185778. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a pregnán-sorhoz tartozó, 17-helyzetben szubsztituált 11béta-hidroxi-szteroidok előállítására
1 185 778 2 ban oldunk, és - 15 'C-ra hűtünk. Adagokban 43 g foszforpentoxid és 86 g kovasavgél keverékét adjuk hozzá, és az elegyet 15 percig - 15 *C-on keverjük. Az oldatot ezután lehűtjük szobahőmérsékletre, trietilaminnal semlegesítjük, és az oldószert vákuumban ledesztilláljuk. A maradékot metanolból átkristályosítjuk. 31,5 g 117—118 “C olvadáspontú 3ß,21 -diacetoxi-17a-metoximetoxi-16ß-metil-5- pregnen-diont kapunk, melynek olvadáspontja 117-118’C. b) Az lb) kiviteli példában leírt módon Flavobacterium dehydrogenans ATCC 13 930-at tenyésztünk, és fermentálunk. A 7. órában a kultúrához 0,2 g 3ß,21-diacetoxi-17a-metoximetoxi-16ßmetil-5-pregnen-20-on dimetilformamiddal készült 4 ml steril oldatát adjuk, és további 65 órán át rázzuk. A fermentáció elvégzése után a kultúrát az lb) kiviteli példában leírt módon dolgozzuk fel. 163 mg 126/128—129 °C olvadáspontú 21 -hidroxi-17ametoximetoxi-16ß-metil-4-pregnen-3,20-diont kapunk. c) Az le) kiviteli példában leírt módon Curvularia lunata NRRL 2380-at tenyésztünk, és fermentálunk. A 7. órában 50 mg 21-hidroxi-17a-metoximetoxi-16ß-metil-4-pregnen-3,20-dion 1 ml, dimetilformamiddal készült steril oldatát adjuk hozzá, és további 65 órán át fermentáljuk. A fermentációs kultúrát az lb) kiviteli példában leírt módon dolgozzuk fel. 34,5 mg llß,21-dihidroxi-17a-metoximetoxi-16ß-metil-4-pregnen-3,20-diont kapunk, melynek olvadáspontja 204/205-206 °C. 11. példa a) 29,1 g 21-acetoxi-6-klór-17a-hidroxi-4,6- pregnadien-3,20-diont 730 ml metilénkloridban és 131,0ml formaldehiddimetilacetálban oldunk. Hozzáadjuk 22,12 g foszforpentoxid és 44 g kovasavgél keverékét részletekben, s a reakcióelegyet 2,5 órán át nitrogén alatt szobahőmérsékleten keverjük. Az oldatot leszűrjük, és 5,8 ml trietilamint adunk hozzá. Az oldószert ledesztilláljuk, és a maradékot aktívszén és 1 % trietilamin tartalmú metanolból átkristályosítjuk. 15,6 g 183-186 °C olvadáspontú 21 -acetoxi-6-klór-17a-metoximetoxi-4,6- pregnadien-3,20-diont kapunk. b) Curvularia lunata NRRL 2380-at a 13b) kiviteli példában leírt módon rázólombikban, elő- és főfermentálóban tenyésztünk. A főfermentálás 10. órájában 60 ml etilénglikolmonometiléterben oldott 3 g 2l-acetoxi-6-klór-17a-metoximetoxi-4,6- pregnadien-3,20-diont adunk hozzá. A pH értéket ettől az időponttól kezdve 6,4 és 6,7 között tartjuk, és további 20 órán át fermentálunk. A fermentációs kultúrát a 13b) kiviteli példában leírt módon dolgozzuk fel, és 1,8 g 234/235-236 *C olvadáspontú 11 ß,21 -dihidroxi-6-klór-17a-metoximetoxi-4,6-pregnadien-3,20-diont kapunk. 12. példa a) 38,85 g 21-acetoxi-17a-hidroxi-4-pregnen-3,20-diont 235 ml formaldehiddiizoprópilacetállal és 500 ml metilénkloriddal keverünk, és - 20 °C-ra hűtünk. Keverés közben 75 g foszforpentoxid és 150 g kovasavgél keverékét adjuk az elegyhez, és azt 20 órán át -20“C-on keverjük. Az elegyet leszűrjük, metilénkloriddal mossuk, és pH-ját trietilaminnal 9-re állítjuk be. Az oldószert vákuumban ledesztilláljuk, és a maradékot metilénkloridban oldjuk. Az oldatot félig telített nátriumklorid oldattal mossuk, nátriumszulfáton szárítjuk, aktívszénnel kezeljük, kovasavgélen leszívatjuk, és vákuumban besűrítjük. A maradékot kovasavgélen toluol-etilacetát elegyekkel kromatografáljuk/35,8 g 21 -acetoxi-17a-izopropoximetoxi-4-pregnen-3,20- diont kapunk, melynek olvadáspontja pentánból végzett kristályosítás után 111-117 ‘C. b) Curvularia lunata NRRL 2380-rat a 13b) kiviteli példában leírt módon rázólombikban, elő- és főfermentálóban tenyésztünk. A főfermentálás 10. órájában 240 ml etilénglikolmonometiléterben 12 g 21-acetoxi-17a-izopropoximetoxi-4-pregnen-3,20- diont adunk hozzá. Ettől az időponttól a pH értéket 6,5 és 7,0 között tartjuk, és további 15 órán át fermentáljuk. A fermentációs kultúrát a 13b) kiviteli példában leírt módon dolgozzuk fel. 8,4 g 71 "C/73-78 °C olvadáspontú 11 ß,21 -dihidroxi- 17a-izopropoximetoxi-4-pregnen-3,20-diont kapunk. c) A 11. kiviteli példában leírt módon Arthrobacter simplex ATCC 6946-ot tenyésztünk tenyésztő és fermentáló lombikban. A 6. órában a fermentációs lombikba 50 mg 11 ß,2 l-dihidroxi-17a-izopropoximetoxi-4-pregnen-3,20-dion etiléngiikolmonometiléteres steril oldatának 1 ml-ét adjuk be, és további 42 órán át fermentálunk. A fermentációs kultúrát az lb) példában leírt módon dolgozzuk fel, és 32 mg 58/63-65 °C olvadáspontú 1 lß,21-dihidroxi-17a-izopropoximetoxi-1,4-pregnadien-3,20- diont kapunk. 13. példa a) Flavobacterium dehydrogenans ATCC 13 930-at az 56c) kiviteli példában leírt módon rázóiombikban, elő- és főfermentálóban tenyésztünk. A főfermentálás 24. órájában 500 ml dimetilformamidban oldott 19,5 g 16-metil6n-3ß,21-diacetoxi- 17a-metoximetoxi-5-pregnen-20-ont adunk a tenyészethez, és további 28 órán át fermentáljuk. A fermentációs kultúrát a 13b) kiviteli példában leírt módon dolgozzuk fel, és 15,5 g 147/150-151 °C olvadáspontú 16-metilén-21-hidroxi-17a-metoximetoxi-4-pregnen-3,20-diont kapunk. c) Curvularia lunata NRRL 2380-at a 13b) kiviteli példában leírt módon rázólombikban, elő- és főfermentálóban tenyésztünk. A főfermentálás 10. órájában 400 ml etilénglikolmonometiléterben oldott 20 g 16-metilén-21-hidroxi-17a-metoximetoxi- 4-pregnen-3,20-diont adunk a tenyészethez. Ettől az időponttól kezdve a pH-értéket 6,4 és 6,7 között tartjuk, és a tenyészetet tovább fermentáljuk. A fermentációs kultúrát a 13b) kiviteli példában 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
