184368. lajstromszámú szabadalom • Eeljárás D-fenilalanil-L-prolil-L-arginin-aldehid-szuklfát előállítására
1 184 368 2 prolil-L-argininaldehid-szulfát 90 napon át megőrzi antitrombin aktivitását. A vizsgálatokat tovább folytává 180 napon át is stabil, és szilárd állapotban 6 hónap múltán sem veszít aktivitásából. Megvizsgáltuk a tripeptid-aldehid-sók, valamint a g karbaminsav-származék antitrombin aktivitását az élettani körülményeket jobban megközelítő humán plazmán is az alábbi rendszerben: 0,2 ml humán citrát-plazma, 0,1 ml trisz(hidroximetil)-amino-metán-klórhidrát- jq sósav puffer (pH = 7,2), amely a peptid-oldatot tartalmazza és 0,1 ml US Standard Human Thrombin (NIH, Betseda, Maryland, USA) 10 egység/ml oldat. A rendszer alvadási ideje peptid nélkül 15 s , ,Schnither- -j g Gross Coagulometer”ben meghatározva. A n. táblázat adataiból látható, hogy a kontroll alvadási idő kétszeres megnyújtásához szükséges peptid mennyiség acetát és klórhidrát-sók esetében sarzsoktól függő és többszöröse, karbaminsav esetén is kétszerese a tripeptid- 20 aldehid-szulfát mennyiségének. A tripeptid-aldehid-származékok in vivo vizsgálatainak eredményét a ül. táblázatban foglaltuk össze. A D-fenilalanil-L-prolil-L-arginin-aldehid-szulfát antitrombin hatása in vivo is igen jelentős. Intravénás és szubkután adás mellett megközelíti a gyógyászatban általánosan alkalmazott heparin hatását, sőt a heparinhoz képest jelentős többlethatással rendelkezik. Ugyanis míg a heparin per os hatástalan, addig a tripeptid-aldehid-szulfáttal 25 mg/kg-os orális dózisban terápiás hatás érhető el (a karbaminsawal csak 50 mg/kg-os dózisban). A D-fenilalanil-L-prolil-L-arginin-aldehid-szulfát toxicitási adatai is kedvezőbbek, mint az acetáté, illetve a karbaminsav-származéké. AIV. táblázatban az akut toxicitási értékeket tüntettük fel, amely a tripeptid-aldehidszulfát esetén egereken p.o. adás mellett 2 g/kg-nál nagyobb értéknek adódott. Tekintetbevéve a D-fenilalanil-L-prolil-L-arginin-aldehid-szulfát alacsony toxicitását és nagy hatékonyságát, a mindkét tényezőt figyelembevévő terápiás index — amely egy vegyület gyógyászati felhasználása szempontjából az egyik leglényegesebb adat — sokkal kedvezőbb, mint az egyéb tripeptid-aldehid-származékoké. A kutyákon végzett intravénás infúziós kísérletek alapján tervezett humán intravénás infúzió dózis 1—2 mg/kg/óra. T ripeptid-aldehid-származékok antitrombin aktivitása humán-plazmán II. táblázat Peptid-aldehid Az alvadási idő kétszeres megnyújtásához szükséges peptid mennyiség /rg/ml reakcióelegy koncentrációban közvetlenül a peptid feloldása után Relatív aktivitás D-Phe-Pro-Arg-H • H2S04 0,020 100 D-Phe-Pro-Arg(COOH)-H 0,042 48 D-Phe-Pro- Arg-H • 2CH3COOH 0,065-0,140 31—14 D-Phe-Pro-Arg-H *2HC1 0,060-0,130 33-15 heparin“ 0,105 19 " Kereskedelmi forgalomban lévő (132,2 E/mg U. S. Ph. XVII) heparinnal mért adat In vivo vizsgálatok Terápiás hatás“ eléréséhez szükséges dózis III. táblázat Peptid-aldehid mg/kg/óra i. v. infúzió nyúl kutya mg/kg sub cutan nyúl kutya per os nyúl kutya D-Phe-Pro-Arg-H • 2CH3COOH ____ ____ ___ ____ 100 100 D-Phe-Pro-arg-H • 2HC1 — — — — — 100 D-Phe-Pro-Arg(COOH)-H — 3,0 10,0 6,0 50 50 D-Phe-Pro-Arg-H • H2S04 1,0 0,5 6,0 6,0 25 25 heparin 0,6 0,5 5,0 2,0 — — • A terápiás hatást a teljes vér alvadási idejének 1,5—2,5-szeres megnyújtásával jellemeztük [Irodalom: Nies, A. S. (1978) in Clinical Pharmacology [Melmon, K. L. and Morelli, F. F. eds.), 2. kiadás, 303—306 oldal, Macmillan pub!. Co. Inc. New York; Verstraete, M, Verwilghen, R (1980) in Drug Treatment, Principles and Practice of Clinical Pharmacology and Therapeutics, 2 . kiadás, Avery, G. S. ed., 889—952 oldal, Edinburgh and London. 3
