185778. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a pregnán-sorhoz tartozó, 17-helyzetben szubsztituált 11béta-hidroxi-szteroidok előállítására
1 185 778 2 dáspontú 21 -acetoxi-17a-etoximetoxi-4-pregnen- 3,20-diont kapunk. b) 2 literes Erlenmeyer lombikba töltött, IX Comsteep liquort, 1,25% szójaport tartalmazó, pH = 6,2-re beállított steril tápoldatának 1 ml-ét Curvularia lunata NRRL 2380-nal oltjuk be, és 30 ’C-on 72 órán át 175 fordulat/perc sebességgel rázzuk (oltó-tenyészet). 50 literes fermentáló edénybe 29 liter fenti steril tápközeget töltünk, és azt 1 liter Curvularia lunata oltó-tenyészettel oltjuk be, majd 24 órán át 30 *C- on, 2 m3/óra levegőztetés közben tenyésztjük (előfermentációs tenyészet). 36 liter fent-leírt steril tápoldatot 50 literes fermentáló edényben 4 liter Curvularia lunata előfermentáló tenyészettel oltunk be, és 220 fordulat/perc sebességgel keverve tenyésztünk. Ezután a kultúrához 10 g 21-acetoxi-17a-etoximetoxi-4-pregnen'3,20-diont adunk 200 ml etilénglikolmonometiléterben. A 10. órától a pH-t 6,5 és 7,0 között tartjuk. További 4 óra múlva 200 ml etilénglikolmonoetiléterben újabb 10 g 21-acetoxi-17a-etoximetoxi- 4-pregnen-3,20-diont adunk hozzá, és 23 órán át a megadott körülmények között fermentáljuk. A ferment-kultúrát háromszor 101 etilénkloriddal extraháljuk, majd az lb) kiviteli példában leírt módon feldolgozzuk. 13,8 g 153-154*C olvadáspontú 11 ß-21 -dihidroxi-17a-etoximetoxi-4-pregnen-3,20-diont kapunk. 7. példa a) 25 g 21-acetoxi-17a-hidroxi-4-pregnen-3,20- diont 200 ml formaldehiddipropilacetállal és 35 320 ml metilénkloriddal szuszpendálunk, és- 20 °C-ra hűtünk. Keverés közben 49,3 g foszforpentoxid és 97 g kovasavgél keverékét adjuk hozzá, és 22 órán át - 20 "C-on keverjük. Az oldatot leszűrjük, és trietilaminnal semlegesítjük. A meti- 40 lénkloridot vákuumban ledesztilláljuk, és a formaldehiddipropilacetálos fázist a kiváló olajról leöntjük. További oldószer vákuumban végzett ledesztillálása során 19 g 145-147 *C olvadáspontú 21-acetoxi-17a-propoximetoxi-4-pregnen-3,20-dion kris- 45 tályosodik ki. b) 10 g 21-acetoxi-17a-propoximetoxi-4-pregnen-3,20-diont 1 g Tween 80-nal és háromszoros mennyiségű vízzel KDL típusú Dyno-malomban (Backofen baseli cég gyártmánya) megőrlünk, és az 50 őrleményt 1 %-os H202-val legalább 4 órán át sterilizáljuk. A 13b) kiviteli példában leírt módon rázólombikban és előfermentáló edényben Curvularia lunata 2380-at tenyésztünk és beoltjuk vele a főfermen- 55 tort. Ezt a fermentort a 13b) kiviteli példában leírt módon kezeljük, és az ugyancsak 13b) példában leírt körülmények között 10 órán át tenyésztjük. Ezután a 21-acetoxi-17a-propoximetoxi-4-pregnen-3,20-dion őrleményt hozzáadjuk a kultúrához, 60 és további 44 órán át fermentáljuk, miközben a pH-t 6,4 és 6,7 között tartjuk. A fermentációs kultúrát a 13b) kiviteli példában leírt módon dolgozzuk fel. 6,5 g 134/135-136 °C olvadáspontú 1 lß,21-dihidroxi-17a-propoximetoxi-4-pregnen-3,20-diont kapunk. 8. példa a) 50 g 21 -acetoxi-17a-hidroxi-4-pregnen-3,20- diont 500 ml formaldehiddibutilacetállal és 500 ml metilénkloriddal szuszpendálunk, és - 35 *C-ra hűtünk. Keverés közben 74 g foszforpentoxidot és 150 g kovasavgélt adunk hozzá, és 30 órán át - 35 "C-on keverjük. Az oldatot szűrjük, és trietilaminnal semlegesítjük. A metilénkloridot vákuumban ledesztilláljuk, és a formaldehiddibutilacetálos fázist leöntjük a kivált olajról. További oldószer vákuumban végzett ledesztillálása során 38,7 g 123,5-124,5 °C olvadáspontú 21-acetoxi-17a-butoximetoxi-4-pregnen-3,20-dion kristályosodik ki. b) 8 g 21 -acetoxi-17a-butoximetoxi-4-pregnen- 3,20-diont 0,8 g Tween 80-nal a 14b) kiviteli példában leírt módon megőrölünk. Rázólombikban tenyészkultúraként, előfermentálóban és főfermentálóban a 13b) kiviteli példában leírt módon Curvularia lunata NRRL 2380-at tenyésztünk és fermentálunk. A főfermentálás 10. órájában hozzáadjuk a szubsztrátumot és további 50 órán át fermentáljuk. A fermentációs kultúrát a 13b) kiviteli példában leírt módon feldolgozva 3,7 g 79—81 °C olvadáspontú 11 ß,21 -dihidroxi-17a-butoximetoxi-4-pregnen-3,20-diont kapunk. 9. példa a) 10,60 g 21-acetoxi-6a-fluor-17a-hidroxi-4- pregnen-3,20-diont 265 ml metilénkloridban és 47,7 ml formaldehiddimetilacetátban oldunk. Az oldathoz 7,95 g foszforpentoxidot és 15,9 g kovasavgélt adunk részletekben, és az elegyet 90 percig nitrogén alatt, szobahőmérsékleten keverjük. Az oldatot leszűrjük, és 2,1 ml trietilamint adunk hozzá. Az oldószert ledesztilláljuk, és így 7,6 g 161-167 *C olvadáspontú 21-acetoxi-6a-fluor-17ametoximetoxi-4-pregnen-3,20-diont kapunk. b) A 13b) kiviteli példában leírt módon Curvularia lunata NRRL 2380-at rázólombikban, elő- és főfermentálóban tenyésztünk. A főfermentálás 10. órájában 100 ml etilénglikolmonometiléterben 5 g 21 -acetoxi-6a-fluor-17a-metoximetoxi-4-pregnen-3,20-diont adunk hozzá. Ettől az időponttól kezdve a pH értékét 6,5 és 7,0 között tartjuk. A 14. órában mégegyszer hozzáadunk 100 ml etilénglikolmonometiléterben 5 g 21-acetoxi-6a-fluor-17a-metoximetoxi-4-pregnen-3,20-diont, és az elegyet további 26 órán át fermentáljuk. A fermentációs kultúrát a 13b) példában leírt módon dolgozzuk fel. 4,2 g 190-192 °C olvadáspontú 11 ß,21 -dihidroxi-6a-fluor-metoximetoxi-4- pregnen-3,20-diont kapunk. 10. példa a) 43 g 3ß,21-diacetoxi-17a-hidroxi-16ß-metil- 5-pregnen-20-ont 800 ml formaldehiddimetilacetál-5 10 15 20 25 30 6
