184974. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A 7-helyzetben szubsztituátl 3-oxo-szteroid-származékok előállítására
17 184974 18 Analízis: C24H3403=s= 370,53 képletre: Számított: C% 77,80; H% 9,25; Talált : C% 77,90 ; H% 9,30. MMR spektrum (CDC13 60 MHz) : 1,03 ppm : 18 helyzetű metilcsoport, 5,92 ppm : 4 helyzetű hidrogénatom, [a]D= +27° ±2° (c=0,6% CHC13). 22. példa Gyógyászati készítmény előállítása A 10. példa szerinti hatóanyagból 50 g-os préselt tablettákat állítunk elő az alábbi összetételszerint : 10. példa szerinti vegyület 50 mg +vivőanyag (talkum, keményítő, magnézium-sztearát). A 10. példa szerint előállított vegyület farmakológiai vizsgálata : I. Antialdoszteron hatás vizsgálata A Kagawa C.M. (P.S.E.B.M. 1958, 99, 705) és Marcus (Endrocrinology 1952, 50, 286) szerinti vizsgálatot az alábbiak szerint végezzük : A vizsgálati módszer a következő : 180 g súlyú Sprague Dawley SPF IFFA CREDO fajtájú patkányokat veszünk, mellékveséjüket eltávolítjuk 7 nappal a diurézis előtt ; az eltávolításhoz intráperitoneálisan beadott 100 mg/kg Imaigene (ketamin) érzéstelenítő dózist használunk. Az operációt követően, a vizsgálat előtti napig az állatoknak fiziológiás szérumot adunk inni. 17 órával a diurézist megelőzően elvonjuk a táplálékot az állatoktól, majd a fiziológiás szérumot 5%-os vizes glukóz-oldattal helyettesítjük. A vizsgálandó anyagot orálisan adjuk be 1 órával a ketrecbe helyezés előtt. A diurézis megindításakor az állatok egy részének intraperitoniálisan só-oldatot adunk be, 5 ml 0,9%-os fiziológiás szérum-oldatot állatonként, a másik csoport 1 n g/kg aldoszteron-monoacetát 2,5%-os alkoholos oldatát adjuk be szubkután. Ezt követően az állatokat 4 óra hosszat diurézis-ketrecbe helyezzük, a táplálék és az innivaló megvonásával. A 4 óra eltelte után a hólyagra kifejtett nyomással mesterséges vizeletürítést idézünk elő, majd a vizelet menynyiségét mérjük. A ketreceket gondosan öblítjük, az öblítővízzel a vizelet térfogatát 50 ml-re kiegészítjük. A kapott oldatban megvizsgáljuk a nátrium és a kálium mennyiségét ; a vizsgálatot lángfotométerrel és autoanalizátorral végezzük. A kapott eredményeket az 1 ng/kg aldoszteron-monoacetát szubkután injekció által előidézett inhibitációjaként, %-ban fejezzük ki. Nátrium és kálium koncentráció arányának logaritmusában fejezzük ki az eredményeket (1. Kagawa Endocrinology 1960, 67, 125—132). Az irodalmi helyen leírt vizsgálat eredménye az alábbi: Az orális úton be-Inhibfció adott dózis %-ban mg/kg a 10. példa 2 80 szerinti termék 0,4 30 A 10. példa szerinti vegyület androgén hatását Raynaud és társai által leírt módszerrel vizsgáltuk (J. Ster. Biochem. 1975—615—622). A módszer leírása : kasztrált hím patkányokból 24 óra előtt eltávolított prosztata-mirigyet 10 mmol trometamin, 0,25 mól szacharóz 7,4 pH-jú puffer oldatában (a pH-t sósavval állítjuk be) homogenizálunk. A homogenizált terméket 1 óra hosszat 105 000 fordulatszámmal centrifugáljuk. A felülúszó folyadékot vagy „cytosolt” úgy állítjuk be, hogy az 1/5 súly/térfogat hígítású legyen. A kinyert cytosolt 0 C° hőmérsékleten 2 óra hosszat inkubáljuk, meghatározott koncentrációjú tríciummal jelölt 17(i-hidroxi-17a-metox’-ösztra-4,9,ll-trién-3-ont adunk hozzá (e vegyületet a továbbiakban R termékként jelöljük). A műveletet növekvő koncentrációjú vizsgálati termék jelenlétében vagy távollétében végezzük ; a vizsgálati termék tesztoszteron vagy a fenti, R termék radioinaktív formában vagy a vizsgálati anyag. 2 óra eltelte után a tríciummal jelölt anyagot tartalmazó terméket aktívszénnel adszorbeáltatjuk ; a művelethez 1,25%—0,625%-os dextrán-oldatot használunk. Ezt követően : — a trícium megkötésére képes R vegyület százalékos értékét ábrázoljuk a felhasznált R vegyület, továbbá a tesztoszteron, valamint a vizsgálati vegyület log koncentrációjához viszonyítva ; —150 értékét az alábbi egyenlet segítségével kapjuk meg: B B/T Max.+B/T Min. II. Androgén hatás vizsgálata T 2 B/T maximum jelenti a trícium megkötésére képes R vegyület százalékát, amikor nem adunk az elegyhez R vegyületet, B/T minimum jelenti a trícium megkötésére képes R vegyület százalékát, amikor maximális mennyiségű radioinaktiv R vegyületet adunk az elegyhez. Az I50-et ábrázoló egyenes vonal és a fenti görbék metszéspontjából kapjuk meg CT és CX értékét. CT jelenti azt a tesztoszteron-koncentrációt, amely képes a tríciumos R vegyület megkötődését 50%-ban inhibitálni. CX jelenti a vizsgálati vegyületnek azt a koncentrációját, amely képes a tríciumos R vegyület megkötődését 50%-ban inhibitálni. A vizsgált anyag relatív affinitását (RLA) az alábbi képlettel fejezzük ki : CT RLA=100x—— CX A kapott eredmények az alábbiak : Tennék RLA tesztoszteron 100 10. példa szerinti termék 0,02 5 10 15 20 25 30 35. 40 45 50 55 60 65 10
