184720. lajstromszámú szabadalom • Eljárás béta-lipotropin hormon fragmens peptid származékok és az ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 juk. Olvadáspont: 111 113 °C. Kitermelés:90%. Rr (CHCI3 :CHjOH:Wa/70:30:5) = 0,23 Si02-on. 5. Z-Ser-GIu(OtBu)-Tlir-Pro-OH A H-Tiir-Pro-OMe-t Z-Thr-OH és H-Pro-OMe öszszekapcsolásával nyerjük HOBt/DCCl felhasználásával, azt követő hidrogénezéssel, majd egymást követően Z-Glu(OtBu)-OH-vaI és Z-Ser-OH-vál végezzük a kapcsolást. Mindkét kapcsolási reakciót HOBt/DCCI módszerrel végezzük, a keletkező Z-védett pepiid első kapcsolása után hidrogénezünk. A keletkező Z-Ser-GIu(OtBu)-Thr-Pro-OMe pepiidet elszappanosítjuk díoxán és víz 9:1 arányú keverékében történő oldással és 0,2 n NaOH hozzáadásával, az A. 3. pontban ismertetettek szerint. R, (CHClj :CH3OH:Wa/70:30:5) = 0,29 Si02-on. D) A H-Leu-VaI-Thr-(L vagy D)-Leu-OtBu szintézise 1 H-Thr-Leu-OtBu A Z-Thr-Leu-OtBu-t HOBt/DCCl kapcsolási módszer szerint reagáltatjuk (J.A.C.S. 95, 877,1973). Olvadáspont: 81,5-83 °C. Kitermelés: 100%, A Z-védett dipeptidet a fentiekben leírtak szerint hidrogénezzük. Rf (To:EtOH/8:2) = 0,20 Si02-on. 2. H-Tlu-D-Leu-OtBu A Z-Thr-D-Leu-OtBu hidrogénezésével nyert termék olvadáspontja: 89-92 °C. Rf (ToJEtOH/8:2) = 0,18 Si02-on. 3. H-Val-Thr-Leu-OtBu 7,85 g Z-Val-ONp és 5,53 g H-Thr-Leu-OtBu 160 ml DMF-ben C. 2. pont szerint végzett összekapcsolásával 72%-os kitermeléssel Z-Val-Thr-Leu-OtBu-t kapunk. Olvadáspont: 127-129 °C. Ennek a Z-védett pepiidnek metanolban végzett hidrogénezése 9,1 g olajszerű terméket ad. Rf (CHCI3 :CH3 OH/8.-2) = 0,60 Si02 -on. 4. H-Val-Thr-D-Leu-OtBu A D. 3. pontban leírtakhoz hasonló módon állítottuk elő. Rf (CHCI3 :CH3OH/8:2) = 0,55 Si02-on. 5. H-Leu-Val-Thr-Leu-OtBu 6.7 g Z-Leu-ONp-t és 6,1 g D. 3. pont szerint előállított pepiidet 160 ml DMF-ben a C. 2. pontban leírtak szerint kapcsolunk össze, így 7,7 g Z-védett pepiidet nyertünk. Kitermelés: 77%. Olvadáspont: 153-155 °C. A Z-védett peptidet metanolban liidrogénezzük. Rf = 0,75 Si02-on. Hasonló módszerrel állítjuk elő az alábbi peptideket: 6. H-Leu-Val-Thr-D-Leu-OtBu Rf = 0,80 7. H Lcu-Val-Thr-MeLeu-OtBu Rf = 0,68 Rf (CHCI3.CH3OH:Wa/7030:5) Si02-on meghatározva. E) Boc-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-OMc és analógjainak szintézise J. Bc>c-BIy-Phc-Mct-Thr-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-OMe Az A. 3. pont szerinti 2,1 g Boc-Gly-Phe-Met-OH-t és 3,15 g H-Thr-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-OMe-t (B. 3. pont szerint) kapcsolunk össze 2 ekvivalens HOBt és 1 ekvivalens DCCÍ segítségével a B.l. pontban ismertettek szerint. A DCHLf-t szűréssel elkülönítjük, a szűrletet szárazra pároljuk és a maradékot metanolból kikristályosítjuk. Olvadáspont: 191—193 °C (bomlással). Kitermelés: 61%. 