186749. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, biológiailag aktív peptidek előállítására

1

18b 749

2

át 10 ml trifluorecetsavval kezeljük. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékot dielilíterrel eldörzsöljük. 0,90 g cím szerinti terméket kapunk, amely 159— 160 °C-on olvad, [a]?,5 = +5,5° (c = 1. metanol). = = 0,51.

2. példa

H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NH2 • CF3COOH (XV)

1. lépés: Boc-Tyr-ala-Phe-Giy-Tyr-NHa (XIV)

2,74 g (4,8 mmól) Boc-Tyr-ala-Phe-GIy-NH-NH2 (a) 50 ml vízmentes dimetilformanüddaí készített, -30 C- ra hűtött oldatához vízmentes telrahidrofuránnal készített ón hidrogénklorid-oldatból 2,0 rnl-t (12 mmól), majd 0,63 ml (5,28 mmól) n-butilnitritet adunk. A reakcióelegyet —30 °C-on 30 percen át keverjük, utána -40 °C-ra hűtjük és 1,34 ml (12 mmól) N-metil-morfoIint adunk hozzá. Ezt követően 0,865 g (4,0 minői) H-Tyr-NH2-HCl (K. Blau és S. G. Waley: Biochem. J.

57. 538 [ 1954j) és 0,456 ml (4,0 mmól) N-metil-morfolin 50 ml dimetiiformamiddal készített, -40 °C-ra hűtött oldatát adjuk a reakclóelcgyhez. Az elegyet —10 C- on 7 napig állni hagyjuk, kis térfogatra betöményítjük, a sókat kiszűrjük és a szűrletből a terméket kloroformmal kicsapjuk. Metanol és kloroform elegyéből kristályosítva

2.0 g (XIV) képletű vegyületet kapunk, amely 127-129 °C-on olvad. [a]p = +19,9° (c = 1. metanol). = 0,15, R® = 0,56.

2. lépés: H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NH2 *CF3COOH (XV)

1,0 g (XIV) képletű terméket 0 °C-on 30 percen áí 12 mi trifluorecetsawal reagáltatunk. A savat vákuumban elpároljuk és a maradékot dietiléterrel eidörzsőljük, Izopropilalkohol és dietiléter elegyéből kristályosítva 0,94 g cím szerinti terméket nyerünk, amely 145-146 °C-on olvad, [a]^5 = +34,5° (c = J, metanol), R^r = 0,65.

Szilárdfázisú szintézis

A) eljárásváltozat: 3oc-(AA)n-(AA)41_i ...(AA)i-hidroximetil-polisztirolészter

Klórmetilezetí polisztirol gyantát az első Boc-aminosawal (Boc-AAj-OH) Gisin (Heiv. Cilim. Acta 56 1476

[1973]) szerint észterezünk. A cím szerinti gyantaszármazék előállítása céljából az alábbi kezelést végezzük;

1. háromszor mosás metiléndikloriddal,

2. kétszer 1—I perces kezelés triftuorecctsav és metiléndiklorid 1:1 arányú elegyével,

■ 3. 30 perces kezelés a fenti oldószereleggyef,

4. négyszeres mosás metüénkloriddal,

5. kétszer 1-1 perces kezelés 10 % trifluorecetsavat tartalmazó metüénkloriddal,

(>. 10 perces kezelés 10 % trilluorecoisaval tartalmazó metüénkloriddal,

7. háromszoros mosás metüénkloriddal,

8. háromszoros mosás dimetiiformamiddal,

9. háromszoros mosás metilénkloriddal,

10. 2 megfelelő aminosav-származék szimmetrikus anhidridje 2 vagy 3 egyenértékánek hozzáadása (előállítva Hagenmayer és Frank szerint, 1. Hoppe-Seyler’s Z. Physiol. Chem. 353 1973 [1972]). Az anhidrid oldva metilénkloridban, reakcióidő 1 -2 óra.

