184468. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immobilizált kolinészteráz enzimkészítmény előállítására
1 184 468 2 49,8 mg kolinészteráz 2,5 ml hideg kálium-foszfát pufferben (pH = 3,6) készült oldatát adtuk hozzá. A teljes reakcióidő 48 óra volt. Ebből a keverés ideje kétszer hat óra. A gélt ezután háromszor 10 ml hideg (4 C°-os) 0,1 mólos kálium-foszfát pufferral (pH = 3,6), majd háromszor 10 ml 0,5 mól nátriumkloridot tartalmazó pufferoldattal (pH =3,6) mostuk. Háromszor 10 ml kálium-foszfát pufferrel, majd négyszer 25 ml desztillált vízzel sómentesre mostuk és liofizáltuk. A kitermelés 182,5 mg immobolizált kolinészteráz. Aktivitás: 0,0 «mól butiril-tiokolin-jodid hidrolízise/perc'gramm szárazanyag. 11. példa klorid 2,5 ml hideg pufferben (pH = 5,0) készült oldatát adtuk az elegyhez. 10 perc keverés után 50,5 mg kolinészteráz 2,5 ml hideg kálium-foszfát pufferben (pH = 5,0) készült oldatát adtuk hozzá. 5 A teljes reakcióidő 48 óra volt. Ebből a keverés ideje kétszer hat óra. A gélt ezután háromszor 10 ml hideg, 0,1 mólos kálium-foszfát pufferrel (pH = 5,0), majd háromszor 10 ml 0,5 mól nátrium-kloridot tartalmazó pufferoldattal (pH = 5,0) mostuk. 10 Háromszor 10 ml kálium-foszfát pufferrel, majd négyszer 25 ml hideg desztillált vízzel sómentesre mostuk és liofilizáltuk. A kitermelés 239,9 mg immobilizált kolinészteráz. Aktivitás: 163,2 .«mól butiril-tiokolin-jodid hidrolízise/perc/gramm száraz- 15 anyag. 259,1 mg Akrilex C—100 xerogélt (4,7 mekv/g -COOH) 5,0 ml 0,1 mólos, hideg kálium-foszfát oldatban (pH = 4,0) szuszpendáltunk. 126,9 mg N-etil-N’-(3-dimetilamino-propil)-karbodiimid-hidroklorid 2,5 ml hideg pufferben (pH = 4,0) készült oldatát adtuk az elegyhez. 10 perc keverés után 49,6 mg kolinészteráz 2,5 ml hideg kálium-foszfát pufferben (pH = 4,0) készült oldatát adtuk hozzá. A teljes reakcióidő 48 óra volt. Ebből a keverés ideje kétszer hat óra. A gélt ezután háromszor 10 ml hideg, 0,1 mólos kálium-foszfát pufferrel (pH = 4,0), majd háromszor 10 ml 0,5 mól nátriumkloridot tartalmazó pufferoldattal (pH = 4,0) mostuk. Háromszor 10 ml kálium-foszfát pufferrel, majd négyszer 25 ml hideg desztillált vízzel sómentesre mostuk és liofilizáltuk. A kitermelés 168,0 mg immobilizált kolinészteráz. Aktivitás: 13 /<mól butiril-tiokolin-jodid hidrolízise/perc/gramm szárazanyag. 12. példa 252,5 mg Akrilex C—100 xerogélt (2,5 mekv/g -COOH) 5,0 ml 0,1 mólos, hideg kálium-foszfát oldatban (pH = 4,6) szuszpendáltunk. 124,2 mg N- etil-N’-(3-dimetilamino-propil)-karbodiimid-hidroklorid 2,5 ml hideg pufferben (pH = 4,6) készült oldatát adtuk az elegyhez. 