185603. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rosszindulatú daganatos sejtek kimutatására
1 185 603 2 szabad a recognin specifikus, a célnak megfelelő fizikaikémiai tulajdonságait megváltoztatni. A recognin-komplexek és hordozóik alkalmasak kemoreciprokaik előállítására, elválasztására és azonosítására bármely biológiai rendszerben, mellyel érint- 5 kezésbe kerülnek. A recognin-hordozó komplex segítségével kemoreciprok-prekurzorának termelését is fokozhatjuk bármilyen biológiai rendszerben, melybe'bevezetjük. A kemoreciprokok egyik osztálya az antirecogninok, 10 azaz az anti-astrocytin és az anti-malignin. Előállításuk ügy történhet, hogy a recognint beoltjuk a biológiai rendszerbe. Egy immunológiailag hatásos recognin dózist testszövettel vagy testfolyadékkal hozunk érintkezésbe, úgy, hogy az antitestek termelésére irodalomból ismert 15 módszerrel antitest választ kapjunk. Az anti-recogninok például diagnosztikai, táp- és terápiás szerek specifikus sejtekhez vagy támadási helyekhez történő szállítására használhatók egy biológiai rendszerben, az említett szert anti-recogninnal képezett komplex formájában vezetjük 20 a biológiai rendszerbe. Az anti-recogninok segítségével a szövettani metszetekben a tumorsejtek jelenlétét oly módon lehet diagnosztizálni, hogy az anti-recognint egy jelzett anyaggal, például festékkel vagy radioaktív anyaggal együtt a metszetre viszünk és csak a tumor- 25 sejteknél lép fel festődés vagy radioaktív jelzés. Utóbbira vonatkozik jelen találmányunk. Az anti-recognin további felhasználása más kemoreciprokok, például TAG (lásd alábbiakban) hozamának növelése emlősből oly módon, hogy egy emlőst vagy más biológiai rendszert immunoló- 30 giailag hatásos mennyiségű recogninnal oltunk be. Régebben a glükoprotein komplexet agyszövetből állítottak elő és erre képeztek antitesteket. A 10B glükoprotein néven ismert, Tay-Sachs betegségben szenvedő beteg agyából termelt izolált anyagokat nyúlba oltottunk ^5 és így antitesteket hoztunk létre. Ezeket a Tay-Sachs antitesteket agytumorok immunofluoreszcens vizsgálatához használtuk és csak a reakcióképes normális nemtumoros gliákat és a nem a tumor-gliákat festették meg az antitestek. Ezzel szemben, amikor astrocytint állítottunk elő tumorszövetből és az astrocytin antitestjeit (anti-astrocytint) képeztünk és az agy immunofluoreszcens vizsgálatainál használtuk fel, akkor csak a tumor gliát festette meg az anti-astrycitin a normális (nemtumoros) gliát sem. Így tehát szövet-eredet, az antitest természete és a festett sejtek specifikus típusa szerint az anti-Tay-Sachs antitestek és az anti-astrocytin teljesen eltérő termékek. A kemoreciprokok másik típusa a „cél” reagensek kemoreciprokaikkal képzett komplexei. így például az 60 astrocytin és a brómacetil-cellulóz egymással képezett 'komplexét: a „célt” anti-astrocytinnel reagáltatjuk. Ezt a vegyület típust komplexszé alakíthatjuk és diagnosztikai anyagok, tápszerek és terápiás szerek specifikus sejtekhez vagy támadáshelyekhez való szállítására alkal- 65 mázhatjuk biológiai rendszerekben. Ezeket a vegyületeket tisztítási eljárásokra is használhatjuk. Az antiastrocytint például úgy állíthatjuk elő, hogy a brómacetilcellulóz-astrocytin-anti-astrocytin komplexet savval vagy proteináz enzimmel hidrolizáljuk. A „cél”-reagensek 60 a biológiai rendszerekben a TAG termékek mennyiségének növelésére alkalmasak (a TAG termékek leírását lásd a továbbiakban) oly módon, hogy a „cél” reagens immunológiailag hatásos mennyiségét testszövetekkel vagy testfolyadékokkal hozzuk érintkezésbe. 