185535. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új gonadoliberin-származékok előállítására
1 2 185 535 b) A kiindulási vegyületként használt (II) képletû pentapeptid komponens valamennyi végtermék előállításának közös intermedierje. c) Az X általános képletû aminosav bevitele a (ül) általános képletû tetra- vagy pentapeptid előállításának utolsó lépéseként történik, és így a biológiai hatás szempontjából leglényegesebb 6-os helyzetű aminosav beépítése a peptidláncba a kívánt módon egyszerűen valósítható meg. d) A D-Thy6-gonadoliberinnek, valamint a D-Phe6-gonadoliberinnek specifikusan a 6-os helyzetű D-aminosavak aromás oldalláncában jelzett, nagy fajlagos radioaktivitású triciált származékai igen előnyösen felhasználhatók farmakológiai, farmakokinetikai, biokémiai és élettani vizsgálatokban, valamint diagnosztikumként is. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. A példákban az olvadáspontokat °C-ban adjuk meg; az értékek nem korrigáltak. A vékonyréteg-kromatográfiás Rf értékeket Kiselgel (DC Alufolien, Merck) lemezeken az alábbi oldószerelegyekben határoztuk meg: 1. Etilacetát—piridin—ecetsav—víz 30:20:6:11 2. Etilacetát—piridin—ecetsav—víz 60:20:6:11 3. Etilacetát—piridin—ecetsav—víz 120:20:6:11 4. Etilacetát—piridin—ecetsav—víz 240:20:6:11 5. Aceton—toluol 1:1 6. Kloroform—metanol—ecetsav 85:10:5 7. Metiletilketon—pi ridi n—víz 65:15:20 8. n-Butanol—ecetsav—víz—etilacetát 1:1:1:1 9. n-Butanol—ecetsav—víz 4:1:1 10. n-Butanol—ecetsav—víz 4:1:5 (felső fázis) 11. n-Butanol—piridin—ecetsav-víz 15:1:4:20 (felső fázis) 12. i-Propanol—1 mólos ecetsav 2:1 1. példa D-Cpa6-gonadoliberin előállítása a) BOC-His(DNP)-Trp-OMe Molekulasúly = 622,62 21,12 g (50 mmol) BOC-His(DNP)-OH-t feloldunk 100 ml dimetil-formamidban, majd 0 °C-ra hűtjük. Keverés közben hozzáadunk 10,32 g (50 mmol) dicildohexil-karbodiimidet és 7,66 g (50 mmol) N-hidroxi-benztriazolt. Az elegyet 10 percig 0 °C-on keverjük, majd a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük. 12,74 g (50 mmol) H-Trp-OMe»HCl-ot feloldunk 70 ml dimetil-formamidban, és az oldatot 0 °C-ra hűtjük. Hozzáadunk 6,94 ml (50 mmol) trietil-amint, majd 5 perc keverés után a kivált trietilamin-hidrokloridot kiszűrjük. A két oldatot egyesítjük, és éjszakán át 0 °C-on keverjük. Másnap a kivált DCU-t kiszűrjük, és az oldatot szárazra bepároljuk. A kapott olajat 500 ml etil-acetátban feloldjuk, és háromszor 100 ml jéghideg 1 mólos KHSO„ oldattal, majd ötször 100 ml telített NaHC03 oldattal, végül kétszer 100 ml 10%-os NaCl oldattal kirázzuk. A szerves fázist vízmentes MgS04-on szárítjuk, szűrjük és szárazra bepároljuk. A kapott olajos anyagot petroléterrel elporítjuk, szűrjük és szárítjuk. Az így kapott kristályos anyag etil-acetátból petroléterrel átkristályosítható. Termelés: 27,70 g (89%) Op. 119-122 °C ta]“ = +14,1° (c=l, DMF) R* = 0,62; Rf = 0,41 b) H-His (DNP)-Trp-OMe • 2HC1 Molekulasúly = 595,41 (dihidroklorid) 24,9 g (40 mmol) BOC-His (DNP)-Trp-OMe dipeptidet feloldunk 100 ml metanolban, és hozzáadunk 100 ml 4 n metanolos sósav oldatot. Az elegyet 30 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, mialatt a dipeptidészterhidroklorid kikristályosodik. Ezt kiszűijük, éterrel mossuk és szárítjuk. Termelés: 21,91 g (92%) Op. 198-202 °C [a]“= 0,49° (c=l, DMF) Rf = 0,46; R? = 0,18 R? = 0,06 c) Glp-His-(DNP)-Trp-OMe Molekulasúly = 633,60 4,85 g (36,8 mmol) L-piroglutaminsavat, 7,58 g diciklo-hexil-karbodiimidet és 5,63 g N-hidroxi-benztriazolt feloldunk 100 ml dimetil-formamidban. Az elegyet 10 percig 5—10 °C-on keverjük, majd a kivált DCU-t kiszűrjük. 20.84 g (35 mmol) H-His(DNP)-Trp-OMe • 2HC1-1 feloldunk 100 ml dimetil-formamidban, és az oldathoz hozzáadunk 9,72 ml (70 mmol) tristil-amint. 5 perc keverés után a kivált trietil-amin-hidrokloridot kiszűrjük. A két oldatot egyesítjük és éjszakán át szobahőn keverjük. Másnap az elegyhez 90 ml acetont adunk, és a kiváló oldhatadan anyagot kiszűijük. Az oldat bepárlásával olajos anyagot kapunk; ezt etilacetáttal eldörzsöljük, szűrjük, majd szárítjuk. A száraz kristályos anyagot 3-szor 25 ml vízzel mossuk és ismét szárítjuk. Az anyag etilacetátból forrón oldva, majd lehűtve átkristályosítható. Termelés: 18,42 g (83,1%) Op. 148-151° [«]?= +5,2° (c=l, DMF) Rj! = 0,53; RJ = 0,38 d) Glp-His-Trp-OMe Molekulasúly = 466,50 15.84 g (25 mmol) Glp-His(DNP)-Trp-OMe védett tripeptidet feloldunk 100 ml dimetil-formamid és 40 ml víz elegyében. Hozzáadunk 4 ml merkapto-etanolt, majd az oldat pH-ját trietil-aminnal 8-ra állítjuk. 30 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd vákuumban szárazra pároljuk. Az olajos anyagot éterrel eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. A kapott anyagot kevés metanolban oldjuk és éter hozzáadásával átkristályosítjuk. A kivált kristályokat szűrjük, majd szárítjuk. Termelés: 10,92 g (93,6%) Op. 228- 232° [a]“ = +4,04° (c=0,42 DMF) R; = 0,30 e) Glp-His-Trp-N2H3 Molekulasúly = 466,51 9,33 g (20 mmol) Glp-His-Trp-OMe tripeptidet feloldunk 250 ml metanolban. Hozzáadunk 20 ml 98%-os hidrazin-hidrátot. A reakcióelegyet 3 órán át 40 °C-on, majd éjszakán át szobahőn keverjük. Másnap a kivált anyagot kiszűrjük, majd hideg metanollal mossuk és szárítjuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
