184141. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lipoid anyagokból kialakított partikulák, valamint ilyen partikulát és ehhez kötött biológiailag aktív anyagot tartalmazó kompozíciók előállítására
184 141 ,,0 ”-++++,-ig osztályozzuk. Negatív, „0 , reakciónak fogadjuk el az eredményt, ha az általunk megválasztott reakcióidő alatt (5 perc) nem következik be agglutináeió, míg a reakció pozitivitását, az agglutináció erősségét a keresztek számával jelöljük. így a ++++ erősségűnek fogadjuk el a reakciót, ha a vizsgálati idő alatti-erős aggregátumok alakultak ki és a csapadékrögök közötti folyadék feltisztul. Ezen aggregűciónak a csökkenését a keresztek számának csökkenése jelöli. A kiértékelhetőséget kézi nagyító használatával (lupe) segítjük elő. Kontrollként 1 csepp, a savó hígítására használt fiziológiás nátrium-klorid-oldatot, és a reagens 0,01 ml-ét alkalmazzuk. A vizsgálati idő alatt (5 perc) agglutináció nem következhet be. Tapasztalataink szerint a mikro-aggregátumok kialakulása igen jól nyomon követhető mikroszkópos vizsgálattal is. Ilyen esetekben a reakciót tárgylemezen hajtjuk végre, a leolvasást 40 x-es objektiwel és 7 x-es okulárral végezzük. Más típusú kiértékelést végzünk, ha csak az illető vizsgálandó savó esetében annak pozitívitása kérdéses. Ilyen esetekben a reakciót tömény, hígítás nélküli savókkal végezzük. Pozitívnak fogadjuk el a fent leírtak szerint elvégzett vizsgálatot, ha egy percen belül jelentkezik agglutináció és negatívnak, ha ez egy percen belül nem következik be. Eredményeink alapján, melyeket az alábbiakban közlünk, megállapítható, hogy a találmány szerinti kompozíció gyors szűrő vizsgálatra alkalmas. 1. táblázat 11 Gamma-globulinhoz kötött lipoid partikula reagens ti tere (GLT) Savó hígítás WAALER-ROSE reakció there (WRT) 0, 32, 64, 128, 256, 512 1024 tömény 2 ± ++++ ++++ ++++ ++++ 4-4 + 4 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ 4 _ +-M+++ ++++ ++++ ++++ 8-± + ++ +++ +++ + ++++ 16-± + +++ +++ ++++ 32 — — — + ++ +++ + ++ 64 — — — _ + t +++ 128 — — — _ __ ±. + 10. példa Aminoglükozid típusú antibiotikumok közül tobramycint, gentamycint és amikacint alkalmazunk partikulához kötve. Az eljárásunk szerinti a) és b) változattal készült liposzómák 4 egységeit 8—8 mg fenti hatóanyaggal hozzuk össze 1 ml fiziológiás nátrium-klorid-oldatban. A fenti anyaggal az egy percig végzett ultrahang kezelést követően randomizált 16—18 gr súlyú CFLP egérből kettő db-ot oltunk be intraperitoneálisan (0,5 ml) (egér). Az oltási kísérletekhez 100 ml szuszpenziót készítünk, és az oltást követően az egerek 6-os csoportjait óránként elvéreztetjük, majd a nyert savókból a hatóanyagtartalmat mikrobiológiai titrálással nyerjük vissza, ill. értékmérjük. Kontrollkénti egércsoportot liposzóma nélküli fiziológiás nátrium-klorid-oldatban felvett hatóanyaggal oltunk. Az óránként vett vérminták savóiból elvégzett értékmérések alapján megállapítható, hogy a kontroll csoport esetében az oltást követő 5—6 órában már értékelhető mennyiségben nincs hatóanyag a szervezetben, míg a liposzómával együtt adott antibiotikumok esetében még a 7-8 órákban is tudtunk hatóanyagot detektálni, mely a szervezetben való nyújtott idejű jelenlétet bizonyítja. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás lipoid anyagokból kialakított partikulák, valamint ilyen partikulát és ehhez kötött biológiailag aktív anyagot, így treponema, diftéria, tetanusz baktériumokat, hepatitisz, myxomatosis vírust vagy ezek frakcióit vagy anyagcseretermékeit, human Chorio Gonadotropin hormont, hisztamin, gamma-globulin fehérjét vagy amino-glüközid antibiotikumot tartalmazó kompozíciók előállítására azzal jellemezve, hogy az alkoholban vagy egyéb oldásra képes szerves oldószerben oldott lipoid szemcseképző anyagot, mégpedig foszfolipidet és 1 súlyrész foszfolipidre számítva 10—200 súlyrész koleszterint a) és a vízbe vagy 2—10 pH-értékű vizes elektrolitoldatba vitt biológiailag aktív anyagot 0,1—900 : 100 térfogatarányban folyamatosan keverővei ellátott edénybe visszük, amikoris a lipoid szemcseképző anyag és a biológiailag aktív anyag mennyiségének aránya szárazanyagban kifejezve 1 : 1 és 1 : 1000 közötti, a kapott reakcióelegyet legalább egy percig keverjük, keverés után a reakcióelegyet legfeljebb 7 napig állni hagyjuk, majd az oldatból kivált részecskéket elkülönítjük, vagy b) folyamatosan vízzel vagy 2—10 pH-értékű vizes elektrolit-oldattal keverjük össze, 0,1-900 : 100 térfogatarányban, majd a kivált partikulákat elkülönítjük, majd adott esetben vízben vagy 2—10 pH-értékű vizes elektrolit-oldatban szuszpendáljuk és liofilezzük. vagy c) folyamatosan vízzel vagy 2-10 pH-értékű vizes elektrolit-oldattal keverjük össze 0,1—900 : 100 térfogatarányban, a kivált partikulákat elkülönítjük, az így kapott partikulákat vízbe vagy 2—10 pH-értékű vizes elektrolit-oldatba vitt biológiailag aktív anyaghoz adjuk, amikoris a lipoid szemcseképző anyag és a biológiailag aktív anyag mennyiségének aránya szárazanyagban kifejezve 1 : 1 és 1 : 1000 közötti, az oldatot legalább egy percig keverjük, majd legfeljebb 7 napig állni hagyjuk, majd a képződött szemcséket elkülönítjük, vagy 12 5 10 15 23 25 30 35 40 45 50 55 60 7
