185021. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ciklusos hexapeptidek előállítására
1 2 A találmány tárgya eljárás az új 1 általános képletű ciklusos hexapeptid-származékok előállítására. A találmány szerinti vegyületek félszintetikus, gombaellenes vegyületek előállításakor köztes vegyületként használhatók. A fenti vegyületek előállítására úgy járunk el, hogy egy II általános képletű ciklusos peptid antibiotikumot acilhasítunk, ahol az általános képletben R telített vagy telítetlen zsírsav, és R1, R2, R3 és R4 az alábbiakban megadott jelentésűek. Úgy találtuk, hogy az R zsírsav-oldallánc enzimatikusan lehasítható a vegyületről, amikor megkapjuk a ciklusos hexapeptid alapvegyületet. A találmány szerinti eljárás értelmében az antibiotikumot vizes közegben egy, az Actionoplanaceae családba tartozó mikroorganizmus által termelt enzum hatásának teszszűk ki mindaddig, míg az acilhasítás megtörténik. A találmány szerinti eljárás egy előnyös kivitelezési változata szerint az Actionplanes utahensis NRL 12052 mikroorganizmus által bioszintetizált enzimet használjuk a zsírsav-oldallánc hasítására. Az acilhasítás általában úgy 'örténik, hogy a megfelelő antibiotikumot hozzáadjuk az A. utahensis tenyészetéhez, majd a tenyészetet az acilcsoport lehasadásáig ínkubáljuk. Az így kapott alapvegyületet elkülönítjük a tenyészléből, ismert módszerekkel. Ezeket az alapvegyületeket felhasználhatjuk arra, hogy ismét acilezve új antibiotikumokat állítsunk elő. Részletesebben, a találmány tárgya eljárás az I általános képletű ciklusos hexapeptid alapvegyületek előállítására, ahol az általános képletben R’ hidrogénatom vagy hidroxilcsoport, és ha R1 hidrogénatom, R2 hidrogénatom, R3 és R4 pedig Vagy hidroxilcsoport, és ha R1 hidroxilcsoport, R2 hidrogénatom, R3 hidroxilcsoport vagy metoxicsopört és R4 hidroxilcsoport, vagy R2 karbamoilcsoport és R3 és R4 mindegyik hidroxilcsoport. A találmány szerinti eljárás során használt egyik alapvegyület az, ahol az általános képletben R1, R3 és R4 hidroxilcsoport és R2 hidrogénatom. Ezt az alapvegyületet A-30912 A alapvegyületként ismerjük. Az A-30912 A alapvegyületet úgy állítjuk elő, hogy azt a II általános képletű vegyületet, ahol R linoleoilcsoport, sztearoilcsoport vagy palmitoilcsoport és R1, R2, R3 és R4 azonos az A-30912 A alapvegyület megfelelő csoportjaival, acilhasítunk. Ha a II általános képletű ciklusos peptid antibiotikumban R linoleoilcsoport, úgy az antibiotikumot A-30912 A antibiotikumként ismerjük, ugyanakkor, ha R sztearoilcsoport, úgy ez az antibiotikum a tetrahidro-A-30912 A komponens, míg, ha R palitoilcsoport, úgy az antibiotikum neve Aculeacin A. Az A-30912 A komponens az A-30912 keverék egyik tagja, amely tartalmaz még B, C, D, E, F és G komponenseket is. Az A-30912 keveréket és az A komponenstől a G komponensig Hoehn és Michel munkájából ismeretes, lásd a 4.024.245 .számú amerikai szabadalmi leírást. Az A-30912 A komponens azonos a Higgens és Michel által a 4.024.246 számú amerikai szabadalmi leírásban ismertetett A-22082 jelű antibiotikummal. A 4.024.245. számú és a 4.24.246. számú amerikai szabadalmi leírások közlése óta kiderült, hogy az