185954. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bisz-tetrazolil-metil-csoporttal helyettesített cefem-karbonsav-származékok előállítására
1 185 954 2 tot tartalmaz) készült oldatához hozzáadunk 2,28 g (5 mmól) 7-(0-formil-mandelamido)-3-acetoximetil-3-cefem-4-karbonsav-nátriumsót, és az oldatot 16 órán át körülbelül 60 'C és körülbelül 65 °C közötti hőmérsékleten keverjük. Utána szobahőmérsékletre hűtjük, és csökkentett nyomáson, körülbelül 6,5 ml térfogatra betöményítjük. A betöményített oldatot fordított fázisú szilikagélen nagynyomású folyadék-kromatográfiával tisztítjuk. Eluensként acetonitril:ecetsav:víz = 12:2:86 arányú elegyet használunk. 20 ml térfogatú frakciókat szedünk, és a kromatografálást ultraibolya abszorpció meghatározással követjük. A 94-107. frakciókat egyesítjük és fagyasztva szárítjuk. Ily módon 120 mg cím szerinti vegyületet kapunk. NMR-spektrum (90 MHz, DMSQ-d6): 5 3,84 (m, C-2 metiléncsoport), 4,54 (m, C-3' metiléncsoport), 5,26 (d, C-6H), 5,32 (s, a mandelamido-oldallánc metin-hidrogénatomja), 5,94 (q, C-7H), 6,24 (s, tetrazol-metiléncsoport), 7,4-7,8 (m, fenil-H), és 9,04 (d, 7-amin-H). 9. példa 7-[a- ( 4-Etil-piperazin-2,3-dion-l-il-karbonilamino )-a-( 4-hidroxi-fenil) -acetamido ]-3-[ l-( 1H- tetrazol-5-iI-metil)-lH-tetrazol-5-il-merkaptometil]-3-cefem-4-karbonsav 8,3 g (50 mmól) 4-hidroxifenil-glicin 75 ml tetrahidro-furánnal készült szuszpenziójához hozzáadunk 25 ml bisz-trimetil-szilil-acetamidot, és a szuszpenziót negyedórán át szobahőmérsékleten, majd 2,5 órán át 75 °C hőmérsékleten keverjük. Ekkor tiszta oldatot kapunk, amelyet 0 °C hőmérsékletre hűtünk és hozzáadunk 25 ml propilénoxidot, majd 11 g 4-etil-piperazin-2,3-dion-l-ilkarbonil-klorid 100 ml tetrahidro-furánnal készült oldatát. Ezután a reakcióelegyet 1 órán át 0 °C hőmérsékleten, majd 4 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezt követően az elegyhez 40 ml metanolt adunk, majd negyedórás keverés után az oldószert ledesztilláljuk. A ragacsos maradékot feloldjuk etilacetát és vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldat kétfázisú elegyében, a vizes részt leválasztjuk, etilacetáttal mossuk, megszűrjük és 0 °C hőmérsékletre hütjük. 200 ml tiszta etil-acetátot rétegezünk rá, és pH-ját tömény sósavval 1,9-re állítjuk. A szerves részt elválasztjuk, a vizes részt etil-acetáttal egyszer kimossuk, és két utóbbi etil-acetátos részt egyesítve nátrium-szulfáton megszárítjuk. Az oldószert ledesztillálva, 6,7 g (hozam: 40%) a-(4-etil-piperazin-2,3-dion-1 -il-karbonil-amino)-4-hidroxi-fenil-ecetsavat kapunk. 