186009. lajstromszámú szabadalom • Eljárás foszfolipid-preparátum előállítására az aktivált parciális tromboplasztin idő meghatározására szolgáló új eljáráshoz

1 56 0 09

A találmány tárgya eljárás nagyérzékenységű, stabil foszfolipid preparátum előállítására aktivált parciális tromboplasztin idő meghatározásához.

Az aktivált parciális tromboplasztin idő (APTI) meghatározása a véralvadásdiagnosztika két legfontosabb és leggyakrabban használt laboratóriumi vizsgáló módszerének egyike. Az APTI reagens felhasz- • itatásának az alábbi indikációs területei vannak:

I. Véralvadási faktorok csökkenésének vagy hiányának a kimutatása (Sirrídge, M. S. Laboratory 1 EvaJution of Haemostasis, Lea and Febiger, Philadelphia, Í974; Biggs, R. Human Blood Coagulation Haemostasis and Thrombosis, Blackwell, Oxford, 1976; Muszbek L. Laboratóriumi Diagnosztika 1980. VIí/2. 56; Austen, D, E. G. Rhymes, I. L. Laboratory Manual of Blood Coagulation, Blackwell, Oxford, 1974; Wolf, P. L. Coagulation, Schmer, G. and

Strandjord, P. E., kiadók, Acad. Press, New York,

17. oldal, 1973).

2. A normál alvadási folyamatot gátló „szerzett” inhibitorok kimutatása. (Shapiro, S. S., Hultin, M., Sem. Thromb., and Haemostas, 1975, /, 336, Feinstem, D. L, Rapaport, S. L, Prog, Haemostas Thromb. 1972, /, 75, Mueh, J. R., Herbst, K. D., Rapaport, S. L, Ann. Int, Med. 1980 , 92, 156).

3. A heparin terápia követése. (Banez, E. L, Triplett, Koepke, J. Am. J. Clin. Pathol. 1980, 74, 569).

A vizsgálati módszerek megbízhatóságának ellenőrzésére véralvadásdiagnosztikai körkontroílt végeztek az Országos Laboratóriumi Intézetben és 40 laboratórium adatai alapján megállapították, hogy az APTI meghatározások átlagos variációs koefficiense 23,8% (II. Táblázat).

Országos Laboratóriumi Intézet 1981/IV. Minőségi ellenőrző eredményei

Budapest, Pf, 112. SÎS9

II. Táblázat

I. minta

II. minta

1. Proíh/ombin %

Stmtméa teszttel n =2! x-86,9 s= 16,5 VK = 19,0°/.» x= 12,3% s = 3,3 VK = 26,8%

SckGtesmtí ji = 15 x = 82,l s = 16,7 VK = 20,3% x= 9,5% s = 2,l VK = 22,1%

Egyébméáuxrrd n= 4 x = 76,3 s= 17,8 VK = 23,3% x= 9,0% s = 2,2 VK = 24,4%

Prothrombin százalék átlagos hibája 21,2%

2. PTT idő {mteoőperc)

GödtecY*(AzteSm ^ n*=I4 x = 44 mp s = 6,0 VK= 13,6 7o x= 123 mp s = 29,6

VK = 24,0%

cent sántáimraI

M&feera*kátém n = l7 x ~ 46 mp s=7,4 VK = 16,1 7o x= 131 mp s = 49,0

VK = 37,4%

Î. Ftbámtén g/l

Ctaráacttíáai; ß» 5 z = 3,3 g/1 s = 0,23 VK = 7,0% x = 2,4 g/1 s = 0,15 VK = 6,3%

Eurer æt&gfcsf

n -il

EgylfcsdrGmirtsm a *10

x**5,l g/I s» VK = 41,0% x = 3,l g/1 s = VK = 32,0%

2,1

1,0

x = 3,0 g/1 s = 0,90 VK = 30,0% x = 2,3 g/l s = 0,60 VK = 26,0%

Fibrinogéri meghatározás átlagos hibája 24,8%

A WMíM rrim&k Verify-Gif él (Göciecke) készítmények toltak, gyárilag megadott értékei: f. Prot% 80—120% 10—12%

2. PTT ,<jó 42—54 mp 110—124 mp

3. írisrósöfiíe — —

kiS&4&&:**SíiimGk átlagérték, s = számolt szórás, VK - számolt variációs koefficiens,

n = értékelt vizsgálati szám Résztvevők 40 db területi laboratórium.

III. minta

x = 24,6% s = 5,3 VK = 21,5% x = 22,8% s = 3,9 VK= 17,1% x = 23,0% s = 3,7 VK= 16,0%

x = 85 mp s= 19,2 VK = 22,6%

x=89 mp s = 26,0 VK = 29,2%

x = 2,3 g/1 s = 0,27 VK= 11,7% x = 3,6 g/i s = 1,50 VK = 4!,Ő% x = 2,3 g/1 $=0,64 VK =27,8%

20—28% 63 —83 mp

Tekintettel a kapott eredményre, mely feltárta a meghatározások bizonytalanságát, célul tűztük ki egy olyan APTI reagens előállítását, melynek segítségéve az említett vizsgálatok standardizálhatók.

Az APTI reagensnek két lényeges alkotórésze van ezek egyike az Aktivátor, másika pedig a Parciális trombopiasztin.

Aktivátor: a véralvadás ün. kontakt fázisát (FXI FXII) valamilyen felületaktív anyaggal, például kao lin, celite vagy elfagsavval aktiválják (Sirridge, Bigg fentebb már említett munkái, továbbá Hunt, A. F Houghton, A. C., J. Med. Lab. Technoi. 1968, 25. 202; Lenahan, J. G., Philips, G. E., Clin, Chem 1966, 12, 269; Raînoff, O. D., Crum, J. D., J. Lab Clin. Med. 1964, 63, 359),

Parciális tromboplasztin: az X faktor és a protrombin aktiválódásához szükséges optimális katalizátor aktivitást és foszfolipid preparátum hozzáadásával biztosítják (Sirridge; Biggs; Lurie, A., Path, F. F., Schidt, S. S., Afr. M. J. 1968, 42, 438).

Az alvadás e lépései ugyanis foszfolipid micellumok felületén mennek végbe, a foszfolipid preparátum milyensége, reprodukálhatósága tehát döntő jelentőségű az adott APTI reagens szempontjából.

Az APTI reagensekhez a foszfolipid előállítása mindeddig az ún. Bell-Alton eljáráson alapul (Sirridge; Biggs; Bell. Alton, Nature 1959, 174, 870; Proctor, Rapaport, Am. J. Clin. Path. 1961, 31, 212). Ezek szerint a foszfolipid acetonnal extrahált, kicsapott és szárított nyúl, marha vagy emberi agyból elő-2