185000. lajstromszámú szabadalom • Eljárás neplanocin antibiotikum-származékok előállítására
3 185000 4 A találmány tárgya eljárás az (I) általános képletű új neplanocin antibiotikum-származékok, nevezetesen a neplanocin A, valamint a neplanocin D származékai előállítására. Az (I) általános képletben R hidrogénatomot vagy hidroxilcsoportot védő benzoilvagy acetilcsoportot és X klóratomot, amino-, merkapto- vagy metiltiocsoportot jelent. A neplanocin A-t az (IA) képlet, a neplanocin D- származékokat a (II), (III), (IV) és (V) képlet ábrázolja. A találmány szerint előállított vegyületeknek értékes farmakológiai hatásaik vannak, így gombaellenes és tumornövekedést gátló hatásuk. Adenozin-szerkezetű antibiotikumokat ismertet például a 4 138 562 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás. A neplanocin antibiotikumokat, nevezetesen a neplanocin A, B, C, D és F antibiotikumokat az Ampullariella sp. mikroorganizmus valamely, az említett antibiotikumokat termelő törzsének megfelelő táptalajon való tenyésztésével állíthatjuk elő, majd az antibiotikum elegyet szétválaszthatjuk a megfelelő komponensekre. Az eljárást és termékeit a T 24 171 számon közzétett magyar szabadalmi bejelentés részletesen ismerteti. Az említett mikrobiológiai eljáráson kívül a neplanocin A antibiotikum szerves kémiai szintetikus módszerrel előállítható a neplanocin D-ből is, és ez az eljárás találmányunk egy részét képezi. A találmányunk szerinti eljárás kiindulási anyaga az (ID) képletű neplanocin D. Az eljárást az [A] és [B] reakcióvázlatok mutatják be. Az (I) általános képletű vegyületeket a következő módszerekkel állítjuk elő. Az (ID) képletű neplanocin D ciklopentán gyűrűjén lévő három hidroxilcsoportot benzoilkloriddal vagy ecetsavanhidriddel reagáltatva megvédjiik, majd a (II) képletű vegyület előállítására a benzoilcsoportokkal védett (VI) képletű vegyület adeninszerkezetén lévő hidroxilcsoportot merkaptocsoportra cseréljük ki, például foszforpentaszulfiddal reagáltatva. A védőcsoportok ezt követő eltávolításával jutunk a (III) képletű vegyülethez. Ha a (III) képletű neplanocin D-származékot metiljodiddal metilezzük, (IV) képletű neplanocin D- származékot kapunk. A (IV) képletű neplanocin D-származékot metanolos ammóniával reagáltatva alakíthatjuk az (IA) képletű neplanocin A-vá. Egy másik megoldás szerint az acetilcsoporttal védett (VII) képletű vegyületben az adeninrészben lévő hidroxilcsoportot klóratomra cseréljük ki, például tionilkloriddal reagáltatva és a kapott (V) képletű neplanocin D-származékot metanolos ammóniával reagáltatva — a védőcsoportok Iehasítása mellett — az (IA) képletű neplanocin A-vá alakítjuk. A találmány kiterjed a (II), (III), (IV) és (V) képletű közbülső vegyületek előállítására is. A neplanocin A gyengén bázisos anyag, és a következő tulajdonságai vannak : (1) Elemi összetétele: talált : C=49,96%, H=5,00%; N=26,43%, számított: C=50,19%, H=4,97%, N=26,60%. (2) Molekulasúlya tömegspektrumelemzésből számítva 263. (3) Molekulaképlete: C11H13N503. (4) Olvadáspontja : termikus elemzéssel meghatározva : 216 °C. (5) Fajlagos forgatóképessége: [«]“=-157° (c=0,45%, vízben). (6) Ultraibolya abszorpciós spektrum (14 y/ml), vízben: Amax=263 mji, EJ602,1 ; 3 pH-nál: Xmax=261 mu, E}°^=566,4; 10 pH-nál: Amax=263 mjz, Ej^m=595,0. (7) Infravörös abszorpciós spektrum (KBr): Abszorpciós sávok: 3360, 3200, 2920, 1640, 1600, 1570, 1480, 1415, 1370, 1330, 1300, 1250, 1205, 1160, 1115, 1080, 1050, 1005, 910, 850, 790, 730 cm"1 2 3. (8) Oldhatóság : Oldható : vízben, dimetilszulfoxidban, dimetilformamidban, ecetsavban és vizes acetonban. Oldhatatlan: etilacetátban, kloroformban, benzolban, hexánban. (l>) Színreakció : Pozitív: káliumpermanganát elszíntelenítés, perjodát oxidálás és ánizsaldehid. Negatív: vas(III)-klorid, ninhidrin, anilinftalát, Molisch- és Fehling-próba. (10) Kémhatás: gyengén bázisos. (11) Színe: fehér tűkristályok. (12) Rf-értéke kovasavgélen (Tokyo Kaséi Co., f-kovasavgél : 6:1:1 arányú n-butanol—ecetsav—víz : Rf=0,36" 10 : 0,5 : 2 arányú n-butanol—tömény ammónia— víz: Rf-0,27" 10:1:1 arányú n-propanol—tömény ammónia— víz: Rf=0,41 " 10: 1 arányú aceton—víz : Rf=0,34; 10:2:1 arányú etilacetát—metanol—víz: Rf= 0,21; 10:2:1 arányú kloroform—metanol—ecetsav: Rf=0,17. A neplanocin A biológiai tulajdonságai a következők: (1) Növények patogén gombáinak növekedését gátló hatása: A neplanocin A 100 y/ml koncentrációjú oldata agar lemezen a Helmintosporium oryzae M 0306 tenyészeten 18,9 mm átmérőjű gátlási zónát mutat. (2) Daganatellenes hatás: Murine leukémia L—1210 daganat 10f sejtjét intraperitoneálisan egerekbe oltottuk be, és a beoltás után egy nappal 5 napon át, naponta egyszer intraperitoneálisan csoportonként 0,16 mg/kg, 0,32 mg/kg, 0,63 mg/kg, 1,25 mg/kg, 2,5 mg/kg, illetve 5,0 mg/kg neplanocin A-t adtunk be. Kontrollcsoportonként 10 egeret használtunk, és minden egyes kezelt csoportban 7 egér volt. A megfigyelés 15. napján a kontrollcsoportnál megfigyelt átlagos túlélési időtartam 7,4 nap volt. A kontrollcsoporttal Összehasonlítva a kezelt csoportoknál az élettartam meghosszabbodását figyeltük meg; azaz a 0,16 mg/kg adaggal kezelt csoportnál 158% ; a 0,32 mg/ kg adaggal kezelt csoportnál 170%-os volt az élettartam meghosszabbodása: a 2,5 mg/kg-os adaggal és az 5,0 mg/kg-os adaggal kezelt csoportokban halálozást nem tapasztaltunk. Az L—1210 daganatsejtekhez hasonlóan az Ehrlich ascites daganatsejtekkel, a Sarcoma—180, a P—388 leukémia sejtekkel beoltott egereknek és a Yoshida szarkóma sejtekkel beoltott patkányoknak a neplanocin A be5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
