186749. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, biológiailag aktív peptidek előállítására
1 186 749 2 Patkány (agykamrába történő befecskendezéssel) Képlet Forrólemez próba Farokelhúzási próba H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tvr-Pro-Ser-NH-NH2 • 2 HCI 70-80 7-15 H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro- Ser -N H -N H -Z • HC1 120 25-30 H-Tyr-ala-Phe -Gly-Tyr-Pro - Ser(Bzl)-NH2 * HC1 20 8 H -T yr -ala -Plie -Gly -Tyr -Pro- Gly-NH2 • HCI 20 8 H-Tyr -ala -Phe -Giy -Tyr -Hy p- Ser-NH2 • HCI 90-110 70-80 H-Tyr-ala -Phe-Gly-Tyr-Val- Ser-NH2 -TFA 5 H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Gly- Ser-NH2 • TFA 10 H-Tyr-ala-Phe-Gly-Phe-Pro- Ser-NH2 * HCI 70 10-20 H-Tyr-ala-Phe-Gly-Trp-Pro- Ser-NH2 • HCI 30 3-5 H-Tyr-ala-Phe-Sar-Tyr-Pro- Ser-NH2 • HCI 100 70 H-Tyr-ala -Phe -Phe-Tyr-Pro- Ser-NHa “HCI 10 I-í-Tyr-ala-Phe-Gly-Phe-Hyp- Ser-NH2 • HCI 70 5 H-Tyr-ala -Phe-Gly-Tyr(Bzl)Hyp-Ser(Bzi)-NH2 • HCI 10 _ H-Tyr -ala -Phe -Gly -Phe -Hy p - Ser(Bzl)-NH2 • HCI 55 H-Tyr-ala -Phe-Gly-Tyr-Pro- NH2“TFA 25 14 H-Tyr-ala-Phe-Gly -Tyr(Bzl)Pro-NH2 * TFA 2 H-Tyr-ala -Phe-Gly-Tyr-Ser- NH2 • TFA 8 1 H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr- NH2 * TFA. 27 12 H-Tyr-ala-Phe-GIy-Tyr- NHNHa “2 HCI 20-30 __ H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr- NHNHZ • HCI 20-40 12 H-Tyr-ala-Phe-Gly-tyr - NH2 • HCI 6 1,5 H-Tyr-ala-Phe-Gly-Leu- NH2 • HCI 0,5 H-Tyr-ala-Phe-Sar-Tyr-NHNH-Z-HC1 20-40 14 H-Tyr-ala-Phe-Gly-NH2 • HCI 22 12 H-Tyr-ala-Phe-Gly-OH 6 — H-Tyr-ala-Phe-Gly-NIHNH2 *2 HCI 12 H -Tyr -ala-Phe -Gly -N H -N H - Z-HCI 8 2 A találmány szerinti peptidek további hatásait patkányokban vizsgáltuk in vivo módszerekkel, az antinoci-: ceptív (a fájdalom megérzését gátló), prolaktin-felszaba- " dító és a gyomor-bélrendszer mozgékonyságát gátló, hatékonyság kiértékelése céljából. A peptideket 1 :2 arányú víz-etanol elegyben oldottuk, és a vizsgálatokat hím Sprague—Dawley patkányokon végezzük 4 mg/kg szubkután úton adagolt screen (szűrővizsgálati) dózissal (dózisonként körülbelül 10 állatta! végeztük a vizsgálatokat). (Haffner, Deutsch. Med. Worschr.,35, 731 [1929]). Az antinociceptív hatékonyság kiértékelése céljából az állatokat a vegyületekkel,illetve a vivőanyaggal kezeltük 60 perccel a farok alsó részének becsípése előtt. Az állató' akkor tekintettük a kezelés által védettnek (a fájdalommal szemben), ha a nociceplív ingerre való válasza 30 másodperccel később következett be („cut-off” idő). Meghatároztuk az EDS0 értéket olyan peptidek esetében, amelyek a 4 mg/kg szűrővizsgálati dózis alkalmazásakor hatásosak voltak. 3. táblázat A furokbecsipcsre adott válasz gátlása beadás után 60 perccel (ED50 mg/kg) Képlet ED50 H-Tyr-a!afhe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH2 1,2 Ii-Ty r-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NHMe 2 H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Hyp-Ser-NH2 0,7 H-Tyr-a!a-Phe-Gly-Tyr-Gly-Ser-NH2 4 H-Tyr-ala-P!;e-Gly-Phe-Pro-Ser-NH2 4 M -T y r-ala-Pí 1 e -Sár -T y r -Pro -Ser -NH 2 2,5 H-Tyr -ala -Phe -Gly -Phe -Uy p-Ser-N H2 0,8 H-Tyr-ala-Phe-GIy-Tyr(Bzl)-Hyp-Ser(Bz!)-NH2 4 A prolaktin-felszabadulásra gyakorolt hatás kiértékelése céljából az állatokat a vegyüietek beadagolása után 30 perccel (E. L. Lien és munkatársai: Life Sciences,/?, 837 [ 1976J). , A szérum-prolaklin szinteket standard RIA eljárással határoztuk meg, NIAMDD reagensek felhasználásával (Niswender, Chen, Midgley, Mettes, Bilis: Proc. Soc. Éxp. Biol. Med., 130, 793 [1969]). Az eredményeket a kontrollállatok prolaktin-felszabadulását meghaladó prolakt n százalékos értékében fejeztük ki. Az erős antinocicepiív hatású vegyüietek esetében a vizsgálatot alacsonyabb dózisszinten (0,5 mg/kg) végeztük. Az eredményeket a 4. táblázatban összegeztük. 5 10 ~v 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