A-30912 A komponens azonos az Echinocandin B- vel (lásd Benz és munkatársai, Helv. Chiin. Acta, 57, 2459, 1974, és az 568.386. számú svájci szabadalmi leírás). Az SL 7810/F antibiotikum szintén azonos az echinocandin B (lásd Keller-Juslen és munkatársai, Tetrahedron Letters, 46, 41474150, 1976, továbbá a 823.289. számú belga szabadalmi leírás, Keller-Juslen és munkatársai az A-30912 A komponens szerkezetét olyan II általános képletű vegyülettel írják le, ahol R linoleoilcsoport, R1, R3 és R4 hidroxilcsoport, továbbá, ahol R2 hidrogénatom. A tetrahidro-A-30912 A komponenst (tetrahidro-SL 7810/F, tetrhidro-echinocandin B) a 834.289. számú belga szabadalmi leírásban írják le, továbbá Benz és munkatársai ismertetik (Helv. Chim. Acta, 57, 2459-2477, 1974). A vegyület szerkezetét olyan II általános képletű vegyület írja le, ahol R sztearoilcsoport, R1, R3 és R4 hidroxilcsoport és R2 hidrogénatom. Ezt a vegyületet az egyszerűség kedvéért a jelen leírásban tetrahidro-A-30912 A-nak jelöljük. Az Aculeacin A az Aculeacin keverék egyik komponense , amely hat minor komponens között (aculeacin B, C, D, E, F és G) a legnagyobb mennyiségben fordul elő. Az aculeacin komponenseket Mizuno és munkatársai írják el a 3.978,210. számú amerikai szabadalmi leírásban. Ahogy azt a 859.067. számú belga szabadalmi leírásban olvashatjuk, az aculeacin A valószínűleg hasonló ciklusos peptid szerkezettel rendelkezik, mint a tetrahidro-A-30912 A, azzal a különbséggel, hogy a sztearoil-oldallánc helyett palmitoil-oldallánc szerepel. A találmány szerinti új ciklusos peptid alapvegyület, azaz az A-30912 A komponens (echinocandin B, SL 7810/F), a tetrahidro-A-30912 A komponens és az aculeacin A olyan I általános képletű vegyület, ahol R1, R3 és R4 hidroxilcsoport, míg R2 hidrogénatom. Az áz alapvegyület, (azaz az A-30912 A alapvegyület) fehér színű, amorf anyag, vízben, dimetil-formamidban, dimetil-szulfoxidban és metanolban oldódik, ugyanakkor például kloroformban, toluolban és dietil-éterbert nem. Az A-30912 A alapvegyület tapasztalati képlete’ C34H5 iN7015, molekulasúlya pedig 797,83. Az A-30912 A alapvegyület kálium-bromid tablettában vizsgált infravörös abszorpciós spektrumát az 1. ábrán mutatjuk be. Az alábbi abszorpciós maximumokat láthatjuk-.3340, széles (hidroxilcsoport, hidrogén-kötések), 2970, 2930, 2890 (CH, alifás CH3, CH), 1660 és 1625 (több karbonilcsoport), 1510-1550, 1430-1450 (CH), 1310-1340 1230-1260, 1080,835, 650 széles és 550, széles, cm"1. Az A-30912 A alapvegyület 66%-os, vizes dimetil-formamidban végzett elektrometrikus titrálása szerint egy titrálható csoport van jelen, amelynek pKaértéke 7,35 (eredeti pH 7,32). Az A 30912 A alapvegyületet nagyfelbontású folyadékkromatográfiával izoláljuk. Az A-30912 A alapvegyület közelítő retenciós ideje (K): 11,52 perc, ha az elkülönítés nagynyomású folyadékkromatográflával történik, az alábbi körülmények között:, oszlop:4 300 mm töltet: szilikagél/C J g • oldószer: ammónium-acetát, acetonitril és víz 1:2:97 arányú elegye áramlási sebesség: 3 ml/perc nyomás: 10 atm detektor: változtatható ultraibolya hullámhossz, 185.021 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
