185229. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyászatilag hatásos peptidek és acetátjaik előállítására
1 2 185229 N“-rm'-Butoxi-karbonil-L-tirozint (533 mg; 1,9 millimól) 5 ml DMF-ben szuszpendálunk. A keveréket lehűtjük — 15 °C-ra és a hideg, kevert oldathoz gyorsan 0,25 ml (l ,9 millimól) izobutil-klórformiátot és 0,21 ml (1,9 millimól) NMM-et adunk. ® Az oldatot - 15 °C-on tovább keverjük az alábbi preparálás ideje alatt. A fenti hidrokloridot (700 mg; 1,9 millimól) 5 ml DMF-ben oldjuk. Az oldatot lehűtjük 0 °C-ra és egy részletben 0,21 ml (1,9 millimól) NMM-et 10 adunk hozzá. Az oldatot rázzuk a reakció tökéletes lezajlásának biztosítása céljából. A keverékhez gyorsan hozzáadjuk a fent előállított oldatot és a keveréket 2Vi óráig — 15 °C-on keverjük, majd darált jég és 1 n nátrium-hidrogén-karbonát-oldat 15 keverékében öntjük. A vizes oldatot etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist elválasztjuk és egymás után vízzel, 1,5 n citromsavoldattal és vízzel mossuk. Az etil-acetátot ezután vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk és vákuumban bepárolva 20 olajat kapunk (1,0 g). A fenti olajat (900 mg) 1,5 ml anizolt és 1,5 ml trietil-szilánt tartalmazó 15 ml trifluor-ecetsavban oldjuk. A keveréket 0 °C-on 30 percig keverjük és éterbe öntjük, és a kivált anyagot összegyűjtjük és 25 szárítjuk (700 mg). Az anyagot annyi pulferben oldjuk, hogy 10 ml oldatot kapjunk (1% piridin; 0,05% ecetsav) és az oldatot 2,5 x 90 cm Sephadex DEAE A-25 (acetát) oszlopra visszük fel, melyet előzőleg a fenti pufferrel egyensúlyba hoztunk. Az 30 eluátumot 280 nm hullámhosszon ellenőrizzük; a megfelelő frakciókat egyesítve és liofilizálva fehér szilárd anyagot kapunk. Az utóbbit 10 ml 0,2 mól ecetsavban oldjuk és az oldatot 25 x 90 cm Sephadex G-10 oszlopra visszük fel. Az oszlopot 0,2 35 mólos ecetsavval eluáljuk és az eluátumot 280 nm hullámhosszon ellenőrizzük. A megfelelő frakciót egyesítve és liofilizálva 463 mg (40%) címben megnevezett vegyületet kapunk fehér szilárd formában. Md = — U9° (c = 0,5; l n sósavoldat) 40 Elemi analízis a C28H17Ns07 (555,6) képlet alapján : C H N számított 60,53%, 6,71%, 12,60%; talált 60,26%, 6,67%, 12,89%. 45 Aminosav-analizis: 1,00 Tyr; 0,99 Alá; 1,00 Gly; 0,98 NH3. 2. példa 50 L-Tirozil-D-aUmil-glicU-L-( Na-ciklopropil-nteíil)fenil-aianin-amid acetátsó A. N°-Ciklopropil nietil-L-fenil-alanin-amid 100 ml vízmentes etanolhoz 8 g (0,04 mól) L-fenil- 55 alanin-amid-hidrokloridot adunk. A keverékhez ezután 13,4 g (0,16 mól) szilárd vízmentes nátriumhidrogén-karbonátot és 6,44 g (0,048 mól) brómmetil-ciklopropánt adunk. A keveréket 7 óráig visszafolyatás közben forraljuk, majd vákuumban 60 bepároljuk. A kapott olajat etil-acetátban oldjuk és az etil-acetátos oldatot vízzel extraháljuk. A szerves fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A visszamaradt olajat 3x 50 cm