185158. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 11béta-szubsztituált szteroidszármazékok előállítására
1 185 158 2 B) Az 1 általános képletű 0.10-epoxi-vegyületekben A jelentése oxocsoport, Ri,R2, R3 és R4 jelentései a következők: P-r R-2 Ra R, (30) képi. csop.-ch3-OH ~C=C-H (30) képi. csop.-ch3-OH-cc-ch3 (30) képi. csop. ~ch3-OH-ch2-c=c-h (30) képi. csop. ~ CH3-OC- H-OH (31) képi. csop.-ch3-OH-C-C-H (31) képi. csop.-ch3-OH-OC-CH3 (31) képi. csop.-ch3-OH-OC-CHjQij (31) képi. csop.-ch3-OH--CH2-OC-H (31) kép!, csop.-ch3-OH-H (31) képi. csop.-CH3 ~C=C—H-OH (32) képi. csop.-ch3-OH v-C=C—H (32) képi. csop.-ch3 OH-C=C-CH3 (32) képi. csop.-ch3-OH ~CH2-C3C~H (32) képi. csop.-ch3-C=C—H-OH (32) képi. csop.-ch3-OH-H (33) képi. csep.-ch3-OH-C=C—H (33) képi. csop.-ch3-OH-C=C-CH3 (33) képi. csop.-ch3-OH-ch2-oc-h (33) képi. csop.-ch3-OH —C=C-H (33) képi. csop.-ch3-OH ~C=C-CH3 (34) kép!, csop.-ch3-OH-CH2-OÍ-H (34) képi. csop.-c:h3-OH-H (34) képi. csop,-ch3-C=C-H-OH FARMAKOLÓGIAI VIZSGÁLATOK A találmány szerinti termékek hormon-receptorGkra gyakorolt hatásának vizsgálata Patkány veséjének mineralokortikoid-receptora 140-160 g súlyú hím Sprague-Dawley EOPS patkányokat, melyeknek mellékveséit 4-8 nappal korábban eitávolítottuk, feláldozunk, és a veséjüket rögtön ezután átöblítjük 50 ml pufferoldatíal, amely 10 mmól Tris-t, 0,25 mól szaccharózt és sósavat tartalmaz, és pH-ja 7,4. A veséket ezután eltávolítjuk, dekapszuláijuk és homogenizáljuk 0 °C-on egy Potter-féle politetrafluoretiién edényben (1 g szövethez 3 ml puffert adunk). A homogenátumot 10 percig centrifugáljuk, 800 g-vel, 0 °C-on. Amint a glukokortikoíd-receptoron levő triciált aldoszteron rögzítését eitávolítottuk, a 1 lß,17/3-dihidroxi-21- -metil-pregna-1,4,6-trién-20-in-3-on-szteroidot, amely egyedül kötődik a glukokortikoid-receptorhoz, összekeverjük a 10“6 mólos végső koncentrációjú felül elhelyezkedő réteggel. Ezt a felül elhelyezkedő folyadékot 105,000 g-vel ultracentrifugáljuk, 60 percig, 0 °C-on. Az így kapott felül elhelyezkedő réteg alikvot részeit 0 r’C-on inkubáíjuk, konstans koncentrációjú (T) triciált aldoszteronna! növekvő koncentrációban jelenlevő (0— 2500X10“9 mól) „hideg” aldoszteronnal, vagy a tanulmányozni kívánt „hideg” termékkel („ hideg” * inaktív). Egy bizonyos (t) idejű inkubálás után megméijük a kötött, triciált aidoszteron koncentrációját (B), a csontszéndextránhoz történő adszorpciós technikával. Patkány proszíatamirigyének androgén-receptrora 160-200 g súlyú hím Sprague-Dawiey EOPS patkányokat kasztrálunk. A kasztrálás után 24 órával az állatokat feláldozzuk; A prosztata mirigyeket eltávolítjuk, lemérjük és 0 °C-on homogenizáljuk és Potter-féle poiitctrafluor-etilén edényben, egy TS pufferoldatban (10 mmól Tris, 0,25 mól saccbaróz és HC1, és pH = 7,4). (1 g szövethez 5 ml TS puffert adunk.) A homogenátumot ezután ulíracentrifugáljuk 0 °C-on, 105.000 g-vel 60 percig. A kapott felül elhelyezkedő réteg alikvot részeit 0 °C-on 2 óráig inkubáíjuk konstans koncentrációjú (T) P termékkel ( 17/fhidroxi-17ö-metil-ösztra-4,9,-1 l-trién-3-on). Növekvő koncentrációjú (0—iOOOXIO-9 mól/,.hideg” P vagy „hideg” tesztoszteron, vagy a vizsgálandó termék jelenlétében! Ezután megmérjük az öszszes ínkubátumban a kötött, triciált P koncentrációját (B), a csontszén-dextránra történő abszorpció módszerével, Nyúl uteruszának progesztogén-receptora Körülbelül ! kg súlyú nőstény nyúlnak cután applikációval 25 pg ösztradioít adagolunk. A kezelés után 5 nappal az állatokat feláldozzuk: az uterusaikat eltávolítjuk, lemérjük és 0 °C-on homogenizáljuk egy Potter-féle politctrafluor-edlén edény alkalmazásával TS pufferoldatban. (10 mmól Tris, 0,25 mól saccharőz és HC1, pH = 7,4), ( ' g szövethez, 50 ml TS puffert adunk). A homogenátumot ezután 105.000 g-vel ultracentrifugáljuk, 90 percig 0 °C-on. Az így kapott felül elhelyezkedő folyadékból alikvot részeket inkubálunk 0 °C-on (t) ideig, konstarrs koncentrációjú (T) triciált temrékkei (R.) (17,21-dimeti!-19-nor-4,9-pregnadién-3,20-dion) növekvő koncentrációjú (0-2,5000.10-9 mól) „hideg” R vagy „hideg” progeszteron vagy a „hideg” vizsgálandó termék jelenlétében. Ezután megmérjük az összes inkubátumban a kötött, triciált R koncentrációját (B), a csontszén-dextránhoz történő adszorpció módszerével. Patkány pajzsmirigyének glukokoríikoid-receptora 160 200 g súlyú hím Sprague-Dawley EOPS mellékveséit eltávolítjuk. Az eltávolítás után 4-8 nappal az áílantokaf feláldozzuk és a pajzsmirigyeiket eltávolítjuk és egy pufferban 0°C-on homogenizáljuk. (10 mmól Tris, 0,25 mól saccharőz, 2 mmói dítio-treitol és PICI, pH = 7,4), egy Potter-féle polítétrafluor-etilén edény alkalmazásával (1 g szövethez 10 ml TS puffert adunk.) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 23
