. példa szerint előállított sflrűvért 175 cm3 vízzel hígítunk és 5 N nátriumhidroxid oldattal 10,5 pH-értékre állítjuk be. Az 1. példa szerint hemolizált vértesteket tartalmazó oldatot 55 °C-ra melegítjük és 100 cm3-énként 1:100 enzim-szubsztrát arány mellett 0,024 AU enzimet (Alcalase 0,6 L) adunk hozzá. 480 percig végezzük az enzimatikus bontást, ezt követően az oldatot koncentrált sósavval 4 pH-értékre állítjuk be, majd 3000 f/min mellett 30 percig centrifugáljuk. A hemintől elkülönített globin-oldatot 85 c-on 10 percig tartjuk, az enzim inaktiválása és lioftlezése után az oldatból 2,5 g port kapunk, amelynek jellemzői a következők : fehérjetartalom: 88,5 % hamutartalom: 7% maradék hemin-tartalom: 0,63 nig/g világossági tényező Y = 30,4 szabad aminosav: 15%. 3. példa 1. példa szerint kapott 25 cm3 sűrűvért 75 cm3 vízzel hígítunk, 5 N nátriumhidroxid-oldattal 10,5 pH-értékre állítjuk be. Mágneses keverővei 60 percig kevertetjük. Az oldatot ezután 85 °C-ra melegítjük, majd 0,40 AU aktivitású proteáz-enzimet adunk hozzá, 60 percig kevertetjük. Enzimatikus bontás után koncentrált sósav hozzáadásával az oldatot 5 pH-értékie állítjuk be és 30 percig centrifugáljuk 3000 f/min mellett. A ki ülepített heminről a felülúszót dekantáljuk, az oldatban az enzimet 85 °C-on 10 percig tartjuk, a jelenlévő enzim inaktiválása céljából. A liofdezés után kapott 5,52 g termékjellemzői: fehérjetartalom: 84% hamutartalom: 8% maradék hemin: 0,32 mg|g világossági tényező Y = 31 szabad aminosav: 20%. 4. példa 25 cm3 1. példa szerint kinyert sűrűvérhez 75 cm3 vizet adunk és hemolizáljuk. A hemolizis után az oldatot 55 °C-ra melegítjük és 1:20 enzim szubsztrát arány mellett 0,28 AU aktivitású Alcalase 0,6 L enzimet adunk hozzá, 60 percig kevertetjük. Az enzimatikus kezelés után koncentrált sósav hozzáadásával 5,5 pH-értéket állítunk be, és az oldatot 3000 f/min mellett 30 percig centrifugáljuk. A hemintől elválasztó ti fehérjeoldatot 85 °C-on 10 percig inaktiváljuk, majd liofilezzük. A hozam 5 g, jellemzői: fehérjetartalom: 82% hamutartalom: 8,5% maradék hemin : 1,15 mg/g világossági tényező Y = 27,3 szabad aminosav: 18%. 5. példa Az 1. példa szerint hemolizált 25 cm3 sűrűvér 75 cm3 vízzel hígított oldatát 120 percig denaturáljuk. 100 cm3 kapott hemoglobin oldathoz 140 enzim-szubsztrát arány mellett 0,4 AU aktivitású alfa-Kimotripszin (Merck) enzimet adunk és a rendszert keverésben tartjuk 240 percig. Enzimatikus kezelés után koncentrál sósavval 4,5 pH-értéket állítunk be és 3000 f/min mellett 30 percig centrifugáljuk. A hemlntől elválasztott fehérjeoldatot 85 °C-on 10 percig tartjuk. A liofilezés után kapott poralakú, termék súlya 4,8 g és jellemzői a következők: fehérjetartalom: 80% maradék hemin: 1,2 mg/g GIF világossági tényező Y = 27,0 hamutartalom: 10% szabad aminosav-tartalom: 18%. 6. példa Az 1. példa szerint kinyert sflrűvért 1:3 arányban vízzel hígítjuk és lúgos közegben 120 percig denaturáljuk. A denaturáltást levegő hozzávezetés közben végezzük. A denaturált hemoglobint 30 °C-ra felmelegítjük, 5,0 pH-értékre állítjuk be és 140 enzim-187.046 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
