185223. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sztreptokináz és plazminogén biner komplexét tartalmazó enzimszármazék előállítására
1 2 185223 Az előző kísérlet eredményei azt mulatják, hogy az 1. és 2. példa szerint készített származékok, majdnem kétszer olyan hatásosak a vérrög feloldódását illetően, mint a felhasított sztreptokináz/plazminogén komplex blokkolásával készített szárma- 5 zékok. Ezenkívül, az I. táblázat azt mutatja, hogy az aktív helyen akrilezett sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplexek származékai még sokkal aktívabbak, mint azok nem módosított változatai ab- 10 ban az esetben is, ha a nem módosított komplex a lehető legfrissebb. Egy második állatkísérlet a fibrinoldó hatás vizsgálatát célozza. Ebben a kísérletben a vérrög egy vizsla femorális vénájában rögzített, beültetett 15 gyapjú szál körül képződött. A lekötéssel izolált vénából ezután vért vettünk egy kollaterális véna kanül segítségével. A kivett vért radioaktív jód'z5-humán fibrinogénnel megjelöltük, (lásd 79 301 773.2 számú európai szabadalmi bejelentést) és visszainjektáltuk 20 az előbbi vénaszakaszha nyúlagy tromboplaszlinnal együtt. Alvadás után a lekötést eltávolítottuk és a keletkezett rádioaktív nyomjelzéssel ellátott vérrögöt a fonal segítségével egy helyben tartottuk. A második táblázat azokat az eredményeket össze- 25 gézi, amelyeket ezeknél a kutyáknál kaptunk, ha őket különböző fibrinoldó szerekkel kezeltük. A feloldódás mértékét rádiókémiai úton határoztuk meg a kísérlet végén, miután a visszamaradó trombuszt kimetszettük. A 2. táblázat mutatja, 30 hogy a p-anizoil-sztreptokináz-plazminogén komplex, melyet a találmány szerint készítettünk, sokkal aktívabb mindkét alkalmazott dózis esetén, mint a frissen készített nem-módosított aktivátor komplex ugyanilyen dózisok mellett. 35 Kémiai adatok A 3. táblázat megadja az aktív helyen szubsztitu- 40 ált sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplexek deacctilczcsének látszólagos elsőrendű sebességi állandóit 37 °C-on, 7,4 pH-érlék mellett. Az adatok illusztrálják, hogy a deacilezés sebességi állandója összhangban van a szubsztituált benzoil- 45 csoport elektronszerkezetével. Általában az elektront elvonó szubszliluensek növelik a deacelilezés sebességéi és az elektront leadó csoportok lassítják a folyamatot. /. Táblázat 50 Az állatok száma Átlagos feloldódás 1. Izotóniás sóoldat, kontrollként 8 3 ± 1 . 55 2. Nem módosított „sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplex” két protein ek-6 20 ±4 vimolekuláris mennyiségeiből készült 0 °C-on IO'-ig, és rögtön beinjektáltuk 60 I. Táblázat folytatása Az állatok száma Átlagös feloldódás % 3. Nem módosított kereskedelmi sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplex (Behringwarke) 5 14±4 4. Az EU 79 301 773 2 számú szab. leírás 22. példája szerint készült p-anizoll(sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplex) melynek belső pepiid kötése felhasítoll 5 24±8 5. Az 1. példa szerinti p-anizoil-(sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplex), melynek belső pepiid kötése nem felhasított 5 42 ±6 6. A 2. példa szerint készült, liofilezelt p-anizoil-(sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplex) készítmény 13 41 ±6 7. A 3. példa szerint készített 3-melil-4-metoxi-benzoil(sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplex) készítmény 5 29 ±5 2. Táblázat Az enzimszármazékok hatékonysága kutyákon előidézett vénás trombózis esetében Enzimszármazék Dózis ÁllaÁtlaIU/kg tok gos száma feloldódás 1. Izotóniás sóoldat, kontrollként — 7 22 ±10 2. Nem módosított „sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplex" két protein ekvimolekuláris mennyiségeiből készült 0 °C-on 10'-ig és rögtön beinjekláltuk 1500 5 ÍÓ±2" 3. Ugyanaz 2500 5 25 ±18 4. A 2. példa szerint készített p-anizoil(sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplex) 1500 5 79± 14 5. Ugyanaz 2500 5 85± 14 6. Szlreptokináz 1500 3 24 ±21 6
