184846. lajstromszámú szabadalom • Eljárás homociromsav-oligoribozid-származékok előállítására
1 184 846 2 A találmány tárgya eljárás homocitromsav-oligoribozid és sói előállítására. E származékok fogszúvasodást gátló hatással rendelkeznek. A homocitroinsavoligoribozid-származék új, szerkezetét az (1) képlet mutatja. A ribóz oldallánc egyes tagjai közötti glikozid kötések mindegyike ribozil-(l-*2)-ríbozil vagy ribozil(l->3)-ribozil kötés. A fenti homocitromsav-oligoribozid Streptomyces sp., például Streptomyces sp. MF980-CF1 (FERMP5430) táptalajában termelődik. Deponálási szám ATCC: 31820. Ismeretes, hogy kísérletek történtek arra vonatkozóan, hogy a fogszuvasodás megelőzésére fogbevonatgátló készítményeket alkalmazzanak. (J. periodontol. 45 177-186 [1974] „Chemotherapy of dental plaque infections” oral sei. rev. 9 65—106 [1975].) Az ismert készítményeknél azonban kedvezőbb hatást biztosít a találmány szerinti eljárással előállított hatóanyagot tartalmazó készítmény. A találmány szerinti hatóanyag már 20 mikrogramm jelenléte esetében is hatásos. A hatás vizsgálata ismert módon történik. (Tetrahedron letters 1267—1270, 1981, Agric. bioi. chem 4 6 1457 — 1464 [1982], agric bioi. chem 4 6 1987—1996 [1982], j. of antibiotics 3 4 344—345 [1981].) Előállítása például az alábbi módon történik. Egy, a Streptomyces genusba tartozó és a találmány szerinti homocitromsav-oligoribozidot termelő fenti mikroorganizmust egy szokásosan alkalmazott - szénás nitrogénforrást, szervetlen ionokat, és adott esetben szerves mikroelemeket, így vitaminokat és/vagy aminosavakat tartalmazó - közegben tenyésztünk. A táptalajban termelődött és felhalmozódott homocitromsavoligoribozidot extraháljuk, elkülönítjük és összegyűjtjük. A tenyészközegben szénforrásként szénhidrátokat, például glicerint, glükózt, maltózt, szacharózt, laktózt, keményítőt és dextrint használhatunk. Különösen megfelelő a maltóz vagy a burgonyakeményítő. Nitrogénforrásként például szójabablisztet, datolyalisztet, gyapotmaglisztet, száraz élesztőt, húsextraktumot, kazeint, kukorícaáztatási lét, nitrát nitrogént és ammónia nitrogént használhatunk. Különösen előnyös a gyapotmagliszt vagy a kukoricaáztatási lé. Kívánt esetben a közeghez még magnézium-, mangán-, nátrium-, kálium-, vas-, kalcium-, klór-, foszfát- és/vagy szulfátionokat is adhatunk. A tenyésztést előnyösen aerob úton, levegőztetéssel, keveréssel vagy rázással, valamint 25-30 °C-on való inkubálással végezzük. Bármilyen más inkubálási hőmérséklet is alkalmazható, amennyiben az lehetővé teszi a homocitromsav-oligoribozidot termelő organizmus növekedését. Az inkubálást a táptalajban megfelelő mennyiségű termék felhalmozódásáig folytatjuk. Az inkubálási idő általában 2^7 nap. A Streptomyces sp. MF980-CF1 (FERM-P5430) olyan mikroorganizmus, amely képes homocitromsavoligoribozid termelésére. E törzs mikrobiológiai tulajdonságait az alábbiakban ismertetjük. A törzset Lake Kawaguchi környékéről összegyűjtött tennőföldből különítettük el. a) Morfológia Az agar táptalajon termelt, fejlett MF980-CF1 törzs lineáris vagy spirális szerkezetű légmicéliumokkal rendelkezik, amelyek kissé elágazó, elnyújtott szubsztrátiniceliumokból állnak ki. Érleléskor a miceliumok tetején 10—50 hengeres spórából (0,8 X 1,8 mikrométer) álló spóralánc képződik. Elektronmikroszkópos vizsgálatok felfedték, hogy a spórák felülete sima, valamint 5 a spóráknak nincs tüskés vagy hajszerű szerkezetük. Flagellum és sporangium nem figyelhető meg. így a törzs a tipikus Streptomyces sp. törzsek közé sorolható. 10 b) Jellemzők különböző közegekben 1) Szacharóz-nitrát agar (27 °C-os inkubálás): A sárgás-barna színű, szubsztráton növekedett micélium 15 (2 db jelű extra pasztell színárnyalatú sorozat; színárnyalat a Color Harmony Manual szerint meghatározva) felett fehér (white a) és gyenge légmicélium képződik. A közegben nem képződnek megkülönböztethető diffuzibiiis pigmentek. 20 2) Glicerin-aszparagin agar (27 °C-os inkubálás): A szubsztrátumon növekedett micéliumok színe vörösesbarna (5 lg, 5-ös színárnyalat). Fehér légmieéliumok először a telep perifériális részein tűnnek fel, majd fokozatosan beborítják az egész telepet. Nem képződnek meg-25 különböztethető oldható pigmentek. 3) Keményítő agar (27 °C-os inkubálás): Barnás-fehér (5 ba, majdnem szürke sorozatok) légmieéliumok képződnek a narancs színű (4 pe, 4-es színárnyalat) szubsztrátum felett. Nem képződnek meg-30 különböztethető oldható pigmentek. 4) Tirozin agar (27 °C-os inkubálás): A szubsztrátumon növekedett micéliumok színe vörösesbarna (5 lg, 5-ös színárnyalat). A telep perifériális részein fehér színű (white a) légmieéliumok képződnek. 35 Melanoid pigment képződik. 5) Tápláló agar (27 °C-os inkubálás): A növekedés gyenge és nincs jellegzetes színe. A légmieéliumok képződése szintén gyenge. 6) Élesztő-maláta agar (27 °C-os inkubálás): 40 A barna színű szubsztrátum (chm 6 ng, 6-os színárnyalat) felett szürkés-fehér légmieéliumok képződnek, és fokozatosan átszíneződnek bíboros-szürkévé (chm 5 de, majdnem szürke sorozatok). Barnás-melanoid pigment képződik. 45 7) Zabliszt agar (27 °C-os inkubálás): A vöröses-narancs színű (chm 5 le, 3-as színárnyalat) szubsztrátumon növekedett micélium felett barnásszürke (chm 13 fe, majdnem szürke sorozat) színű légmieéliumok képződnek. Nem képződik megkülönböz-50 tethető oldható pigment. gg c) Fiziológiai tulajdonságok 1) A tenyésztés hőmérséklettartománya 14-33°C. 2) Keményítő agaron a keményítőt hidrolizálja. 3) A lefölözött tejet peptonizálja, de nem koagulálja. g0 4) Tirozin agarban, élesztő-maláta agarban és élesztőmaláta-vas agarban melanoid pigment képződik. 5) A nitrátot redukálja. 6) A zselatint nem cseppfolyósítja. 65 2
