185000. lajstromszámú szabadalom • Eljárás neplanocin antibiotikum-származékok előállítására
5 185000 6 adása után az élettartamuk meghosszabbodását figyeltük meg. (3) Heveny toxicitás : LDjo (50% halálozást okozó adag): 13,7 mg/kg egereknek (intraperitoneálisan beadva). Halálozást nem figyeltünk meg akkor, ha 14 napon át intraperitoneálisan 5 mg/kg/nap mennyiséget adtunk be. Irányelvek és adagolás: A heveny leukémia kezelésére a gyógyszert fiziológiás nátrium-klorid oldatban oldva, naponként 5—20 mg mennyiségben 7 napon át naponta egyszer adjuk be. A neplanocin A-t hatásosan lehet a krónikus leukémia, a gyomor—bél-rendszer rákja, tüdőrák, méhrák, emlőrák és a rosszindulatú nyirok leukémia kezelésére használni. A neplanocin A-t ásványi savakkal vagy szerves savakkal alkotott, fiziológiailag elviselhető sói alakjában, például hidrokloridként, acetátként, tartarátként, cifráiként vagy szukcinátként is lehet alkalmazni. A kiindulási anyagként használt neplanocin D fizikaikémiai tulajdonságai a következők: (1) Elemi összetétele: C=49,70%; H=4,64%; N= 21,20%. (2) Molekulasúlya tömegspektrum elemzésből számítva 264. (3) Molekulaképlete: CuH12N404. (4) Olvadáspontja : 236—237 °C. (5) Fajlagos forgatóképessége: [a]” = — 145° (c=0,6%, vízben). (6) Ultraibolya abszorpciós spektruma : vízben : Xmax=251 mu, E}”^ =479 ; savas vízben: Xmax=251 m[i, E}°%=453 ; lúgos vízben : Xmax=256 mij., EJ°41=508. (7) Infravörös abszorpciós spektruma (KBr) : Abszorpciós sávok: 3420—3120, 2940—2880, 1680, 1580, 1545, 1510, 1440, 1390, 1305, 1210, 1110, 1075, 1040,1000,990,975,900, 845,780 cm'1. (8) Oldhatóság : Oldható : vízben, dimetilszulfoxidban, dimetilformamidban, ecetsavban és piridinben. Oldhatatlan: etilacetátban, kloroformban, benzolban és hexánban. (9) Színreakció : Pozitív : káfiumpermanganát elszíntelenítés és perjodát oxidáció. Negatív: ninhidrin, Fehfing-reakció és vas(III)-klorid. (10) Színe: fehér tűkristályok. (11) Rf-értéke (kovasavgélen, Tokyo Kaséi Co., Kovasavgél-f) : 6: 1 : 1 arányú n-butanol—ecetsav—víz : Rf=0,27 ; 10: 0,5 : 2 n-butanol—tömény ammónia—víz : RT 0,07; 10 : 1 :1 arányú n-propanol—tömény ammónia— víz: Rf=0,18 ; 10: 1 arányú aceton—víz: Rf=0,33. A következő példák a találmányt közelebbről szemléltetik, de terjedelmét semmiképpen sem korlátozzák. A hőmérsékleti adatokat Celsius-fokban adjuk meg. Az 1. és 2. példa a kiindulási anyag előállítását mutatja be. 1. példa 2% glükózt, 2% keményítőt, 1% élesztőkivonatot, 1% kazein-hidrolizátumot és 0,2% kalciumkarbonátot tartalmazó 100 ml 6,5 pH-jú vizes táptalajt 500 ml-es lombikba töltve, 120 °C-on 15 percig sterilizáljuk. Két ilyen lombikot Ampullariella sp. A 11079 FERM-P 4494 sz. törzs ferde tenyészetéből egy kacsnyival beoltunk, és rázás közben 30 °C-on inkubáljuk. Az inkubált folyékony táptalajt 4 nap múlva 20 liter, ugyanilyen sterilizált táptalajt tartalmazó 30 literes fermentorba töltjük, és percenként 300 fordulattal keverve és percenként 20 liter levegővel levegőztetve, 48 óra hosszat 30 °C-on tenyésztjük. Az így inkubált tenyészetet 4% glükózt, 1% szójalisztet, 0,4% húskivonatot, 0,4% peptont, 0,1% élesztőkivonatot, 0,25% nátriumkloridot és 0,1% kalciumkarbonátot tartalmazó, 6,5 pH-jú 200 liter folyékony táptalajra töltjük, és percenként 180 fordulattal keverve és percenként 130 liter levegővel levegőztetve, 30 °C-on 40 óra hosszat tenyésztjük. A mintegy 200 liter térfogatú tenyésztett folyékony táptalajt szűréssel elválasztjuk, és a micéliumtömeget vízzel mossuk. A szüredéket és a mosófolyadékot egyesítve, körülbelül 140 liter víztiszta szüredéket kapunk. 2. példa Az 1. példa szerint előállított szüredékhez 3,6 kg porított aktívszenet adunk, 40 percig keverjük, majd az aktívszenet szűréssel eltávolítjuk, és vízzel alaposan mossuk. Az eluálást 70%-os metanollal hajtjuk végre. 40 liter eluátumot vákuumban szárazra párolva, neplanocin D-t tartalmazó 80 g por alakú nyers terméket kapunk. A 80 g nyers terméket oszlopba töltött és 10:1: 1 arányú n-propanol—tömény ammónia—víz eleggyel nedvesített 6 liter kovasavgélre visszük fel, majd ugyanilyen oldószerkeverékkel eluálunk. Minden egyes 600 g eluátumot frakcionálunk, és a 20—37. számú frakcióban találjuk a neplanocin D-t. Ezeket a frakciókat egyesítjük, vákuumban 30 ml-re bepároljuk, és a maradékot hűtés közben állni hagyjuk. A kivált csapadékot szűréssel elválasztva, 460 mg nyers, kristályos neplanocin D-t kapunk. A nyers termékként kapott 460 mg kristályokat 3 ml forró vízben oldjuk, és 1850 ml Sephadex G—15-tel töltött és vízzel nedvesített oszlopra visszük fel, majd vízzel eluáljuk. Mindegyik 100 ml-es eluátumot frakcionáljuk, a 15. és 16. számú frakciókat egyesítjük, és a 200 ml oldatot 20 ml-re pároljuk be. A bepárlási maradékot szobahőmérsékleten állni hagyva, fehér tűkristályok alakjában 314 mg neplanocin D válik ki. 3. példa 1. 376 mg neplanocin D-t 10 ml vízmentes piridinben feloldunk, az oldatot 55 °C-on alaposan keverjük, majd hozzácsepegtetünk 0,9 ml benzoilkloridot, és további 2 óra hosszat 60—65 °C-on keverjük. Ezután az oldatot 2 óra hosszat 40—45 °C-on, majd éjjelen át szobahőmérsékleten tartjuk. Keverés közben 10 ml vizet adunk hozzá, és 25 perc múlva csökkentett 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