2. Boc-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-OH 2,67 g E. 1. pont szerint előállított peptidet ol dunk 30 ml diósán és víz 9:1 arányú elegyében, majd 13,8 ml 0,217 g nátrium-lűdroxidot adunk az oldathoz. A reakdóelegyet szobahőmérsékleten 18 percig keverjük. A keverék pH-ját i n sósavval 2-re állítjuk. 10 ml víz hozzáadása után szilárd fázis kristályosodik ki, amelyet kiszűrünk és szárítunk. Kitermelés: 80%. Rf (CHCl3 :CM3OH:Wa/70:30:5) - = 0,58 Si02 -on. Hasonló módon az alábbi peptideket állítjuk elő: 3. Boc-Ala-Phe-Met-Thi-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-OH Rf (CHC13 :CH3OH:Wa/70:30:5) = 0,64 S102 -on. 4. Boc-Leu-Phe-Met-Thr-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-OH Rf (CHC13 :CH3OH:Wa/70:30:5) = 0,67 Si02-on. F) H-Ser-Rj -Thr-Pro-Leu-Val-Tbr-Leu-ütBu(Rj = = Glu(OtBu) vagy Gin) és analógjainak szintézise 1. H-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OtBu A c. 4. pont szerinti 1,17 g Z-Ser-Gln-Thr-Pro-GH-t és a D. 5. pont szerinti 930 g H Leu-Val-Thr-Leu-OtBu t 2 mól ekvivalens HOBt és 1 mól ekvivalens DCC1 felhasználásával a B. 1. pontban leírtak szerint kapcsoljuk össze, A keletkező DCHU szűréssel történő eltávolítása után a szűrietet szárazra pároljuk és szekunder-butanol és CHC13 2:3 arányú keverékében oldjuk, majd az oldatot mossuk, és szárazra pároljuk. A maradékot DMF és EtOAc 1:20 arányú keverékéből kristályosítjuk ki. Olvadáspont: 210-212 °C. Kitermelés: 72%. A keletkező Z-védett peptidet a fentiekben ismertetett módon metanolban hidrogénezzük. Kitermelés: 86%, Rf (CHCI3 :CH3 OH:Wa70:30:5) = 0,25 Si02 -on. Hasonló módszerrel az alábbi peptideket állítjuk elő: 2. H-Ser-GLu(Ot Bu)-Thr-Pro -Le u-Val-lh r- Le u-OtBu Rf (CHCI3 :CH3 OH.Wa/70.30:5) = 0,35 Si02 -on. 3. H-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-D-Leu-OtBu Rf (CHC13 :CH3OH:Wa/70:30:5) = 0,30 Si02 -on. 4. H-Ser-Gin-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-NHCH3 100 mg % -Ser -Gin -Thr -Pro-Le u-Val-Thr-Le u-0 H-t (Id. F. 5. pont) 2 ml DMF-ben oldunk, majd az oldatot 10 C-ra hűtjük. Ezt követően hozzáadunk 1 mól ekvivalens TEA-t és l mól ekvivalens klór-hangyasav-etílésztert és a keveréket 10 percig keverjük A monometil-aniin feleslegének eltávolítása után a keveréket 30 percig -10 °C-on, majd 2 órán átO C- on keverjük, végül az egész oldatot szárazta pároljuk. A maradékot szekunder-butanol és kloroform 2:3 arányú keverékében oldjuk, majd az oldatot mossuk, szárítjuk és szárazra pároljuk. Olvadáspont: 223-225 °C. Kitermelés: 65 mg. 184.720 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
