185021. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ciklusos hexapeptidek előállítására
1 2 185.021 megkapjuk az S 31794/F-l alapvegyület p-{n-oktiloxi)-benzoil-származékát. 47. példa A Hl. általános képletű vegyüietek gombaellenes aktivátását in vitro standard korongdiffúziós módszerrel és agarhígításos módszerrel mutatjuk ki, továbbá in vivo standard, egereken vizsgált szisztémás, gombás fertőzések megszüntetésével. A következő, 4—8. táblázatokban megadjuk a III. általános képletű néhány vegyület gombaellenes hatásának vizsgálti eredményeit. A IV. és V. táblázatban megadjuk a 36., 44. és 52. példákban ismertetett vegyüietek agarlemezen, korongdiffúziós módszerrel kapott in vitro eredményeit. A IV. táblázatban közölt adatokat úgy kaptuk, hogy a vizsgált vegyület által a mikroorganizmus növekedés-gátlása révén okozott gátlási zónák nagyságát olvassuk le mm-ben. Az V. táblázatban az aktivitást a legkisebb növekedésgátló koncentrációval határoztuk meg (jug/korong), amely azt a koncentrációt jelenti, amely szükséges a vizsgált mikroorganizmus növekedés-gátlásához. A VI. táblázat adatai a p-(n-oktiloxi)-benzoil-A-30912 A alapvegyület in vitro vizsgálati eredményeit jelenti öt Candida albicans mikroorganizmussal szemben. A vizsgálatokat agarhígításos módszerrel végeztük. A VI. táblázat aktivitásait a legkisebb növekedésgátló koncentrációban határoztuk meg (jug/ml), ez a koncentráció szükséges a vizsgált mikroorganizmus növekedés-gátlásához. A VII. táblázatban megadjuk a találmány szerinti vegyüietek in vivo vizsgálat során meghatározott hatásosságát Candida albicans A-26 mikroorganizmussal fertőzött egerekben, ahol az aktivitást EDjp-értékben adjuk meg mk/kg anyagmennyiség, amely ahhoz szükséges, hogy az állatok 50%-a kigyógyuljon). Ahol nem kaptuk meg az ED^0-értéket, úgy az aktivitást abban 5 10 15 20 25 30 35 a legalacsonyabb dózisban adjuk meg, amely szükséges ahhoz, hogy jelentős gombaellenes hatás következzen be. A vizsgálat során hím albino egereket használtunk, ezek patogénmentes állatok, súlyuk 18 g és 20 g között változik. A Candida albicans A-26-tal való fertőzést intravénásán végeztük, A fertőzés előtt 24 órával az állatokat körülbelül 50 röntgen per perc sugárzásnak vetettük alá 8 percen át (összesen 400 röntgen), a fertőző organizmussal szemben fellépő immunválasz csökkentésére. A fertőzést követő 0.,4. és 24. órában mindegyik csoportnak emelkedő dózisú, vizsgálandó vegyületet adagoltunk szubkután 33%os polietilén-glikol és víz szuszpenziójában. Mindegyik állat halálát feljegyeztük. A Student-féle t-statisztikai összehasonlítást elkészítettük a pusztulásátlagos napjára vonatkozóan egy adott dózis-értéken mindegyik fertőzött és kezelt állatcsoport esetén 10 fertőzött, és nem kezelt állattal összehasonlítva annak az érdekében, hogy eldönthessük, a kezelés szignifikánsan megnöveli-e a túlélést? A VIII. táblázatban megadjuk a találmány szerinti vegyüietek orális adagolásakor megfigyelhető felszívódást. Ebben a vizsgálatban az egereket 416 ntg/kg-os dózisokkal kezeltük, a vizsgált vegyüietek 33%-os polietlén-glikol 400, és víz elegyében szuszpendáltuk. Bizonyos időközönként vérmintákat vettünk az orbitális szinuszból, és meghatároztuk a minták antibiotikus aktivitását. Ezt a következőképpen csináltuk: 20 ß teljes vért tartalmazó 7 ml átmérőjű korongot helyeztünk agarra, amelyet előzőleg Aspergillus montevidensis A35137 mikroorganizmussal fertőztünk. 40 órás inkubációt köveiöen — az inkubáció 30 °C hőmérsékleten történt — a vérmintából adódó gátlási zónát meghatároztuk, és összehasonlítottuk a vizsgált vegyület standardja által kapott gátlási zónákkal. Ezután kiszámítottuk a vérminta hatóanyag-tartalmát. IV. Táblázat Az A-30912 A alapvegyület-származékainak agarlemez-korong-diffúziós módszerrel — ~ meghatározott gombaellenes aktivitása A gátlási zóna nagysága mm-ben “ Példa A III általános képletű -------------------------------------—■------------------száma vegyület, ahol R3 = Saccharomyces pastorianis X-52 . Neurospora crassa 846 Trichophyton mentagrophytes A-23 Candida albicans A-26 36. CH3(CH2)U-21 32 60x 30 44. IV 21 33x 55x 23 17 35x 56x 19 52. V 18 23x — 28 x = Mérhető és jól elkülönülő gátlási zóna, a korong körül a mikroorganizmus újra nő. 8 * A vizsgálatokat úgy végeztük, hogy 1 mg/ml koncentrációjú metanolos szuszpenzióba 7 mm átmérőjű korongokat merítettünk, majd ezekezet az agar felületére helyeztük. Inkubációs idő: 24-48 óra, 25-37 °C hőmérsékleten. 21
