186749. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, biológiailag aktív peptidek előállítására
5. példa 1 \ 86 749 2 H-Tyr-ala-Phc-Gly-NH* (XIX) (i) A 3. példában leírt peptidgyantából 1 g-ot metanol és dimetilformamjd 1 :1 arányú elegyében (10 ml) szuszpendálunk, és a szuszpenziót 0 °C-on ammónia-gázzal telítjük. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 3 napon áí keverjük, utána a gyantát kiszűrjük, dimetilformamiddal mossuk, és az oldószert vákuumban bepároljuk. A maradékot hidrogénkloriddal vízmentes tetrahidrofuránna! készített oldatával kezeljük. 0,09 g cím szerinti (XIX) képletű vegyületet különítünk el izopropanolból kristályosítva. Op.: 206 °C, [a]p8 = +49,9° (c = 1, metanol), = 0,5S. Aminosav-elemzés: Gly 1,05, ala 1,00, Tyr 0,91, Phe 1,03. (ii) Az aminosavakat megfelelő sorrendben tartalmazó D) szerinti gyantából szintén állíthatjuk elő a cím szerinti peptidet. Ez esetben a 4. példa (i) bekezdése szerint járunk el. 6. példa H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH-NH-Z• HO (XIV’) 1 .lépés: Boc-Ser-NH-NH-Z (!’) 1.0 g (4,87 mmól) Boc-Ser-OH 20 ml vízmentes tetrahidrofuránnai készített oldatához —12 °C-on egymás után 0,55 ml (4,87 minő!) N-metil-morfolint, majd 0,49 ml (4,87 mmól) etilklórforrr.iátot adunk. Az elegye! -12 °C-on 2 percen át keverjük, és utána 1,0 g (4,87 mmól) H2N-NH-Z*HC1 és 0,55 ml (4,87 mmól) N-metil-morfolin 20 ml dimetilformamiddal készített hűtött oldatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet -10 °C-on 3 órán át, majd 20 °C-on 1 órán át keverjük, utána a sókat kiszűrjük és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk, és az oldatot többször citromsav konyhasóval telített JM oldatával, nátriumhidrogénkarhonát 1M oldatával, majd vízzel mossuk. A szerves fázist vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A terméket Siiikagéllel töltött oszlopon kloroform és metanol 98:2 arányú elegyével eluáiva tisztítjuk. A vékonyrétegkromatográfiailag egységes frakciókat összegyűjtjük és oldószermentesítjük. A maradékot dietiléter és petroléter elegyé' vei eldörzsölve 1,4 g (F) képletű vegyületet kapunk. Op.: 42-46 °C; [ají,5 = -25,8° (c = 1, metanol), R* = 0,52. 2. lépés: H-Ser-NIÍ-NH-Z• HCl (II’) 1.0 g (2,83 mmól) Boc-Ser-NH-NH-Z (F) hidrogénklorid vízmentes tetrahidrofuránna! készített 10 ml 4 n oldatával készített oldatát szobahőmérsékleten 30 percen át állni hagyjuk, utána dietilétert adunk hozzá, és a csapadékot szűrjük. A nyers terméket etanol és dietiiéter vízmentes elegyéből átkrisf.ályosítjuk. 0,7 g cím szerinti terméket kapunk Op.: 110-115 °C; [a]^5 = = +20,7° (c = 1 .metanol),R^ = 0,49; E, 2 = 1,16. 