184141. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lipoid anyagokból kialakított partikulák, valamint ilyen partikulát és ehhez kötött biológiailag aktív anyagot tartalmazó kompozíciók előállítására
184 141 megfelelő térfogatú fizológiás konyhasó-oldatban veszszük fel (reszuszpendáljuk). A hatásossági vizsgálatokat a már említett gyógyszerkönyvekben megadott módszerekkel tengeri malacokon végezzük. A specifikus antigenitás mértéke az előírtat meghaladja és az adagválasz törvénnyel egyezően jelzi az antigenitás mértékét. c) Különböző mennyiségű partikulához (b) eljárásváltozat) azonos mennyiségű tetanusz toxoidot kötünk. Liofilezés után az anyagot a liofilezés előtti térfogatnak megfelelő térfogatú fiziológiás konyhasó-oldattal az eredeti volumenre reszuszpendáljuk. A hatásossági vizsgálatokat tengeri malacon a fentiekben említett előírások szerint végezve megállapítható, hogy az immunválasz minden egyes mintánál meghaladja a gyógyszerkönyvi előírásokban megadott antigenitás mértékét. 5. példa Kombinált bakteriális antigénekkel való immunizálás Egységnyi partikulához (b) eljárásváltozat) tetanusz, difteria és bakteriális antigéneket kombináltan kötünk, liofilezés után az anyagot reszuszpendáljuk a liofilezés előtti állapotba és meghatározzuk a már említett gyógyszerkönyvek előírása szerint az egyes antigén komponensek hatásosságát tengeri malacon, ill. fehér egéren. Az antigenitás mértéke vizsgálatainkban minden esetben eléri vagy meghaladja az előírt értékeket. 6. példa Anti HCG immunszérum előállítása Anti hormonok előállítására modell vizsgálatot végzünk humán choriogonadotropinnal (HCG). Jelenleg a fenti közismerten rossz immunogen adjuválását olajos Freund adjuvánssal végzik. 3000 E/mg HCG-t kötünk 1 partikula egységhez (b) eljárásváltozat szerint állítjuk elő). Az így készített oltóanyaggal 2,5 kg súlyú NZW nyulakat oltunk subcután kéthetes időközönként. A 7. oltást követően az anti HCG ellenanyagszintet a kontroll csoporthoz viszonyítva minden esetben magasabbnak találjuk. A kontroll csoport oltását Freund adjuvánssal stimulált azonos mennyiségű HCG adaggal is elvégezzük. A Freund adjuvánssal oltott kontroll csoport kellemetlen mellékhatásaihoz viszonyítva a partikulával oltott csoportnál semmiféle mellékhatást nem tapasztaltunk. A fenti hosszú immunizálási'periódust követően a nyulakat elvéreztetjük és kórboncoltatjuk. A vese, a máj és tüdő mikroszkópos és szövettani vizsgálata alapján semmiféle kóros elváltozás nem lép fel. 7. példa Antihisztamin szérium előállítása Detoxikált hisztamin (paraaminobenzolazohistamin) 2,7 mg-nyi mennyiségét 2 partikula egység liofilezett hordozóhoz (b) eljárásváltozat) kötünk és ezzel az 9 6 anyaggal minden második napon nyulakat immunizálunk. A 20. oltás után magas ellenanyagszintben kimutatható antihisztamin ellenanyagot regisztrálunk. 8. példa Lipoid-oldékony anyagokból kialakított partikulákhoz kötött gamma-globulin reagens előállítása (a) eljárásváltozat) 6 pH-értékű puffer-oldatban elkészítünk 2,5 10,25 %os gamma-blobulin-oldatot. Ugyancsak elkészítjük a lipoid-oldékony anyagok abszolút alkoholos oldatát, mely 0,01—0,6 % tojás-lecitint és 0,1—2 % koleszterint tartalmaz. Az oldatokat az a) eljárásváltozatnál leírtak szerint összekeverjük. A kapott csapadékot 5 1 vérsavó hígítására általánosan használt fiziológiás elektrolit-oldatba visszük, turmixoljuk, majd ultrahangozzuk és így kapjuk a felhasználásra kész reagenst. 9. példa Lipoid-oldékony anyagokból kialakított partikulához kötött gamma-globulin reagens felhasználására kvantitatív reumatoid faktor meghatározására A reumatoid arthritisben olyan immunkomplexek vannak jelen, melyek normál emberi immuno-globulinokkal reakcióba lépnek. Kimutathatóságuk és a betegség felismerése is ezen a tényen alapul, amit különböző módszerekkel, így latex-partikulák alkalmazásával, vagy pedig az igen érzékeny WAALER-ROSE reakcióval tesznek láthatóvá. A latex hordozórendszerrel a korábbiakban foglalkoztunk, így e helyen nem kívánunk ismétlésekbe bocsátkozni. A WAALER-ROSE reakció, mint passzív hemaglutinációs módszer igen munkaigényes, a reakció kivitelezése hosszú időt igényel. A vizsgálandó egyénektől nyert vérsavókat 56 °C-on 30 percig hőkezeljük és felhasználásig hűtve * 4 °C-on tároljuk. Lehetőleg friss, de egy hétnél nem „öregebb ’ savókkal dolgozunk. Baktériumok agglutinációjához használatos üveglemezre felvisszük a vizsgálandó savó fiziológiás nátriumklorid-oldattal készült hígításainak egy-egy cseppjét. (0,05 ml). Ezt követően az általunk kifejlesztett gammaglobulint tartalmazó és fentebb ismertetett eljárással készült reagensből 0,01 ml-t adunk a savóhígítások minden egyes cseppjéhez. A reakció kialakulását, az agglutinációt a reagensnek a savóhoz történő hozzáadásától kezdve mérjük. Természetesen minden egyes hígított savó csepphez a reagenst a lehető legrövidebb időn belül adjuk hozzá, külön-külön, üvegbottal alaposan elkeverjük és a lemez állandó folyamatos mozgatásával elősegítjük a kétféle anyag egyenletes keveredését. A reakció értékelésénél a szabad szemmel történő leolvasást, szemikvantitatív elbírálást alkalmazzuk. Az agglutinációk erősségét 10 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
