184720. lajstromszámú szabadalom • Eljárás béta-lipotropin hormon fragmens peptid származékok és az ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 A keletkező Z-védett peptid-monoetil-amidot DMF-ben 2 szokásos módon hidrogénezzük. Rf (CHC'b :C1 i3OM:Wa/70:30:5) = 0,26 Si02 -on. 5. H-Scr-Gln-Thr Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OMe 100 mg %-Ser-Gln -Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Lcu-OtBu-t (Id. F. 1. pont) 2 ml 90%-os TFA-ban 20 percig,szobahőmérsékleten keverjük. Az elegyet bepároljuk, a szilárd részt kiszűrjük és szárítjuk. A szilárd anyagot (80 mg) DMF-ben oldjuk és cézium-karbonát, valamint metil-jodid segítségével észterezzük (J.O.C. 42, 1286, 1977). A Z-védett peptid-metil-észtert DMF- ben szokásos módon hidrogénezzük. Kitermelés:45 mg. Rf (CMClj :CHj OH:Wa/70:30;5) = 0,34 Si02 -on. ö. H-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys(Boc)-OtBu Az F. 5. pont szerinti 0,992 g Z-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val Thr-Lcu-OH-t 540 mg H-Phe-Lys(Boc) -OtBu-val DMF-ben 1 mól ekvivalens DCCI és 2 mól ekvivalens HOBt segítségével összekapcsoljuk. A DCHU szűréssel történő eltávolítása után a szűrletet szárazra pároljuk. Ezt követően a maradékot 75 ml széki Gr-butanol és kloroform 2:3 arányú keverékében Kioldjuk és az oldatot vízzel, 0,1 n sósavval, 5%-os nátrium-klorid-oldattal, valamint vízzel mossuk, majd Na2S04 fölött szárítjuk, szűrjük, végül szárazra pároljuk, A Z-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys(Roc)-OtBu kitermelése 1 g. Az olvadáspontja: 221-272 °C (bomlással). A pepiidet DMF-ben szénhord o/.ós palládium katalizátor segítségével fentiekben ismertetett módon hidrogénezzük. Rf (Cl ICI 3 :CH3 OH : Wa/70:30:5) - 0,27 Si02 -on. Hasonló módszerrel készítjük az alábbi peptide- Jcct ’ 7. H-Ser-Gin-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-OtBu Rf (CIICI3 :CH3OH:Wa/70:30:5) = 0,34 Si02 -on. 8. H-Ser-Gln-Tlrr-Pro-Leu-Val-Thi-MeLeu-OtBu Rf (CHCI3 :CH3OH.Wa/70:30:5) = 0,30 Si02-on. 1. példa H -Gly-Phe -Me t-Thr-Ser-GUi -Lys-Ser-GIn -Thr-Pro-Leu-Vai-Thr-Leu-OH acetát sójának szintézise 1,22 g Boc-Gly-Phe-Met Thr-Ser-Glu(0tBu)-Lys(Boc)OH-t (Id. E. 2. pont) és 308 mg HOBt-ot 10 ml DMF-ben feloldunk és az elegyet —22 °C-ra hűtjük. Ezután 5 ml DMF-ben és 1 mól ekvivalens NEM-ben lévő 1,05 g H-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OtBu-t (Id. F.l. pont) adunk a lehűtött oldathoz. Az elegy pli-ját NEM-mel 6,5-re állítjuk, majd 271 mg DCCI-t adunk hozzá. Az oldatot 15 percig 22 °C-on keverjük, majd szobahőmérsékleten 8 órán át tovább keverjük - nitrogén atmsozíera alatt — a keletkező DCHU-t kiszűrjük és a szűrletet vízbe öntjük. A keletkező csapadékot mossuk és szárítjuk. Kitermelés: 78%. Bomláspont: 205-208 °C. Rf (CHC13 :CH3OH:Wa/70:30:5) = 0,77 Si02-on. A keletkező, védett peptid 1,6 g-ját 30 ml 90%-os TFA-hoz adjuk, majd néhány csepp tercier-butilszulfidot adunk hozzá. Az elegyet szobahőmérsékleten 1 órán át keverjük, ezt követően éterbe öntjük. A keletkező szilárd anyagot kiszűrjük és szárítjuk, Ezután az anyagot 30 ml tercier-butilalkohol és víz 1:1 arányú keverékében feloldjuk, majd acetátformában lévő ioncserélőt (Lewatit®) adunk az elegyhez, és fői órán át keverjük. Az ioncserélőt kiszűrjük, a szűrletet szárazra pároljuk. Kitermelés: U4g. Rf (BuPy :Ac:Wa[2:3/4:1/4:1 D= 0,25 Si02 -on. A terméket Bu:Ac:Wa/4:l :5 oldószer-rendszerben ellenáramú megosztással tisztítjuk. Kitermelés: 600 mg. 2. példa Az 1. példa szerinti módszerrel az alábbi peptideteket állítjuk elő acetátsó formájában : 1. H-Gly-Phe-Met-Thi-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OMe (E. 2. * F. 5.) Rf = 0,46 2. H-Ala-Phe-Met-Thr-Ser-Giu Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-I^u-Val-Thr-Leu-NHCH3 (E.3. ♦ F. 4) Rf = 0,31 3. H-Ixu-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-GIn-Thr-Pro-Leu-Val Thr-Leu-OH (E.4. * F. 1.) Rf = 0,33 4. H-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-GIu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-MeLeu-OH (E.2.-F.8.) Re = 0,26 5. H-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Glu-Thr-Pro-Leu-Val-Hir-Leu-OH (E. 2. - F. 2.) Rf = 0,22 6. II-Ala-Phe-Mct-Thr-Ser-GIu-Lys-Ser-Gln-Thr Pro-Leu-Val nir-D-Leu-OH (E. 3. ♦ F. 3.) Rf = 0,34 Rf BuPy.Ac:Wa[2:3/4:I/4:l] rendszerben meghatározva Si02 -on. 3. példa H-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-GIn-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OH 1. Boc-Phe Met-Thr-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-OH Az E. 1. pontban leírtak szeiint az A. 4. szerinti Boc-Phe-Met-OH-c H-Thr-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-OMe-vel kondenzáljuk és a keletkező peptidet az E. 2. pontban leírtak szerint elszappanosítjuk. Rf (CIICI3:McOH:Wa/70:30:5) = 0,68 Si02-on. 2. Az 1. pont szerint nyert peptidet H-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OtBu-val (F. 1.) kapcsoljuk és az ílymódon keletkező peptid vevőcsoportját az 1. példában leírtak szerint eltávolítjuk, mikoris a cím szerinti vegyiiletet kapjuk. Rf (BuPy :Ac:Wa[2:3,'4:1/4:1 ]) = 0,34 Si02 -on. 4. példa A 3. példában leírtak szerinti módszerrel állítjuk elő az alábbi peptideket: Dezamino-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Vai-Thr-Leu-OH, Rf (BuPy:Ac:Wa [2:3/4:l/ /4:1 ]) = 0,28 Si02-on. H-D-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-GLn-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-OH, Rf (Bu:Py:Ac.Wa [2:3/4:1/4 1])= = 0,29 Si02-on. 5. példa H-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu- Val-Thr-Leu-OH acetátsója 1. Z-Thr-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-N2 H3 4,0 g Z-Thr-Ser-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-OMe-t (B.3.) 40 ml metanolban feloldunk. Ehhez 2,0 ml hidrazin-184.720 5 10 15 20 25 30 35 40 45 60 55 60 7
