185022. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív tetrapeptid-származékok előállítására
1 2 185.022 Előnyösen az orálisan adagolható készítmények is. Ezek lehetnek például kapszulák, tabletták és más hasonló gyógyszerformák, amelyekben a hatóanyag meghatározott mennyisége van jelen. Alkalmas orális készítmények még például a porok, granulátumok, valamely vizes vagy nem vizes közeggel készült oldatok, szuszpenziók vagy emulziók. A tablettákat préselés útján állíthatjuk elő, általában egy vagy több segédanyag felhasználásával. A tablettákat úgy készítjük el, hogy a hatóanyagot por vagy granulátum formájában általában összekeveijük egy vagy több segédanyaggal,például kötőanyagokkal csúsztatószerekkel, semleges hígítószerekkel, felületaktív anyagokkal, pufferoló anyagokkal, ízesítő anyagokkal, sűrítőszerekkel, konzerválószerekkel, diszpergálószerekkel vagy más hasonlókkal, és ezt a keveréket préseljük. Az 1 általános képletű vegyületek pontos dózisát a kezelőorvos állapítja meg. A kiválasztott dózis az adagolás módjától, az adott hatóanyagtól, a kezelt betegtől és a kezelés módjától függ. Általában azonban, ha a hatóanyagot intramuszkulárisan vagy szubkután adagoljuk, akkor a dózis testsúly-kilogrammonként körülbelül 0,5 pig és körülbelül 2 mg között van, és előnyösen körülbelül 10 /jg és körülbelül 100 jug között. Ha viszont a hatóanyagot intravénásán adagoljuk, akkor a dózis testsúly-kilogrammonként körülbelül 0,1 ng és körülbelül -200 fjg között van, és előnyösen körülbelül 1 pg és körülbelül 50 /ig között. Ha a hatóanyagot orálisan adagoljuk, akkor a dózis testsúly -kilogramonként körülbelül 100 /jg és körülbelül 100 mg között, és előnyösen körülbelül 500 gg és körülbelül 50 mg között van. Még előnyösebben az orális dózis testsúly-kilogrammonkéntkörülbelül 1 gg- és körülbelül 10 yug között van. A találmány szerinti eljárást a továbbiakban, a találmány oltalmi körének szűkítése nélkül, példákkal szemléltetjük. 1. példa L-Tirozil-D-aIanil-glicil-L-(Na-etil)-p-fluor-fenil-alanin-amid, ecetsavas só a) lépés N^-Trifluor-acetil-D^-p-fluor-fenil-alanin 100 ml trifluor-ecetsavhoz hozzáadunk 25 g (0,137 mól) D,L-p-fluor-fenil-alanint. Az elegyet 0 °C hőmérsékletre hűtjük, majd 5 perc alatt hozzáadagolunk 21 ml (0,149 mól) trifluor-ecetsav-anhidridet. Az elegyet 2 órán át 0 °C hőmérsékleten keverjük, majd az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot 100 ml vízzel hígítjuk, a kivált csapadékot kiszűrjük és megszárítjuk. Ily módon 30,1 g (hozam: 79%) cím szerinti vegyületet kapunk, op.: 140—143 °C. Analízis aCn HgNOiF4 (279.2) képlet alapján, számított: C.47,32%, N: 3,25%, N: 5,02%, talált : C : 47,03%, H : 3,41%, N : 5,16%. b) lépés L-p-Fluor-fenil-alanin 500 ml vízhez hozzáadunk 28 g (0,1 mól), az a) lépésben leírt módon nyert terméket. Az elegyhez keverés közben annyi 2 n nátrium-hidroxid-oldatot adunk, hogy pll=7,2-nél tiszta oldatot kapjunk. Az oldathoz hozzáadunk 35 mg karboxipeptidáz A enzimet, és az elegyet 5 napon át lassú keverés mellett 37 °C hőmérsékleten, pH=7,2 értéken tartjuk. Utána az oldat pH-ját 