185070. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 5,6,7,7a-tetrahidro-4H-[3,2-c]piridin-2-on-származékok előállítására
1 2 185.070 d) A trombodta-aggregáció kinetikai vizsgálata További kíséletét végzünk az (I) általános képletű vegyületek kinetikai tanulmányozására. Az 1. sz. származékot és az A referencia-vegyületet propilén-glikolban feloldjuk és intraperitoneálisan adagoljuk 100 mg/testsúly kg dózisban patkányoknak, míg a kontroll egereknek intraperitoneálisan csak 1 ml/kg propilén-gükolt adunk. A vérmintát az adagolás után 10 perccel és 60 perccel vesszük és a mintát centrifugáljuk, hogy Így 5 trombocitákban dús plazmát kapjunk. Az ADP-vel indukált trombocita-aggregációt a plazmában Bryston-féle aggregométerrel mérjük és Born-féle nefelometriás módszert alkalmazunk. A IV. táblázat; mutatja a kísérletekkel kapott gátlási százalékot az idő függvényében. IV. táblázat Idő A találmány szerinti A referencia Kontroll (perc) 1. sz. származék vegy ület (propilén-glikol) 10 42 22 0 60 97 39 0 A táblázat azt mutatja, hogy az (I) általános képletű 1, sz. származék sokkal nagyobb trombocita-aggregáció-gátló hatást mutat, mint az A referencia-vegyület és ez a hatás gyorsabban mutatkozik. A kísérletet a fent leírt eredményeket is igazolja. 2) Trombózis-ellenes hatás A hatást mesterséges vérkeringéssel előidézett kísérleti trombózison tanulmányoztuk. A módszert Umetsu és Sonoi írták le (Thrombos. Haemost., 39, 1/1878). Pentrobital intraperitoneális injekcióval érzéstelenített patkányok bal nyaki vénáját és jobb nyaki ütőerét kezeljük. Összeköttetést létesítünk egy központi és két oldal katéter között. Egy természetes fehér selyemszálat vezetünk a középső részbe és a keringést 25 20 percre elindítjuk. A keringést ezután egy fogóval megállítjuk és a fonalat gyengéden visszahúzzuk, majd azonnal megmérjük. A nedves selyemszál előzetesen talált átlagsűlya 5,10 mg volt. A kezelést a mesterséges vérkeringés beindítása előtt 48, 24 és 2 óráig végezzük. 30 A teszt-vegyületeket orálisan adagoljuk, különböző állatcsoportoknak 10 ml 5%-os gumiarábikum/kg szuszpenzió formájában és a dózisok: 12,5 mg/kg, 25 mg/kg, 50 mg/kg, 100 mg/kg és 200 mg/kg. Az V. táblázat az 1. és 3. sz. származékokkal, valamint az A referencia-vegyülettel végzett kísérleti ered- 35 ményeket mutatja és az eredmények az egyes állatcsoportoknál átlagos értékek. V. táblázat Teszt-vegyületek 12,5 mg/kg A trombociták átlagsúlya (mg) 25 50 100 mg/kg mg/kg mg/kg 200 mg/kg 1. sz. származék 3. sz. származék A referencia-vegyület 27.45 26,72 30.45 12,21 17,04 30,09 6,01 5,96 28,86 4,76 4,62 23,04 23,13 Kontroll 5%-os gumiarábikum 30,41 1 A teszt világosan mutatja az (I) általános képletű vegyületek hatását, melynek eredményeképpen 25 mg/kg dózistól felfelé a trombuszok átlagsúlya lényegesen csökken, míg az A referencia-vegyület még magasabb dózisoknál sem mutat semmilyen trombózis-ellenes hatást. A tesztek továbbá azt mutatják, hogy a 2 215 948 és 2 345 150 sz. francia szabadalmi leírásokban az említett közzétett leírások megfelelői szereplő vegyületekkel ellentétben az (I) általános képletű vegyületek egyáltalán nem mutatnak gyulladásgátló vagy értágító tulajdonságokat. Ez tehát azt jelenti, hogy sokkal szelektívebb tulajdonságokkal rendelkeznek, 55 ez értékessé teszi a vegyületeket a'gyógyászat olyan területein, ahol bizonyos kiegészítő hatások nem kívánatosak vagy a beteg számára károsak lehetnek. A fent leírt toxikológiai és farmakológiai vizsgálatok azt mutatják, hogy az (I) általános képletű vegyületek alacsony toxicitása, jó kompatibilitása ,va- 60 lamint értékes trombocita-aggregáció-gátló és trombó5