11, háromszoros mosás metüénkloriddal,

12 háromszoros mosás izopropanollal,

13 háromszoros mosás metilénkloriddal,

14 teszt-ninhídrin-reakció (Kaiser et al.: Annal. Biochem. 34, 595 [1970]). Nem teljes reakció esetén a 4—i 4 műveleteket megismételjük.

B) eljárásváltozat: H-(AA)n-(AA)n_i ...(AA)!-hidroxime til-polisztirol észter.

Mi Jtán az utolsó aminosav-származékot az A) eljárásváltozat szerint beépítettük, a gyantát háromszor ecetsavval mossuk, utána az 1-9. műveleteket megismételjük, majd a gyantát négyszer izopropanollal mossuk.

C) eljárásváltozat: Boc-(AA)n~(AA)n_i...(AA)ibcnzl idrilamin-gyanta.

Bcc-(AA)] -OH-t diciklohexilkarbodiimid segítségével a benzhidrilgyantához kapcsolunk (Pietta et al: J. Org, Chen'. 39, 44 [1974]). A reakcióba nem lépett aminocsopcrtokat ccctsavanhidrid-piridin-mctilénklorid 2:1:10 arányú elegyével acetilczzük, A kapott polisztirol-amidot az A) eljárás szerint kezeljük a cím szerinti gyanta előállítására.

C) eljárás változat: H-(AA)n-(AA)n_i ...(AA)j -be.nzhidrüamin -gyanta.

A C) eljárásváltozat szerint kapott peptid-gyantából kiindulva a B) eljárásváltozat szerint dolgozunk.

.?. példa

H Tyr-ala-Phc-Gly-OMc (XVÍ )

A megfelelő aminosav-csoportokat (Boc-GIy-OH, Boc- Phe-Oil, Boe-ala-OH, illetve Boc-Tyr-OH alakjában) tartalmazó B) szerinti gyantából 1 got 25 ml metanol és

2 ml trietilamin clegyében szobahőmérsékleten 3 napon át áfni hagyunk. Utána a gyantát kiszűrjük, dimetiiformamiddal mossuk, és az oldószert vákuumban bepároijuk. A maradékot izopropanolból kristályosítva 0,16 g cím szerinti terméket nyerünk. Op.: 2! 6-218 °C [a]p8 = = -32,6° (c = 1, dimetilformamid), Rjr =0,70. Aminosavelenizés: Gly 1,04; ala 1,06: Tyr 0,99; Plie 1,00.

4. példa

H -Tyr -ala -Plie -G!y-OH (XVII)

(i) A 3. példában szereplő peptidgyantából 1 got 0 °Con 1 ml anizolt tartalmazó vízmentes (CoF3 felett desz illáit) 10 ml hidrogcnílucriddai 45 percen át kezelünk. A Iri drogén fluor! dot csökkentett nyomáson bepároljuk és az anizolt diizopropjicterrel mosva eltávolítjuk. A nyers pepiidet 50 %os ecetsawa! extraháljuk, majd Sephadex G-15 gyantával töltött oszlopon 0,5 n eceUavval eludlva tisztítjuk. A pepiidet AmberÜte IRA -45 jelű accíátformájú gyantával kezelve acetáttá alakítjuk.

( i) 0.10 g (XV!) kcpletű peptidésztert 5 ml víz és

3 n! metanol clegyében sznszpcrubilunk és 0,32 ml n náliíumliidroxid-oldattal szobahőmérsékleten 90 percen át e'szappanosítjuk. Az oldatot vákuumban betöményítjük, majd 95 %-os etanolt adunk hozzá. 0,08 g (XVII) képiéül, cím szerinti terméket kapunk. Op.: 250—252 °C (bomlás). [u]is = -2.8° (c = l, dimetilformamid), R^=

= 0,56. Arninosav-elemzés: Gly 1,04; ala 0,94; Tyr 1 ,U0; Pire i ,05.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

9