185778. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a pregnán-sorhoz tartozó, 17-helyzetben szubsztituált 11béta-hidroxi-szteroidok előállítására
1 185 778 2 5 ml-ét adjuk, és 30 °C-on további 65 órán át rázzuk 175 fordulat/perc sebességgel. A bekövetkezett •fermentáció után a kultúrát 100 ml etilénkloriddal extraháljuk, az extraktumot vákuumban bepároljuk, a maradékot alumíniumoxidon végzett kromatografálással tisztítjuk. 402 mg 152-153 °C olvadáspontú 21 -hidroxi-17a-metoximetoxi-4-pregnen-3,20-diont kapunk. c) 2 literes Erlenmeyer lombikba helyezett, 2% glükózt és 2% Cornsteep liquort tartalmazó, 6,5 pH-ra beállított 1 liter steril tápoldatot beoltunk Curvularia lunata NRRL 2380 feliszapolt szárazkultúrájával, és 30°C-on 60 órán át 175 fordulat/perc sebességgel rázzuk (oltótenyészet). 500 ml-es Erlenmeyer lombikba 1,0% Cornsteep liquort és 1,25% szójaport tartalmazó és 6,2 pH-ra beállított steril tápközeget 10 ml Curvularia lunata oltótenyészettel oltunk be, és 30 °C-on 7 órán át 175 fordulat/perc sebességgel rázzuk. Ezután a tenyészethez 30 mg 21-hidroxi-17a-metoximetoxi-4- pregnen-3,20-dion dimetilformamiddal készült steril oldatának 0,6 ml-ét adjuk, és további 65 órán át fermentáljuk a megadott körülmények között. A fermentációs tenyészetet az lb) példában leírt módon dolgozzuk fel, és 27 mg 180-182 °C olvadáspontú 11 ß,21 -dihidroxi-17a-metoximetoxi-4- pregnen-3,20-diont kapunk. 2. példa a) 50 g 17ct-hidroxi-4-pregnen-3,20-diont a 3a) kiviteli példában leírt körülmények között 15 g metilviniléterrel reagáltatunk. A reakcióelegyet feldolgozzuk, és 51,2 g'l 15-152 °C olvadáspontú 17a-( 1 'metoxietoxi)-4-pregnen-3,20-diont kapunk. b) 0,1 g 17a-(l'-metoxietoxi)-4-pregnen-3,20- dion 1 ml dimetilformamiddal készült oldatát az le) kiviteli példában leírt módon Curvularia lunata NRRL 2380 kultúrával fermentáljuk, és a reakcióelegyet feldolgozzuk. így 1 lß-hidroxi-17a-(l'-metoxietoxi)-4-pregnen-3,20-diont (olvadáspont 85-105 °C) kapunk. 3. példa a) 50 g 3ß,21-diacetoxi-17a-hidroxi-5-pregnen-20- ont az la) kiviteli példában leírt körülmények között 150 ml metilénkloridban 380 g formaldehidbisz-glikolmonometiléteracetállal, 50 g foszforpentoxiddal és 100 g kovasavgéllel reagáltatunk. A reakcióelegyet feldolgozzuk, és 45,8 g 160-161 °C olvadáspontú 3ß,21 -diacetoxi-17a-(2'-metoxietoximetoxi)-5-pregnen-20-ont kapunk. b) Az lb) kiviteli példában leírt körülmények között 0,5 g 3ß,21-diacetoxi-17a-(2'-metoxietoximetoxi)-5-pregnen-20-ont Flavobacterium dehidrogenans ATCC 13 930 kultúrával reagáltatjuk. A reakcióelegyet feldolgozzuk, és üveges tömeg formájában 390 mg 21 -hidroxi-17a-(2'-metoxietoximetoxi)-4-pregnen-3,20-diont kapunk. c) Az le) kiviteli példában leírt módon 30 mg 21- hidroxi-17a-(2'-metoxietoximetoxi)-4-pregnen-3,20-diont Curvularia lunata NRRL 2380 kultúrához adjuk, és a reakcióelegyet feldolgozzuk. 24 mg 143-147 °C olvadáspontú 11 ß,21-dihidroxi-17a(2'-metoxi-etoxi-metoxi)-4-pregnen-3,20-diont kapunk. 4. példa 2 literes Erlenmeyer lombikba 500 ml 0,1 % élesztőextraktumot, 0,5% Cornsteep liquort, 0,1% keményítőcukrot tartalmazó és pH = 7-re beállított tápoldatot töltünk, és ezt feliszapolt Arthrobacter simplex ATCC 6946 száraztenyészettel oltjuk be, majd 30°C-on 48 órán át 190 fordulat/perc sebességgel keverjük (oltó-tenyészet). 500 ml-es Erlenmeyer lombikba töltött 90 ml előzőekben leírt tápközeget 10 ml Arthrobacter simplex oltó-tenyészettel oltunk be, és 30 °C hőmérsékleten 6 órán át 165 fordulat/perc sebességgel rázunk. Ezután a kultúrához 50 mg 1 lß,21-dihidroxi- 17a-metoximetoxi-4-pregnen-3,20-dion dimetilformamiddal készült 1 ml steril oldatát adjuk, és további 24 órán át fermentáljuk. A fermentációs kultúra lb) kiviteli példában leírt módon végzett feldolgozása után 44,5 mg 229/230— 231 °C olvadáspontú llß,21-dihidroxi-17a-metoximetoxi-1,4-pregnadien-3,20-diont kapunk. 5. példa 2 literes Erlenmeyer lombikba töltött, 1 % élesztő extraktumot (Difco), 0,45% dinátriumhidrogénfoszfátot, 0,34% káliumhidrogénfoszfátot, 0,2% Tween 80-at tartalmazó, pH = 6,7-re beállított 500 ml steril tápoldat Nocardia globerula ATCC 9536 feliszapolt szárazkultúrájával oltunk be, és 30 °C-on 72 órán át 190 fordulat/perc sebességgel rázunk (oltó-tenyészet). 2 literes Erlenmeyer lombikban lévő, 2,0% Cornsteep liquort, 0,3% diammóniumhidrogénfoszfátot, 0,25% Tween 80-at tartalmazó és pH = 6,5-re beállított 950 ml steril tápoldatot 50 ml Nocardia globerula oltó-tenyészettel oltunk be, és 30°C-on 24 órán át 190 fordulat/perc sebességgel rázunk. Ezután a kultúrához 0,25g 1 lß,21-dihidroxi- 17a-( 1 '-metoxietoxi)-6a-metil-4-pregnen-3,20- dion dimetilformamiddal készült steril oldatának 5 ml-ét adjuk, és további 72 órán át fermentáljuk. A fermentációs kultúrát az lb) kiviteli példában leírt módon feldolgozva 0,21 g 173 °C olvadáspontú 11 ß,21 -dihidroxi-17a-( 1 '-metoxietoxi)-6a-metil- 1,4-pregnadien-3,20-diont kapunk. 6. példa a) 50 g 21 -acetoxi-17a-hidroxi-4-pregnen-3,20- diont 600 ml formaldehiddietilacetállal és 600 ml metilénkloriddal szuszpendálunk és (-30) - (-40)°C-ra hűtünk. Keverés közben az elegybe 75 g foszforpentoxidot és 150 g kovasavgélt adunk, és további 30 órán át - 30 “C hőmérsékleten keverjük. Az oldatot leszűrjük, és trietilaminnal semlegesítjük. Az oldószer ledesztillálása után metanollal mégegyszer ledesztilláljuk, és a maradékot metanolból átkristályosítjuk. 35,9 g 137-139 °C olva-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