65 További kemoreciprokok a TAG-reagensek („Target- Attaching Globulins” = „cél”-hoz kapcsolódó globulinok). A TAG termékeket úgy kapjuk, hogy a „cél”reagenseket különböző időtartamokra testfolyadékkal hozzuk érintkezésbe, így komplexet képezünk és a TAG-ot lehasítjuk róla. Két hasznos kiviteli alak az „S-TAG” és az „F-TAG”. Az S-TAG (Slow-Target Attaching Globulin = lassan célhoz kapcsolódó globulin) előállítása úgy történik, hogy vérszérumot vagy más testfolyadékot a „cél”reagenssel, például brómacetil-cellulóz-maligninnel reagáltatunk két vagy több órán keresztül alacsony hőmérsékleten, például 4 °C-on és a kapott anyagból például 2 óra hosszat 37 °C-on híg savval történő kezeléssel lehasítjuk az S-TAG-ot. Az így előállított S-TAG a következő jellemzőkkel rendelkezik: vizes pufferolt oldatokban oldódik, a megfelelő recogninnal egysávos csapadékot képez az Ouchterlony-gél diffúziós tesztekben, nem dializálható celofán membránokban, olyan millipórusú szűrőn fennakad, amely szűrőn 25 000-en felüli molekulasúlyú molekulák fennakadnak, különböző aggregációs állapotokat jelző molekulasúlyokkal rendelkezik, amely a vékonyrétegkromatográfia szerint mintegy 50 000 és ennek többszöröse a makroglobulín tartományban és 280 mn hullámhossznál mutat abszorpciós csúcsot. Az F-TAG (Fas-Target-Attaching-Globulin = gyorsan célhoz kapcsolódó globulin) előállítása úgy történik, hogy vérszérumot vagy más testfolyadékot. 10 percig alacsony hőmérsékleten, például 4 °C-on reagáltatunk a ,,cél”-vegyülettel (bróm-acetil-cellulóz-maligninnal) és a kapott anyagból lehasítjuk az F-Tag-ot, például 37 °C-on két óra hosszat híg savval kezeljük. Az így kapott F-TAG a következő jellemzőkkel rendelkezik: vizes pufferolt oldatban jól oldódik, az Ouchterlony-gél diffúziós tesztekben egysávos csapadékot képez a megfelelő recogninnal, celofán membránokban nem dializálható, olyan millipórusú szűrőn fennakad, amelyen a 25 000-en felüli molekulasúlyú molekulák fennakadnak, különböző aggregációs állapotokat jelző molekulasúlyokkal rendelkezik, amely vékonyrétegkromatográfiásan meghatározva mintegy 50 000 és ezek sokszorosa a makroglobulín tartományban és 280 myu hullámhossznál mutat abszorpciós csúcsot. A TAG termékek segítségével élő emlősökben kimutathatjuk a rákos daganatokat oly módon, hogy meghatározzuk az emlős vérszérumának vagy testfolyadékának ismert térfogata által termelt S-TAG és F-TAG koncentrációját és ezt a koncentrációt korrelációba hozzuk azokkal a mennyiségekkel, melyekről tudjuk, hogy a rákra jellemzőek. A TAG termékek segítségével szövettani metszetekben is ki tudjuk mutatni a tumor sejteket, mégpedig úgy, hogy a jelzett anyaggal, például festékkel vagy radioaktív anyaggal összekapcsolt TAG-ot a metszetre visszük és az így kapott megfestés vagy radioaktív jelzés csak a tumor sejteknél lép fel. A TAG termékek továbbá citotoxikusnak bizonyultak a tumor sejtekkel szemben. A TAG termékek hasznosnak bizonyulnak abban is, hogy a diagnosztikai anyagok, tápszerek, terápiás szerek specifikus sejtekhez vagy támadási helyekhez történő szállítását irányítják azáltal, hogy az említett szereket a TAG-termékkel képzett komplex formájában juttatják be a szervezetbe. A normális sejtosztódás növényben vagy állatnál korlátozott vagy gátolt, ha a sejtek teljesen elfoglalnak 3