3. lépés: Boc-Tyr(Bzl)-Pro-OH (III’) 1.0 g (8,7 mmól) H-Pro-OH-t szobahőmérsékleten 4,35 ml 2 n nátriumhidroxid-oldatban oldunk. Az oldatot 0 °C-ra hűljük, 10 ml dimetilformamiddal hígítjuk, majd az oldószert vákuumban 35 °C-on eltávolítjuk. A maradékot 10 ml dimetilformamidban szuszpendáljuk, és a szuszpenzióhoz 4,3 g (8,7 mmól) Boc-Tyr(Bzl)ONp-t adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 1 órán át keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot vízben oldjuk, és az oldatot többször etilacetáttal mossuk. A vizes fázist 0 °C-ra hűtjük, 5 n vizes sósavoldattal pH 2 értékre savanyítjuk, majd etilacetáttal extraháljuk. A szerves fázist konyhasóval telített vizes nátriumhidrogenkarbonát-oldattal semlegesre mossuk és vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk. Az oldószert 30 °C-on eltávolítjuk. 3,7 g (IIF) képletű vegyületet kapunk. Op.: 97-100 °C (bomlás), [a]^5 = -15,7° (c = 1, metanol), Rf =0,70; E5jS =0,35. 4. lépés: Boc-Tyr-Pro-OH (IV’) 1.0 g (2,1 3 mmól) (IIF) képletű vegyületet 15 ml metanolban 0,27 g, 10 %-os palládium-csontszén katalizátor jelenlétében 30 °C-on hidrogénezünk. A katalizátort kiszűrjük, az oldatot etilacetáttal hígítjuk és vákuumban kristályosodásig be tömény ítjük. 0 J g (IV) képletű vegyületet kapunk. Op.: Î36—138 °C; [a]^5 = —25,0° (c = = 1, metanol),R^ =0,42; Es s =0,52. 5. lépés : Boc-Tyr-Pro-Ser-NH-NH-Z (V) 1.0 g (2,65 mmól) (IV') képletű vegyületet 0,77 g (2,65 mmól) (IF) képletű vegvülettel az l. lépésben leírtak szerint reagáltatva 1.46 g (V’) képletű vegyületet kapunk. A dietiléter és petroléter elegyéből kristályosított vegyidet 116-118 °C-on olvad, [aj^ = -46,5° (c = = 1, metanol); R* =0,17, R® =0,37. 6. lépés: H-Tyr-Fio-Ser-NH-NH-Z0HCI 1.0 g (1,63 mmol) (V) képletű vegyületet a 2- lépésben megadott módon reagáltatva 0,78 g (VF) képletű vegyületet állítunk elő. A vegyület dieiiléterbő! átkristályosítva 172-174 °C-on olvad, [a]^5 = -38,4° (c = = !, metanol), R^ = 0,46; EM = 0,79 7. lépés: Boc-Phe-Gly-NH-NH-Z (VIF) 1.0 g (3.8 mmól) Boc-Phe-OH t és 0,95 g (3,7 mmól) H-Gly-NH-NH-Z"HCl-t (K. Hofmann et al.: J. Am. Chem. Soc. 94, 617! [1972]) az 1. lépés szerint reagáltatva 1,4 g (VIF) képletű vegyületet kapunk, amely metanol és diizopropíléter elegyéből átkristályosítva 143 °C-on olvad, ju]^5 = +5,6° (c = 1, metanol). R^ =0,63. 8. lépés: H-Phe-Gly-NH-NH-Z HC! (VIIF) 1.0 g (2,1 mmól) (VIF) képletű vegyületet szobahőmérsékleten 30 percen át 10 ml jégecetes Î ,3 n hidrogénkíorid-oldattal kezelünk. Az oldószert vákuumban 30 °C-on eltávolítjuk és a maradékot dietiléterrel eldörzsöljük. 0,89 g (VIIF) képletű vegyületet kapunk. Op.: 178 °C; [aj*5 = +45° (c = 1, metanol), R^ = 0,78; E12 = = 0,88. 9. lépés: Boc-ala-Phe-GIy-NH-NH-Z (IX’) 1.0 g (5,3 mmól) Boc-ala-OH-t és 2,09 g (5,1 mmól) (VlíF) képletű vegyületet az 5. lépés szerint reagáltatva 2,5 g (IX') kcplctű vegyületet kapunk, amely metanol és diizopropilctcr elegyéből átkristályosítva 165 °C-cm olvad. [a]p5 = +8° (c = 1, metanol); = 0,51. 10. lépés: H-ala-Phe-GIy-NH-NH-Z* HCl (X’) 1.0 g (i ,8 mmól) (!XT) képletű vegyületből kiindulva a 6. lépés szerint járunk cl, és 0,84 g (X’) képletű vegyületet kapunk, amely 180 °C-on olvad, [g]^5 = +0,2° (c = 1, metanol), Rp = 0,75; E!2 =0,80. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
