184883. lajstromszámú szabadalom • Eljárás emlékezetjavítás gyógyszerkészítmények előállítására
5 184883 6 A kezelést általában jóval kisebb adagokkal kezdjük, mint az optimális adag, majd az adagot kis lépésekben emeljük az optimális hatást biztositó adag eléréséig az adott körülmények között. így kényelem szempontjából a napi adagot kisebb részekre osztjuk és az egész napra elosztva adagoljuk. A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmények hatásosságát az mutatja, hogy milyen mértékben képesek gátolni az elektrokonvulzív sokk által okozott amnéziát. A kísérlet részletesen a 4,145.347 számú amerikai szabadalmi leírásban van leírva. Az egyetlen eltérés ettől a kísérlettől az, hogy a jelen esetben a vizsgált hatóanyagot orálisan adtuk be, és az elektrokonvulzív sokk időtartama 1,0 másodperc. Az amnézia gátlásának a mértékét százalékban a kö- 5 vetkező módon jelöljük: 40 százalék vagy több (aktív=A), 25—39 százalék (határterület=C) és 0—24 százalék (hatástalan=N). Az I. táblázatban megadjuk a dihidro-lH-pirrolizin-3,5-(2H,6H)-dion-hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények amnézia-gátló hatását orális beadás esetén. 10 I. táblázat Adag, mg Hatóanyag/kg 0,63 1,25 2,50 5,00 20,00 40,00 80,00 160,00 320,00 %-os gátlás 73 27 25 69 31 92 63 62 85 Hatásfoka A C C A C A A A A A dihidro-lH-pirrolizin-3,5-(2H,6H)-dion-hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények emlékezet-javító hatását rágcsálókon végzett reagálási időkésés-kísérleten (Rodent Delayed Alternation test) mutatjuk be. Ez a kísérlet a találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmények rövid időtartamú memóriafeladat elvégzésére irányuló hatását bizonyítja idomított rágcsálókon végzett kísérletben. Az alkalmazott viselkedésbeli feladat olyan térbeli reagálási időkésés, amely különálló módszereket használ szabad működési elrendezésben. Ez a feladat arra készteti az állatot, hogy emlékezzék egyik próbától a másikig arra, hogy a két különböző emelő közül melyik kapcsolatos az előző próbával. Az ezt követő próbára irányuló pontos választás mindig más (vagy ellentétes) az előző próbával. A két próba közötti késés (intertrial interval vagy ITI) szabályozása esetén lehetővé válik a rövid időtartamú memória mérése két különböző időnél, miután az emlékezésre késztető esemény megtörtént. Előzetes idomítás Mivel a reagálási idő késésének a vizsgálatával kapcsolatos feladat komplex, meglehetősen széleskörű idomításra van szükség a gyógyszerrel végzendő kísérlet megkezdése előtt. Először beidomítjuk a patkányokat arra, hogy egy emelőkar megnyomásakor táplálékot kapnak. Ezektől az állatoktól 22 órán át programszerűen megvontuk a táplálékot. Kezdetben egy emelőkar egyszeri lenyomása 45 mg táplálék-pelletet szolgáltat jutalomként (folyamatos utánpótlási program vagy CRF program). Fokozatosan növeljük a karlenyomások számát mindaddig, ameddig az állatnak 8-szor kell reagálnia (FR 8 program) ahhoz, hogy egy pelletet kapjon. Az állatokat ezután úgy idomítjuk, hogy változtassák reagálásukat a két elérhető emelőkar között. A megfelelő kar lenyomása esetén egy, a kar felett elhelyezett figyelmeztető lámpa jelzi a helyes ténykedést. Mihelyt az állat az FR 8 követelményt teljesíti, a figyelmeztető fényjelzést elvesszük (a lámpák mindkét kar felett kigyulladtak) és az állatoknak emlékezniök kell arra, hogy melyik a helyes oldal az előző kísérlethez használt kar alapján. Abban az esetben, ha az állat csekély (10—20 másodperces) késéssel tesz sikeresen különbséget a próbák között — általában 4—6 hetes idomítás után — akkor megkezdjük a kísérletet a gyógyszerrel. Gyógyszervizsgálat A gyógyszervizsgálat két egymást követő kísérletsorozatból áll. Az egyetlen különbség a két sorozat között az, hogy a gyógyszer orális beadását a második kísérleti napon végezzük. Az első sorozat egy nem gyógy szerezett kontrollsorozat, amelynek eredményeit összehasonlítjuk a második, a gyógyszert tartalmazó, sorozat eredményeivel . Valamely kísérletsorozat a következő műveletekből áll : fél órával a kísérleti szobába való elhelyezés előtt az illatot kivesszük a telephelyén lévő ketrecéből és orálisan beadjuk a kísérleti vagy a kontrolloldatot (1 ml/kg). Telephelyükön 1—3 állatot helyezünk el egy-egy ketrecben és 12—12 világos/sötét ciklus hatásának tesszük ki azokat. Ketrecükben és a kísérleti szobában az állatok szabadon juthatnak vízhez. Az állatokat ezután őrző ketrecbe tesszük és ott tartjuk azokat a gyógyszerabszorpció idején, amikoris a kísérlet megkezdődik. Harminc perccel a befecskendezés után az állatokat a kísérleti szobába visszük és a kísérleti szakaszt a készülék reagálásától számítjuk. A vizsgáló kamrában (Skinner box) az állatokat egy kísérletsorozatban vizsgáljuk, minden egyes kísérletet az előzőtől egy próba közötti időszakasszal (ITI) választunk el, amelynek a hosszát a vizsgáló készülék szabályozza. A próbák között a lámpák sötétek. A megfelelő kar mindig az előző próbánál választott kartól eltérő kar (az FR 8 követelmény teljesítésénél). A nem helyes reagálásokat — amelyek ugyanazon kar lenyomásából adódnak, mint az előző próbánál — megszámoljuk, ez azonban nem befolyásolja a próba végeredményét, ha az FR 8 követelmény teljesedik. Abban az esetben, ha az állat reagálása pontosan K-szor ismétlődik (FR—8), akkor az állat megkapja a táplálékot és a próba be van fejezve. Abban az esetben, ha az állat 8-szor reagál úgy, hogy a nem megfelelő kart nyomja le, akkor 1 másodpercig szól egy berregő és a 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
