186744. lajstromszámú szabadalom • Eljárás béta-karbolin- 3-karbonsav-származékok előállítására
1 186 744 2 A kiszorító vizsgálatot az alábbi módon végeztük. Kezeletlen patkány előagyának 25 mmóios, 7,1 pllértékű kálium-dihidrogén foszfát-oldattal készített szuszpenziójának 0,50 ml-ét (5-10 mg szövet/minta) 40-60 percen keresztül 0°C hőmérsékleten inkubáltuk 3H-diazepammal (specifikus aktivitás: 14,4 Ci/mmól, 19 n mól) vagy 3 H-flunitrazepamma! (specifikus aktivitás 87 Ci/mmól, 1,0 nM). Inkubálás után a szuszpenziót „Whatman GF/C” üvegszál szűrőn átszűrtük, a maradékot hideg pufferrel kétszer mostuk, és a radioaktivitást szcintillációs számlálóval megmértük. A vizsgálatot megismételtük azzal a különbséggel, hogy a radioaktív jelzett benzodiazepin hozzáadása előtt a mintához annak a vegyüíctnek az adott mennyiségét vagy fölöslegét adtuk, amelynek a kiszorító képességét meg akartuk határozni. A kapott adatok alapján meghatározható az lC50-érték. Az ED50-érték a vizsgálandó vegyületnek az az adagja (mg/kg), amely élő agyban a fiunitrazcpam benzodiazepin-receptorokhoz való specifikus kötődését a kontroll érték 50 %-ára csökkentette. Az ilyen in vivo kísérletet az alábbi módon végeztük. Egércsoportoknak különböző adagokban, általában szubkután injiciáltuk a vizsgálandó anyagot. 15 perccel később az egereknek intravénásán 3H-fiunitrazepamot adtunk, és további 20 perc múlva az egereket elpusztítottuk, előagyhártyájukat cltávolítottuk, és szcintillációs számlálóval megmértük az előagyhártya radioaktivitását. Az adag-reakció görbékből meghatároztuk az ED50 értéket. A kapott adatokat az 1. táblázatban adjuk meg. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek egei eken agresszivitást gátló hatást fejtenek ki. Az agreszszic gátlását 20-22 g súlyú hím egereken (NMR Molíe- 5 gaard. Dánia) határoztuk meg. Az egereket 3 hétre műany tg ketrecekben elkülönítettük, és ha ezután két egei et ugyanabba a ketrecbe tettünk, azok spontán és csaknem azonnal megtámadták egymást. Ezt az agreszsziót hatásosan gátolja számos pszichoaktív gyógyszer, 10 beleértve a benzodiazepineket (Vaicelli, Mod. Probl. Pha macopsych., 1979., 14., 143-156.). A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek teljes métrékben gátolták az agresszivitást a Ruus Lassen által az Europ. J. Pha macol., 1978., 47.. 45—49. ismertetett vizsgálatban. 15 A vegyületekel szubkután és orálisan adtuk be, cs félórával később meghatároztuk az agresszivitást gátló hatást. A kapott adatok alapján kiszámítottuk az ED50- érteket. A mozgás koordinációjának gátlását is meghatároz- 20 tűk egereken 30 perccel a vegyület szubkután beadása után, az irodalomban leírt módszerrel (Buus Lassen és munkatársai, Acta pharmacol. et toxicol., 1971., 39., 1-16.)Az akut toxieitást egereken határoztuk meg úgy, 25 hogy feljegyeztük, 24 órán belül hány állat pusztult el. Az 1. táblázatban megadjuk néhány találmány szerinti eljrassal előállított vegyület és néhány trankviliáns vizsgálatakor kapott eredményeket. 30 I. táblázat Vizsgált anyag X általános képletű 3 H-Flunitrazepam megkötésének Agresszivitás Ataxia Akut vegyület, ahol gátlása gátlása (1/2 óra) (mozgás intoxieitás R3 R9 in vitro in vivo EDS0 koordinációja) LD50 ICso EDS0 EDS0 (mg/ml) (mg/kg se.) (mg/kg se.) (mg/kg) (mg/kg) ~OC2H5-H 1.4 60 4 >100 >500 —OC5 Hi 1-H 12 >250 50-NH(CH3)-H 100 25-NH(C„HS)-H 110 42 18 >100 >250-NH(izo-C3 H7)-H 150 23 75 -NH(CH,C6Hs)-H 17 >250-NH(C3H5)-H 44 38-NC2H5(C2Hs)-H 4300 82 35-NCH3(C«Hj )-H >4000 >250 —XI képletű csoport-11 3300 >250-XII képletű csoport-H 360 >250 -NH(CH2CH2OH)-II 200 56-NH(CH2COOC2Rs)-II 160 >250-NH(CH2CONH2) —XIII képletű-H 920 >250 csoport-11 >4000 >250-NIHCj Hj)-COOC2 Us 160 >100 Klórdiazepoxid („LIBRIUM"®) x 45 50 700 Diazepam („STESOLID”®) x 3 3 . 80 x a forgalomban levő injekciós készítmények alakjában beadva. 7