5,0-ra állítjuk, szenezzük és megszűrjük, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 A szűrlet pH-ját 1 n sósavval 3,0-ra állítjuk, és etil-acetáttal háromszor kirázzuk. Ezután a vizes oldat pH-ját 2 n nátrium-hidroxid-oldattal 7,0-ra állítjuk, és csökkentett nyomáson addig töményítjük, míg az L-izomer el nem kezd kristályosodni. Utána a csapadékos oldatot hagyjuk szobahőmérsékletre hűlni, a csapadékot kiszűrjük és megszárítjuk, ily módon 8,8 g (hozam',96%) cím szerinti vegyületet kapunk. [apD =-2,75° (c = 0,51 1 nHCl). c) tépés N^-tercier-butoxi-karbonil-L-p-fluor-fenil-alanin 25 ml tercier-butil-alkohol, 5 ml víz és 20 ml 2 n nátrium-hidroxid-oldat (0,04 mól) elegy éhez hozzáadunk 7,32 g (0,04 mól), a b) lépésben leírt módon előállított terméket. Ezután az elegyhez hozzáadunk 8,9 g (0,041 mól) di-tercier-butil-karbonátot, és a reakcióelegyet 4 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután hozzáadunk 50 ml vizet, és dietil-éterrel kirázzuk. A vizes részt leválasztjuk,-hideg 1 n sósavval pH=2,5-re savanyítjuk és etil-acetáttal kirázzuk. Az etil-acetátos részt vízzel egyszer kimossuk, magnézium-szulfáton megszárítjuk és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Az olajos maradékot petroléterben feloldjuk, és éjszakán át 4 °C hőmérsékleten állni hagyjuk. Az ily módon kapott kristályos anyagot kiszűrjük és megszárítjuk, így 11,3 g (hozam: 100%) cím szerinti vegyületet kapunk, op.: 104-108 °C. Analízis a C.4H. oN04F-re (283,3) képlet alapján: számított : C: 39,36%, H: 6,40%, N: 4,94%, talált: C: 59,44%, H: 6,67%, N: 4,71%. [apn =+11,88° (c = 2,0, etanol). d) lépés l'T'-tercier-butoxi-karbonil-L-p-fluor-fenil-alanin-amid 75 ml dimetil-formamidhoz hozzáadunk 10 g (0,035 mól), a c) lépésben leírt módon nyert terméket. Utána az elegyet -15 °C hőmérsékletre hűtjük, és hozzáadunk 3,9 ml (0,035 mól) N-metil-morfolint és 4,6 ml (0,035 mól) klórhangyasav-izo-butil-észtert. A reakcióelegyet 5 percig -15 c hőmérsékleten keverjük, majd 1 órán át vízmentes ammóniát vezetünk bele. Ezután a reakcióelegyet további 4 órán át -15 °C hőmérsékleten keverjük, majd jég és 1 n nátrium-hidrogén-karbonát-oldat elegyére öntjük. A vizes elegyet etil-acetáttal kirázzuk, a szerves részt vízzel, utána 1,5 n citromsav-oldattal, és végül vízzel mossuk. A szerves részt magnézium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradék olajat dietil-éterben feloldjuk, és az oldatot éjszakán át 4 °C hőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált csapadékot kiszűrjük és megszárítjuk, ily módon 8,1 g (hozam: 82%) cím szerinti vegyületet kapunk, op.: 149-152 °C. 9,92%, e) lépés L-p-Fluor-fenil-alanin-amid, sósavas só 50 ml, frissen készített, 1 n, ecetsavas sósav-oldat és 5 ml anizol elegyéhez hozzáadunk 7,8 g (0,028 mól), a d) lépésben leírt módon előállított terméket. Az elegyet fél órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd dietil-éterbe öntjük, és a kivált csapadékot ki[a]25n = +7,92° (c = 0,5, metanol). AnalífísC,4H1oN20^F-re (282,3): számított: C: W,5Ó%,T1:6,79%, N: talált : C: 59,31%, H: 6,85%, N: 9/ ‘ 5
