185230. lajstromszámú szabadalom • Eljárás farmakológiailag hatásos enkefalin-analóg peptidek előállítására
1 185 230 2 használatát, hogy a kívánt peptldkölés létrejöjjön. Az I általános képletü vegyiiletek előállítására használt minden aminosavat, ezek sajátosan megválasztott védőcsoportjait és/vagy aktiváló funkciós csoportjait a peplidkémiűban jól ismert módon állítjuk elő. Az I általános képletü vegyületek teljes szintézisének minden fázisában előnyösen a védőcsoportok meghatározott kombinációit alkalmazzuk. Azt találtuk, hogy ezek a sajátos kombinációk működnek a legsimábban. Más kombinációk is alkalmazhatók lennének az 1 általános képletü vegyületek szintézisénél, bár talán kevésbé eredményesen. így például benzil-oxi-karbonii-, ím-butoxi-karbonil-, tmt-amil-oxi-karbonil, p-metoxi-benzil-oxi-karbonil, adamantil-oxi-karbonil- és izobornil-oxikarbonil-csoport vegyesen használható aminovédö csoportként az I általános képletü vegyületek szintézisénél. Ezenfelül hidroxilvédő csoportként általában benzilcsoportot (Bzíj használunk a tirozilgyök blokkolására, bár mások, mint p-nitro-bcnzilcsoport (PNB), /j-m.etoxi-benzil-csoporl (PMB) cs mások is eredményesen alkalmazhatók. Az I általános képletü vegyületek előállításánál alkalmazott karboxilvédő csoportokat jellemző észterképző csoportok közül választjuk ki, beleértve például a metil-, etil-, benzil-, p-nitro-benzil, p-metoxi-benzil-, 2,2,2-triklór-etil-csoportot és másokat. Amikor a megfelelően megvédett, N-blokkolt aminosavat vagy peplidtöredéket összekapcsoljuk a megfelelően megvédett, karboxil-blokkolt aminosavval, az aminosav vagy peptidtöredék szabadfunkciós karboxil-csoportját reakcióképessé leszszük a kapcsolási reakció számára. Hz bármely jói ismert technikával megvalósítható. Az egyik ilyen aktiválási technika során a karboxil-csoportot vegyes anhidriddé alakítjuk át. A szabad karboxilcsoportot egy másik savval, jellemzően karbonsavszármazékkal, mint savkloriddal reagáltatva aktiváljuk. Vegyes anhidridek képzéséhez használatos savklorid például az etil-klór-furmiát, fenií-klórformiál, .vrc/c-butil-klór-formiát, izobutil-klórformiát, pivaioil-klorid és hasonlók. Előnyösen izobutil-kiói-formiátot használunk. A funkciós karboxil-csoportot a kapcsolási reakcióhoz úgy is aktiválhatjuk, hogy reakcióképes észterszármazékká alakítjuk át. Ilyen aktiv észterek például a 2,4,5,-triklór-feniI-észterek, pentakiórfenil észterek, p-nitro-fenil-észterek és hasonlók. Egy másik, jól használható kapcsolási eljárásnál a szabad savból, vagy még alkalmasabban az észterből hidrazidon át azidot állítunk elő. Az I általános képletü vegyületek előállításánál előnyben részesített kapcsoló eljárásban N.N'diciklohexil-karbodiimidet (DCC) használunk a szabad karboxil-csoport aktiválására, lehetővé téve ezzel a kapcsolás létrejöttéi. Ezt az aktiválási és kapcsolási eljárást úgy hajtjuk végre, hogy ekvimoláris mennyiségű DCC-t és aminosavat vagy peptidtöredéket használunk, ekvimoláris mennyiségű 1-hidroxi-benzo-triazol (HBT) jelenlétében. A HBT jelenléte meggátolja a nem kívánatos mellékreakciókat, beleértve a racemizálódás lehetőségét. Az I általános képletü vegyületek szintézisének meghatározott fázisában a védőcsoportokaí szelektíven keh lehasítani. A peptidszintézisekben általánosan jártas vegyész a jellemző védőcsoportok közül könnyen ki tudja választani azokat a csoportokat, amelyeknek használata lehetővé teszi a termék olyan értelmű hasítását, hogy az aminosavon vagy a peptidtöredéken jelenlevő védőcsoportok közül egyel vagy többet, de nem valamennyit eltávolitsuk. Ezek a technikák jól ismertek a peptidkémiában. A szelektív hasításra alkalmas technikákkal részletesebben foglalkozik Schröder és Lubke (The Peptides, I. kötet, Academic Press, New York (1965) 72-75. oldal táblázata). A karboxilvédő csoportok hasítása lúgos elszappanosítással történhet. Általában viszonylag erősen lúgos körülményeket, jellemzően alkálifémhidroxidot, mint nátrium-hidroxidot, káliumhidroxidot, litium-hidroxidot és hasonlókat használunk a védett karboxilcsoport regenerálására. Az elszappanosítás körülményei jól ismertek a kémia ezen területén. Sok karboxilvédő csoportot katalitikus hidrogenolizissel, például palládium/szén katalizátor jelenlétében távolítunk el. Ezenfelül olyan esetben, amikor az eltávolítandó karboxilvédő csoport, p-nitro-benzil- vagy 2,2,2-triklór-eüI-csoport, a hasítást cink és sósav jelenlétében hajtjuk végre. Sok aminovédö csoportot úgy hasítunk le, hogy a védett aminosavat vagy pepiidet savval, mint hangyasavval, trifluor-eeetsavval (TFA), p-toluolszulfonsavval (TSA), benzolszulfonsavvai (BSA) naflaiinszulfonsavvai és hasonlókkal kezeljük, és így a megfelelő savaddiciós só termékhez jutunk. Egyéb csoportok, például a benzil-oxi-karbonilcsoport hasítását úgy hajtjuk végre, hogy a blokkolt aminosavat vagy pepiidet hidrogén-bromid és ecetsav keverékével kezeljük és így a megfelelő hidrobromid savaddiciós sót kapjuk Az alkalmazott sajátos módszer vagy reagens a védöcsoport eltávolítására szolgáló specifikus reakcióban használi anyagok kémiai és fizikai jellemzőitől függ. A képződött savaddiciós só gyógyszerészetileg elfogadható formává alakítható át ioncserélő gyantával (például DEAE Sephadex A--25, Arnberlyst A-27) történő kezeléssel. A hidroxilvédő csopoit megtartható a peptiden az egész preparalási művelet alatt és ekkor csak a szintézis végső szakaszában távolítjuk el, az aminocsoport megvédésére használt csoporttal együtt. Mégis, függően a karboxilvédő csoport eltávolításának körülményeitől, a preparálás korábbi fázisában is eltávolíthatjuk. Ha a karboxilvédő csoportot lúgos elszappanosílássa! hasítjuk le, a hidroxilvédő csoport megmarad; ha viszont a karboxilvédő csoport eltávolítása katalitikus hidrogenolizist alkalmazunk, a hidroxilvédő csoport is lehasad. Az utóbbi eset nem okoz komoly problémát, mivel az I általános képletü vegyületek előállítására szabad hídroxil-csoportot tartalmazó gyök, például tirozilgyö'k jelenlétében is elvégezhető. A klasszikus megoldású módszerek .közül egy az 1 általános képletü vegyületek előállítására használi, előnyben részesített sajátos eljárásban a második és harmadik aminosavgyököl tartalmazó, külön előállított tripepiidet összekapcsoljuk a külön előállított C-terminális dipeptiddeh majd a megma10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
