185778. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a pregnán-sorhoz tartozó, 17-helyzetben szubsztituált 11béta-hidroxi-szteroidok előállítására
1 _ 185*778 2 módszerekkel történhet, fgy például a A4-szteroidokat a szokásos körülmények között Arthrobacter simplex-szel 1-helyzetben dehidrogénezni lehet. Az így nyert termék egyszerű módon elhasíthatók a megfelelő 11 ß, 17a,21 -trihidroxiszteroidokká 5 is. A találmány szerinti eljárással előállítható új, Id általános képletű kortikoidok, mint ezt említettük, helyi alkalmazása során igen jó gyulládásgátló hatásukkal tűnnek ki, és igen előnyös a kívánt helyi 10 hatás és a nem kívánt szisztemikus mellékhatások közötti arány. A helyi hatás érszűkítő (vaso-konstrikciós) teszttel a következő módon határozható meg. A tesztet mindkét nemű 8-8 egészséges, olyan 15 próbaegyeden (patkány) végezzük, amelyek a legutóbbi 2 hét során lokális kortikoszteroid-kezelést nem kaptak. A kísérleti egyedek hátán a Stratum comeumot a Stratum lucidumig eltávolítjuk (20-40 Tesafilm-leszakítás), és a 4 cm2 nagyságú területek- 20 re egyenként 0,1 g készítményt viszünk fel. Annak elkerülése érdekében, hogy ugyanaz a készítmény mindig azonos bőrfelületekre kerüljön, a felvitelt rotáló sorrendben végezzük. Az érszűkítő hatást 4 és 8 óra elteltével vizuálisan a következő számozás 25 szerint értékeljük : 1 = abszolút elhalványodás, 2=csekély maradék erythema, 3 = közepes erythema, a lefejtett, kezeletlen és nem károsodott bőr középső részén pír, 4=erythema enyhe világosodással, 5 = az erythema nem halványodik el és nem 30 erősödik. Az egyes egyedeken a vizsgált készítménnyel elért hatást fentiek szerint egyenként megállapítjuk. Referencia anyagként mindegyik kísérletsorozatban a difluokortolon-21-valerianátot (6a,9a-diflu- 35 or-11 ß-hidroxi-16a-metil-21 -valeriloxi-1,4-pregnadien-3,20-diont = DFV) használjuk. Minden esetben meghatározzuk a DFV és a vizsgált hatóanyag átlagos hatása közötti, A különbséget egy-egy kísérletsorozaton belül. A pozitív A- eltérések azt jelentik, hogy a vizsgált anyag hatásosabb, a negatív A-eltérések azt, hogy a vizsgált anyag kevésbé hatásos, mint a DFV. Az alábbi táblázatok 0,1 ppm hatóanyagot tartalmazó készítménnyel kezelt kísérleti egyedeken észlelt teszt-eredményeket tüntetik fel. A vegyületek szisztemikus hatása az adjuvánsödéma teszttel a következőképpen határozható meg: 130-150 g testsúlyú SPF-patkányok jobb hátsó lábába gyulladás előidézése céljából 0,5%-os Mycobacterium butyricum szuszpenzió (az amerikai Difco cég gyártmánya) 0,1 ml-ét iniciáljuk. Az injekció előtt lemérjük a patkányok lábának térfogatát. 24 óra eltelte után ezt a lábtérfogatot az ödéma mértékének megállapítása érdekében újra lemérjük. Ezután a kísérleti állatoknak orálisan vagy szubkután a vizsgált anyag különböző mennyiségeit adjuk be 29% benzilbenzoátból és 71% ricinusolajból álló keverékben oldott formában. A lábtérfogatot további 24 óra múlva ismét megmérjük. A kontroll állatokat ugyanígy kezeljük, azzal a különbséggel, hogy azoknak vizsgálandó hatóanyagot nem tartalmazó benzilbenzoát-ricinusol^ elegyet adunk be. A kapott lábtérfogat-értékekből a szokásos módon meghatározzuk a vizsgálati anyag azon menynyiségét, amely ahhoz szükséges, hogy a kísérletileg előidézett lábödéma 50%-os térfogatcsökkenését idézze elő. Az alábbi táblázatokban ezeket a teszt-eredményeket is feltüntetjük, mégpedig oly módon, hogy a mindenkori, találmány szerinti eljárással előállított anyagokat a struktúr-analóg ismert kortikoidokat tartalmazó kereskedelmi készítményekkel hasonlitjuk össze. 1. láblázat Hidrpkortizon-származékok teszt-eredményei Sorszám Anyag Érszűkítési teszt Adjuváns ödéma teszt mg/kg állatsúly A 4 óra után A 8 óra után EDS0 EDJ0 orálisan szubkután 1 17a-Butiriloxi-11 ß,21 -dihidroxi-4-pregnen-3,20- dion (hidrokortizon-17-butirát)-0,2-0,3 54 13 2 11 ß,21 -dihidroxi-17a-metoxi-metoxi-4-pregnen- 3,20-dioh + 0,3 + 0,7 67 13 3 17a-etoximetoxi-11 ß,21 -dihidroxi-4-pregnen-3,20- dion 0,0 + 0,7 14,5 4 11 ß, 21 -dihidroxi-17a-propoximetoxi-4-pregnen- 3,20-dion + 0,4 + 0,4 kb. 10 5 11 ß,21 -dihidroxi-17a-izopropoximetoxi-4-pregnen-3,20-dion + 0,9 + 0,5 30 (42%) 6 17a-butoximetoxi-11 ß,21 -dihidroxi-4-pregnen- 3,20-dion + 0,9 + 0,6 20 7 11 P,21 -dihidroxi-17a-(2'-tetrahidropiraniloxi)-4- pregnen-3,20-dion + 0,8 + 0,6 12 3