10 perc keverés után 52,9 mg kolinészteráz 2,5 ml hideg kálium-foszfát pufferben (pH = 4,6) készült oldatát adtuk hozzá. A teljes reakcióidő 48 óra volt. Ebből a keverés ideje kétszer hat óra. A gélt ezután háromszor 10 ml hideg, 0,1 mólos kálium-foszfát pufferrel (pH = 4,6), majd háromszor 10 ml 0,5 mól nátrium-kloridot tartalmazó pufferoldattal mostuk. Háromszor 10 ml kálium-foszfát pufferrel, majd négyszer 25 ml hideg desztillált vízzel sómentesre mostuk és liofili záltuk. A kitermelés 280,8 mg immobilizált kolinészteráz. Aktivitás: 101,7 /»mól butiril-tiokolin-jodid hidrolízise/perc/garmm szárazanyag. 13. példa 252,6 mg Akrilex C—100 xerogélt (7,8 mekv/g -COOH) 5,0 ml 0,1 mólos, hideg kálium-foszfát oldatban (pH = 5,0) szuszpendáltunk. 125,0 mg N-etil-N’-(3-dimetilamino-propil)-karbodiimid-hidro-14. példa 249,2 mg Akrilex C—100 xerogélt (6,9 mekv/g 20 -COOH) 5,0 ml 0,1 mólos, hideg kálium-foszfát pufferben (pH = 6,0) szuszpendáltunk. 127,2 mg N-etil-N’-(3-dimetilamino-propil)-karbodiimid-hidroklorid 2,5 ml hideg pufferben (pH = 6,0) készült oldatát adtuk az elegyhez. 10 perc keverés után 25 51,9 mg kolinészteráz 2,5 ml hideg kálium-foszfát pufferben (pH = 6,0) készült oldatát adtuk hozzá. A teljes reakcióidő 48 óra volt, ebből a keverés ideje kétszer hat óra. A gélt ezután háromszor 10 ml hideg, 0,1 mólos kálium-szulfát pufferrel (pH = 30 6,0), majd háromszor 10 ml 0,5 mól nátrium-kloridot tartalmazó pufferoldattal (pH = 6,0) mostuk. Háromszor 10 ml kálium-foszfát pufferrel, majd négyszer 25 ml hideg desztillált vízzel sómentesre mostuk és liofilizáltuk. A kitermelés 277,8 mg im- 35 mobilizált kolinészteráz. Aktivitás: 252 «mól butiril-tiokolin-jodid hidrolízise/perc/gramm szárazanyag. i 15. példa 40 257,4 mg Akrilex C—100 xerogélt (0,7 mekv/g -COOH) 5,0 ml 0,1 mólos, hideg kálium-foszfát i pufferben (pH = 7,0) szuszpendáltunk. 127,8 mg N-etil-N’-(3-dimetilamino-propil)-karbodiimid-hidro- 45 klorid 2,5 ml hideg pufferben (pH — 7,0) készült oldatát adtuk a reakcióelegyhez. 10 perc keverés után 51,9 mg kolinészteráz 2,5 ml hideg kálium-foszfát pufferben (pH = 7,0) készült oldatát adtuk hozzá. A teljes reakcióidő 48 óra volt, ebből a keve- 50 rés ideje kétszer hat óra. A gélt ezután háromszor 10 ml hideg, 0,1 mólos kálium-foszfát pufferrel (pH = 7,0), majd háromszor 10 ml 0,5 mól nátrium-kloridot tartalmazó pufferoldattal (pH = 7,0) mostuk. Háromszor 10 ml kálium-foszfát pufferrel, 55 majd négyszer 25 ml hideg desztillált vízzel sómentesre mostuk és liofilizáltuk. A kitermelés 292,9 ■■ mg immobilizált kolinészteráz. Aktivitás: 107,6 i ‘ ,«mól butiril-tiokolin-jodid hidrolízise/perc/gramm szárazanyag. <50 16. példa I... * 250,6 mg Akrilex C—100 xerogélt (0,2 mekv/g -COOH) 5,0 ml 0,1 mólos, hideg kálium-foszfát ol- 65 datban (pH = 8,0) szuszpendáltunk, 122,7 mg N-6
