184704. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív enkefalin analógok előállítására

«è

1

184.704

2

Termelés X7 Op. (°C) Rf [«Jj/

% (kristályosítás

oldószere)

Analízis Aminosav analízis

81

77

89

Gly

108-110

0,973

C3

0 H3 9 N5 O9 .Hj 0:

Gly (3,08),

MeOH/

0,954

+1,37°

számított%: C: 57,05,

Tyr (1,00),

EtOAc/pe

0,85s

(c=0,5 .metanol)

H: 6,50, N: 11,09 talált%: C: 57,02 H: 6,62, N: 10,64

Phe (1,05),

Alá

115-117

0,873

c31

h4,nso9

EtOAc

0,954-8,81°

számított%: C: 59,32

Gly (1,98),

0,9 Is

(c=0,5 .metanol)

H: 6,58, N: 11,16

Alá (1,09),

talált%: C: 59,19,

Tyr (1,00),

H: 7,06, N: 10,74,

Phe (1,03)

Val

150-151

* 0,973-6,08°

Cs 3 H4 5 N5 O9

Pr (EtOAc)

0,95s

(c=0,5 metanol)

számított%: C:60,44

Gly (1,97),

Pr20

,

H: 6,92, N: 10,68

Val (0,94),

talált%: C: 59,94,

Tyr (1,00),

H: 7,02, N: 10,37

Phe (0,999).

25

B) lépés: BOC.Tyr.Gly.Gly.Phe.X7 .OH - aliol X7=Gly, Alá, Val képletű vegyidet előállításának általános módszere

A védett BOC.Tyr.Gly.Gly.Phe.X7 .OMe képletű pentapeptidet 6 ml metanolban oldjuk, 3 ml vizet 30 adunk hozzá és a pH értékét 11,5 és 12,0 között tartjuk n nátrium-hidroxid hozzáadásával, amíg elméletileg kiszámított mennyiségű lúgot hozzá nem adunk. Az oldatot vákuumban bepároljuk és így a

metanolt eltávolítjuk, majd vízzel hígítjuk.

Az oldhatatlan anyag maradékait leszűrjük, az oldatot etilacetáttal extraháljuk, hogy a maradék észtert eltávolítsuk és a vizes fázis pH értékét 0,7 m citromsav oldat hozzáadásával pH=3-ra igazítjuk. A kicsapódott peptidet etilacetáttal extraháljuk. Az extraktumot vízzel mossuk, vízmentes magnéziumszulfáttal szárítjuk és vákuumban koncentráljuk.

X7 . Rf

Gly

amorf csapadék

0,84;

EtOAc-ból

0,74.;

petroléterrel

0,83

Alá

amorf csapadék

0,80:

EtOAc-ból

0,66'

Pr2 O-val '

0,87!

Val

amorf csapadék

0,88:

EtOAc-ból

. 0,85‘

petroléterrel

0,93!

Analízis

C29H37N5O9H2O

számított%: C: 56,40, H: 6,32, N: 11,34 talált%: C: 56,33, H: 6,41, N: 11,07

C30H39N5O9 .Hj O

számított%: C: 57,05, H: 6,50, N: 11,09 talált %: C: 57,20, H: 6,43, N: 10,67

C32H43N5 O9

számított%: C: 59,89, H: 6,75 talált%: C: 59,98, H: 6,50

C) lépés: H.Tyr.Gly.Gly.Phe.X7 .OH HC1 - ahol X7=Gly, Alá, Val-képletű vegyidet előállításának általános módszere

100 mg BOC.Tyr.Gly.Gly.Phe.X7.OH pentapeptidhez 1,0 n 5 ml sósavban és 1 ml anizolban oldott

50 sósavat adunk. 90 percig szobahőmérsékleten keverjük az elegyet és az oldószereket vákuumban eltávolítjuk. A maradékot eldörzsöljuk száraz éterrel és így amorf szilárd anyagot kapunk. A terméket vízben oldjuk, szűrjük és liofilizáljuk és így fehér szilárd anyagot g formájában kapjuk a peptid sósav sóját.

8