185316. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-(szubsztituált fenil-tiokarbamoil)- 3,3-diszubsztituált-formamidin-származékok előállítására
1 185 316 2 melegítjük, miközben benzol-metanol azeotrop elegyet desztillálunk le. A reakcióelegy lehűtésével kivált terméket szűréssel nyerjük ki. Kitermelés: 8,0 g, olvadáspont: 140—142 °C. A szűrletet hideg éter/hidrogén-klorideleggyel kezeljük, így 1,0 g hidroklorid sót kapunk, olvadáspont: 150 °C (bomlik). A következő táblázatban bizonyos kiválasztott vegyületet sorolunk fel, amelyek az előbb leírt eljárással állíthatók elő. Mindegyik vegyületet egy számmal jelöljük és a leírásban végig ezt a számot használjuk. Egy vegyület gyulladásgátló aktivitását az alábbi két teszt egyike bizonyítja. Az első teszt adjuváns ízületi gyulladás gátlása, és a második, az ödémagátló teszt, mely karragenin injekcióval patkány hátsó mancsán előidézett kísérleti ödéma csökkentéséből áll. 2. táblázat A primer és szekunder sérülés ödémájának százalékos csökkenése patkányon Vegyületszám Arány, mg/kg Primer, % Szekunder, % 1 5 39 35 2 * 3 100 39 31 4 100 0 0 *nem tesztelt. 15 Adjuváns által előidézett izületi gyulladás gátlása Ezt a tesztet VanArman, G. C., Nuss, G. W. és Risley, 20 E. A.: J. Pharmacol, Exper. Terap., 187; 400-413, 1973 eljárása szerint folytattuk le. A következő eljárás a teszt leírása. Egyenként 130-160 g súlyú Wistar hím patkányok (Taiwan törzs) hátsó lábának térfogatát a folyadék rend- 25 ellenes elhelyezkedésével, az ásványolajban szuszpendált 5 mg Mycobacterium butyricum bacilli-t tartalmazó 0,1 ml adjuváns szuszpenzió intraplantáris adagolása (jobb hátsó mancsba) előtt közvetlenül lemérjük. Az álatoknak a tesztvegyületet orálisan az adjuváns injek- 30 tálása előtti naptól kezdve öt napon át adagoljuk. Az ötödik napi dózis beadagolása utáni negyedik órában az állatok jobb hátsó mancsainak térfogatát (primer sérülés) az akut gyulladásgátló hatás meghatározása céljából lemérjük. Az adjuvánssal történő beoltás utáni 35 14. napon a nem injekciózott láb térfogatát (szekunder sérülés) a tartós gyulladásgátló hatás, vagy immunelfojtó hatás meghatározása céljából lemérjük. Mindegyik hátsó mancsra a láb százalékos térfogat csökkenését az egyidőben meghatározott megfelelő kontrollértékhez 40 viszonyítva kiszámítjuk. Bármelyik mancs térfogatában megfigyelt 30%-nál nagyobb csökkenést tekintjük szignifikáns hatásnak. A primer sérülés csökkenése, a szekunder sérülésre való hatás nélkül, rövidtől mérsékelt tartamig terjedő akut gyulladásgátló aktivitást jelent. 45 A szekunder sérülés csökkenése, a primer sérülésre való hatás nélkül, a sokkízületi gyulladás immunológiai komponensére történő kölcsönhatásra enged következtetni. A két sérülés csökkenése hosszantartó gyulladásgátló aktivitást, vagy gyulladásgátló és immunelfojtó hatás együttesét jelenti, mint amit a kortikoszteroidok fejtenek ki. A 2. táblázat az előbb leírt teszt eljárással, és a jelzett aránynál lefolytatott teszt eredményeit, a primer és szekunder sérülés ödémájának csökkenésében mutatja. 50 55 Ödéma ellenes teszt Az ödéma ellenes hatást Winter C. A., Risley E. A. 60 és Nuss G. W.: Proc. Exper. Biol. Med. 111, 544-547 (1962) teszteljárása szerint határoztuk meg. Ehhez a teszthez három, egyenként 100-120 g súlyú hím Wistar patkány (Taiwan törzs) mindegyikének orálisan 3 ml vízben oldott vagy szuszpendált tesztvegyületet adago- 65 lünk. Egy órával később, a jobb hátsó mancs talpfelületébe sóoldatban 0,1 ml 1%-os karragenin szuszpenziót, és í bal mancsba hasonlóan, csak sóoldatot injektálunk. Az injekció beadása után három órával mindkét hátsó mancs térfogatát a folyadék rendellenes eloszlásával lemérjük, és a karrageninnel előidézett gyulladás százalékos csökkenését (karrageninnel injektált láb térfogatából kivonjuk a sóoldattal injektált láb térfogatát) a teszvegyülettel nem kezelt állatokkal összehasonlítva határozzuk meg. A 30%-nál nagyobb gátlást tekintjük az ödémaellenes hatás bizonyítékának. A 3. táblázat az előbb leírt teszteljárás szerint, a megadott aránynál a patkány hátsó mancsában az előidézett ödéma csökkenését mutatja. 3. táblázat Ödéma százalékos csökkenése Vegyületszám Arány, mg/kg Előidézett ödéma csökkenése, % 1 5 35 2 25 32 3 100 33 4 * fenilbutazon (itandard) 100 41 *nem tesztelt. Vérnyomáscsökkentő teszt Ezt a tesztet Nagosaka A., Kikuchi K. és Aramaki Y.: ■ Jap. J. Pharmacol. 19, 401-408 (1969) eljárása szerint folytattuk le. Ehhez a teszthez, két normál vérnyomású Wistar patkányt (Taiwan törzs) plexiüveg edénybe teszünk, majd a kezelés előtt az edényt 4-6 percre 40 C-ra melegített kamrába helyezzük. Ezt mindegyik kísérletnél megtesszük. A szis2:tolés vérnyomást közveteti úton, az állatok farkának tövéhez egy farokbilincset, és egy érzékelő műszert szerelve mérjük. A műszert egy programozott Narco-Biosystem szfigmomanométerhez (Model PE-300), mely egy vérnyomásmérő műszer, és egy Sanei polygraph-hoz kapcsoljuk. Mikor már a berendezés megfelelően állandó vérnyomásértéket regisztrál, a tesztgyógyszert orálisan beadagoljuk, és ettől számítva 2., 4. és 6. órában a vérnyomást mérjük. Bár-3