szilikagéloszlopra (Grace and Davison 55 grade 62, kloroformban) visszük fel. A terméket kloroform-gradienssel eluáljuk, amelynek maximális metanol-tartalma 5%. A terméket vékonyrétegkromatográfia alapján izoláljuk az összegyűjtött frakciókból; 3,41 g (39%) címben megnevezett vegyületet kapunk. NMR: 51,45 (H—N—), 7,3 (fenil). B. N° = íerc-Butoxi-karbonil-D-alanil-giicil-L--, (Na-ciklopropil-metil)-fenil-aIänimärhid Az A. rész termékét (3,41 g; 16 millimól) 25 ml DMF-ben oldjuk. Az oldatot lehűtjük 0 °C-ra, majd egymás után 4,23 g (16 millimól) N“-fórcbutoxi-karbonil-D-alanil-glicint, 2,16 g (16 millimól) HBT-t és 3,03 g (16 millimól) DCC-t adunk hozzá, A keveréket 0 °C-on 2 óráig, majd szobahőmérsékleten 2 napig keverjük. A keveréket lehűtjük 0 °C-ra, a csapadékot szűréssel eltávolítjuk és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk és az etil-acetátot egymás után In nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel 1,5 n citromsavoldattal és vízzel extraháljuk. A szerves fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A fehér szilárd maradékot 3 x 50 cm szilikagéloszlopra (Grace and Davison grade 62, kloroformban) visszük fel. A terméket kloroform-gradienssel eluáljuk, melynek legmagasabb metanolkoncentrációja 5%. A terméket rétegkromatográfia alapján izoláljuk az összegyűjtött frakciókból. 2,51 g (35%) címben megnevezett, 83-84 °C olvadáspontú terméket kapunk. Elemi analízis a C23H36N405 (448,6) képlet alapján; C H N számított 61,59%, 8,09%, 12,49%; talált 60,05%, 7,40%, 13,23%. C. Na-ím,-Butoxi-karbonil-L-tirozil-D-a!anilglicil-L-)N°-cikIopropil-metil)-fenil-alanin-amid A B. rész termékét (2,4 g; 5,3 millimól) 5 ml anizolt tartalmazó 20 ml trifluor-ecetsavban oldjuk. A keveréket 0 °C-on 30 percig keverjük, majd melegítés nélkül vákuumban bepároljuk. A kapott olajhoz étert adunk, a felülúszót dekantáljuk és a maradék olajat vákuumban szárítjuk. 10 ml DMF-hoz 1,4 g (5,3 millimól) N“-íercbutoxi-karbonil-L-tirozint adunk. A keveréket lehűtjük — 15 °C-ra és a kevert oldathoz gyorsan 0,58 ml (5,3 millimól) NMM-et és 0,69 ml (5,3 millimól) izobutil-klór-formiátot adunk. Az oldatot - 15 °C-on keverjük, miközben elvégezzük az alábbi preparálást. A fent előállított trifluor-acetát-sót 10 ml DMF- ban oldjuk. Az oldatot lehűtjük - 15 °C-ra és egy adagban 0,58 ml NMM-et adunk hozzá. A keveréket rázzuk a reakció tökéletes lezajlása érdekében és hozzáadjuk a fenti vegyes anhidrid-oldathoz. A keveréket 4 óráig keverjük, majd darált jég és 1 n nátrium-hidrogén-karbonát-oldat keverékébe öntjük. A vizes oldatot etil-acetáttal extraháljuk és az etil-acetátot egymás után vízzel, 1,5 n citromsavoldattal és vízzel extraháljuk. Az etil-acetátos oldatot vízmentes magnézium-szulfát felett szárítva és vákuumban bepárolva olajat kapunk (2,7 g). Az olajat négy preparatív vékonyréteg-lemezre visszük fel. A lemezeket kloroform/metanol 9: 1 6
