185229. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyászatilag hatásos peptidek és acetátjaik előállítására
1 185 229 2 előnyösen körülbelül 5 jag — 50 |ig per kg testsúly. Orálisan adva a dózis körülbelül 100 pg - 200 pg, előnyösen körülbelül 500 pg - 100 mg, legelőnyösebben körülbelül 5 mg - 20 mg per kg testsúly. A következő példák az (I) általános képletü vegyületek előállítását és aktivitását ismertetik, anélkül, hogy a találmány oltalmi körét korlátoznák. 1. példa L-Tirozil-D-alanil-glicU-L-Na-alIil)-fenil-alanin amid acetátsó előállítása A. N"-/erc-Butoxi-karbonil-Nu-allil-L-fenilalanin 100ml tetrahidrofuránhoz(THF) 10,6 g (15 milliniól) N“-/m‘-butoxi-karbonil-L-fenil-alanint adunk. A keveréket nitrogénatmoszférában, 0 °C-on, 1 óra alatt 0,5 g 18-korona-6-étert tartalmazó 0,12 mól kálíum-hidrid és 250 ml vízmentes THF mechanikusan kevert szuszpenziójához csepegtetjük. A keveréket 0 °C-on még 10 percig keverjük és 30 perc alatt 20 ml THF-ban oldott 4 ml (44 millimól) allil-jodidot csepegtetünk hozzá. A keveréket 4 óráig állni hagyjuk, majd cseppenként 4,6 ml jégecet és 20 ml THF elegyél adjuk hozzá. A keveréket 10 percig keverjük, majd 400 ml jégre öntjük. 1 n nátrium-hidroxid-oldattal a vizes fázis pH-ját 8,0- ra állítjuk be. Ezután a vizes fázist éterrel exlraháljuk és hideg 1 n sósavoldattal pH 2,0-ig megsavanyítjuk. A vizes keveréket etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátot vízzel extraháljuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és vákuumban bepároljuk, A képződött szirupot 200 mi éterben okijuk és 8 ml (0,04 mól) dicikíohexil-amint (DCHA) adunk hozzá. A kivált anyagot leszűrjük és a szürletet egymás után 1,5 n citromsavoldatta! és vízzel extraháljuk. Az éteres réteget vízmentes magnézium-szulfát felett szárítva és vákuumban bepárolva 9 g (74%) szirupszerü, címben megnevezett vegyületel kapunk. [u]'5r> = — 130,8° (c = 0,5; metanol) Mágneses magrezonancia spektrum (NMR): 51.25 (H2C=), 1,45 (TEQX-butil), 7.25 (fenil) és 10,5 (karboxil). B. N“-terc-Butoxi-marbonil-NH-allil-L-fenilalanin-amid A fenti A. rész termékét (9 g; 29,5 millimól) 60 ml dimetil-formamidban (DMF) oldjuk, Az oldatot lehűtjük 0 °C-ra és 4,49 g (29,5 millimól) HBT: ammónia komplexet és 6,08 g (29,5 millimól) DCC-l adunk hozzá. A keveréket 0 °C-on 2 óráig és szobahőmérsékleten 72 óráig keverjük. Ezután a keveréket lehűtjük 0 °C-ra és leszűrjük. A szürletet vákuumban bepároljuk, a kapott olajat etil-acetátban oldjuk és egymás után n nátrium-hidrogén-karbonát-oldatlal, vízzel, hideg 1,5 n citromsavoldattal és vízzel extraháljuk. A szerves fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A kapott olajat 3 x 40 cm szilikagéloszlopra (Grace and Davison grade 62, kloroformban) viszszük fel. A terméket kloroform-gradienssel eluáljuk, amelynek maximális metanollartalma 5%. A terméket az összegyűjtött frakciókból vékonyréteg-kromatogram alapján izolálva 3,55 g (70%) címben megnevezett vegyületet kapunk. [a]25i, = - 114,7° (c = 0,5; metanol) Elemi analízis a C,7H24N203 (304,4) képlet alapján: C H N számított 67,08%, 7.95%, 9,20%; talált 67,34%, 7,66%, 8,98%. NMR: 51,4 (íerc-butil), 7.2 (Fenil). C. Nu.-Allil-L-fenil-alainn-ainid, hidrokloridsó Hídrogén-klorid gázzal készült 50 ml friss In jégecetes sósavoldathoz - amely 5 ml anizolt és 5 ml trielil-szilánt tartalmaz - a fenti B. részben kapott termékből 5,9 g-ot (19,3 millimól) adunk. A keveréket szobahőmérsékleten 30 percig keverjük, majd éterbe öntjük. A képződött csapadékot összegyűjtve és szárítva 4,1 g (88%) címben megnevezett veeyülelet kapunk; olvadáspont 250-253 °C. [«F„ = + 12,1° (c = 0,5; DMF) Elemi analízis a C12H ,7N2OCÍ: (240,7) képlet alapján: C H N számított 59,87%, 7,12%, 11,64%; talált 59.65%, 6,84% 11,83% NMR: 53,45 (C6HsC//2—), 4.0 (—CH—) és 7.3 (fenil). D. N"-/m-Butoxi-karbonil-D-alanil-g!icil-L-(Naullil)-fenil-alanin-amid 20 ml DM F-hoz a fenti C. rész 1,2 g (5 millimól) termékét adjuk. A keveréket lehűtjük 0 °C-ra és hozzáadunk 2.19 g (5 millimól) N0-/m,-buíoxi* karbonil-D-alanil-glicin-diciklohexi!-ammóniumsót . A keveréket 0°C-on 5 percig keverjük és hozzáadunk 0,68 g (millimól) HBT-í és 1,03 g (5 millimól) DCC-t. A keveréket 0 °C-on 2 óráig és szobahőmérsékleten 24 óráig keverjük, majd lehűtjük 0 °C-ra, a képződött csapadékot leszűrjük és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk és az cli!-acclátot egymás után nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, 0,75 n citromsavoldattal és vízzel extraháljuk. A szerves fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és vákuumban bepároljuk. Az olajat acetonban oldjuk és két preparatív vékonyréteg-lemezre viszszük fel. A lemezeket kloroform/metanol 9: 1 elcggyel eluáljuk. A főkomponenst tartalmazó sávot lekaparjuk a lemezről és a szilikagélröl leoldva 1,! g (51 %,) címben megnevezett vegyületet kapunk. [«Fo = - 64° (c = 0,5; metanol) Elemi analízis a C22 H32N405 (432,5) képlet alapján: C H N számított 61.09" o. 7,46%. 12,95%; la-áll 60,89" 7,25'%, 12,66%. alanin-amid acetátsó Hidrogén-klorid gázzal készült 35 ml friss I n jégecetes sósavoldathoz - amely 3 ml anizolt és 3 ml trietil-szilánt tartalmaz - a fenti D. rész 90Ö mg (2,1 millimól) terméket adjuk. A keveréket szobahőmérsékleten 25 percig keverjük, majd éterbe öntjük. A csapadékot összegyűjtjük és szárítjuk (700 mg). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