670 mg (2 mmól) fenti sav, és 306 mg hidroxibenzotriazol 10 ml tetrahidro-furánnal készült oldatát 0,5 g molekulaszűrővel 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd 0 °C hőmérsékletre hűtjük, hozzáadunk 450 mg diciklohexil-karbodiimidet, és a keverést további 20 percig folytatjuk. Utána a molekulaszűrőt és a kivált diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, s a szűrletet hozzáadjuk 750 mg (2 mmól) l-(lH-tetrazol-5-il-metil)-lH-tetrazol-5-il-merkaptán és 0,52 ml trietil-amin 5 ml tetrahidro-furán és 5 ml viz elegyével készült, 0 °C hőmérsékletű oldatához. A reakcióelegyet körülbelül 16 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd a tetrahidro-furánt csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A betöményített oldatot 20 ml vízzel hígítjuk, és pH-ját 45%-os, vizes kálium-foszfát-oldattal 7,0-ra állítjuk. Ezután 20 ml etil-acetáttal mossuk, a vizes részt megszűrjük, 0 °C hőmérsékletre hűtjük és 20%-os sósavval pH = 1,9-re savanyítjuk. Ekkor a termék ragacsos anyag formájában kiválik. A felülúszót leöntjük, a ragacsos anyaghoz 25 ml tiszta vizet adunk, és az elegyet negyedórán át dörzsölgetjük, míg a termék világosbarna színű, szilárd anyaggá nem alakul. Ezt kiszűrjük, vízzel mossuk és szobahőmérsékleten, csökkentett nyomáson megszárítjuk. Ily módon 750 mg cím szerinti vegyületet kapunk. A terméket az alábbiak szerint tisztítjuk: 700 mg fenti termék 6 ml, 0,05 mólos ammónium-acetáttal készült szuszpenziójához 2 csepp tömény ammónium-hidroxid-oldatot adva, az oldatlan részek beoldódnak. Az oldatot felvisszük egy C-18 fordított fázisú szilikagéllel töltött nagynyomású folyadékkromatográfiás oszlopra, és 240 psi nyomáson, acetonitril:ecetsav:víz = 12:2:86 arányú eleggyel kromatografáljuk. 20 ml térfogatú frakciókat szedünk. A 104-120. frakciókat egyesítjük, és az acetonitrilt ledesztilláljuk. A vizes maradékot fagyasztva szárítjuk, ily módon 87 mg tisztított terméket kapunk, amely kis menyiségü ecetsavat tartalmaz. NMR-spektrum (90 MHz, DMSO-d6): 1,25 (t, a 4-etilcsoport metil-részének protonjai), 3,4-4,2 (m, a piperazingyűrű és a C-2 metiléncsoport protonjai), 4,46 (m, C-3' metiléncsoport), 5,14 (d, C-6H), 5,62 (d, a 4-hidroxi-fenil-acetilcsoport metin protonja), 5,88 (q, C-7H), 6,08 (s, tetrazol-metiléncso■ port), 7,10 (m, 4-hidroxi-fenil-H), 9,50 (d, a-amid-H) és 9,91 (d, G-7 amid-H). 10. példa szin-7$-[ a- ( Metoxi-imino )-a- ( 2-furil ) -acetamido ]-3-[l'( 1 H-tetrazol-5-il-metil )-lH-tetrazol-5-il-merkaptometil]-3-cefem-4-karbonsav 7ß-[a-(Metoxi-imino)-a-(2-furil)-acetamido]-3-acetoxi-metil-3-cefem-4-karbonsav-nátriumsó, egyenértéknyi mennyiségű l-(lH-tetrazol-5-ilmetil)-lH-tetrazol-5-il-merkaptán és egyenértéknyi mennyiségű nátrium-hidrogén-karbonát vizes oldatát körülbelül 24 órán át körülbelül 55 °C hőmérsékleten tartjuk. Utána az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, és a terméket fordított fázisú szilikagélen végzett nagynyomású folyadékkromatográfiával tisztítjuk. A további példákban a találmány szerinti cefalosporin-származékok előállításához használt bisztetrazolilmetil-merkaptánok előállítását szemléltetjük. 11. példa 1-Cianometil-l H-tetrazol-5-il-merkaptán a) lépés Azidoecetsav-etil-észter 490 g (4 mól) klórecetsav-etil-észter 1500 ml acetonitrillel készült oldatához hozzáadunk 260 g (4 mól) nátrium-azidot, és az elegyet 20 órán át 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 11
