184141. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lipoid anyagokból kialakított partikulák, valamint ilyen partikulát és ehhez kötött biológiailag aktív anyagot tartalmazó kompozíciók előállítására
184 141 A találmány tárgya eljárás lipoid anyagokból kialakított partikulák, valamint partikulát és ehhez kötött biológiailag aktív anyagot. így baktériumot, vírust vagy ezek frakcióit vagy anyagcsere termékeit, enzimeket, hormonokat, fehérjéket vagy antibiotikumokat tartalmazó kompozíciók előállítására. Biológiailag aktív anyagok kötésére in vitro vizsgálatok céljára latexet — speciálisan polimerizált, megfelelő méretre kialakított polisztirol-szuszpenziót — alkalmaznak széles körben (Am. J. Med. 21.888—892, /1956/). A latex-szuszpenzió készítésének kiindulási anyaga a sztirol. Közismert ezen anyag molekuláinak autopolimerizációra való erős hajlama. Ezért a latexet célszerűen úgy állítják elő, hogy a kereskedelemben kapható sztirolt felhasználás előtt a sztirol-monomer kinyerése céljából desztillálják. Az így kapott anyagot ezután polimerizálják. A sztirol nrolekula kémiai szerkezetéből következő autopolimerizációs hajlamot a kialakított latex-szuszpenzió is feltehetőleg megőrzi. Ebből adódóan a szuszpenzió tárolásakor számolni kell a szemcsék „öregedésével , mely egy bizonyos méreten túl a reagenst alkalmatlanná teheti csapadékos reakció végzésére (J.A.M. A., 168,/2/, 180-181,/1958/). A latex hordozórendszer felhasználásával készült reagensek előállítása legalább két lépésben történik, ahol az első lépésben magát a hordozórendszert állítják elő, majd a kész hordozórendszerhez kötik a biológiailag aktív anyagokat. Előállítása tehát hosszadalmas, kizárólag in vitro vizsgálatok végzésére alkalmas, mivel az alapját képező sztirol az élő szervezetre nézve abszolút káros. In vivo adjuvánsok céljára széles körűen alkalmazzák a Freund adjuvánsokat. Ezek felhasználásának még kísérleti körülmények között is határt szabnak azok a mellékhatárok, melyek humán gyógyászati felhasználását lehetetlenné teszik. A humán gyógyászatban előszeretettel alkalmazott fémtartalmú adjuvánsokkal és a vérképet befolyásoló szaponin típusú immunstimulánsokkal szemben előnyösebbnek mutatkozik az általunk kifejlesztett partikula rendszer. Újabban „Iiposzomát’ próbálnak alkalmazni biológiailag aktív anyagok megkötésére parenterális felhasználás céljából (Proc. Nat. Acad. Sei. 72, 88—92, /1975/). A liposzoma koleszterinből és nem fajidegen felületaktív anyagokból képzett partikula. Képzésük a fenti anyagok kloroformos oldásával, a töltésviszonyok kialakítása pedig például foszfatidil-kolin hozzáadásával történik. A kloroformos fázist ezután szárazra desztillálják. így az edény falán lipid réteget kapnak. Második lépésben ehhez a fdmhez adják a vízben oldott biológiailag aktív anyagot (28131/74 számú Nagy-britanniai közzétett bejelentés). Az előállítás tehát szakaszos, egy lépésben igen kis mennyiségű anyag nyerhető. Az így nyert partikulák szemcsemérete igen tág határok között ingadozik. A találmány célja az in vitro felhasznált latex és az in vívó alkalmazott adjuvánsok (Freund, szaponin típusú adjuvánsok, fémtartalmú adjuvánsok és liposzomák) ismertetett hiányosságainak kiküszöbölése, többirányú felhasználást biztosító hordozórendszer kifejlesztésével. 3 A találmány célja a latex és liposzoma hordozórendszerek ismertetett hiányosságainak kiküszöbölése új hordozórendszer kifejlesztésével. Célunk olyan hordozórendszer kialakítása, mely nem autopolimer, nem fajidegen és így lehetőséget nyújt az in vivo és in vitro felhasználásra, valamint lehetővé teszi széleskörű alkalmazását az immunológia és a biológia különböző ágaiban, beleértve a humán és állatgyógyászat területeit is. Természetes alapkövetelmény, hogy ezen hordozóanyag részecskéinek felületéhez biológiailag aktív anyagok, molekulák köthetők legyenek. A találmányunk célja, hogy a partikulák keletkezése és a biológiailag aktív anyagok kötése egy lépésben is elvégezhető legyen, az eljárás folyamatos előállítást tegyen lehetővé, mely biztosítja a nagy mennyiségekben való előállíthatóságot és így javítja a gazdaságossági tényezőket. Meglepő módon azt tapasztaltuk, hogy a hordozórendszer szemcséinek kialakítása és a biológiailag aktív anyagok kötése ezen partikulákhoz egy lépésben is megoldható például az alábbiakban leírtak szerint. Abszolút alkoholban feloldunk koleszterint és tojáslecitint. Párhuzamosan vizes elektrolit oldatba visszük a kiválasztott biológiailag aktív anyagot pl. baktérium, vagy vírus partikulákat, baktériumok sejtfrakcióit, vagy anyagcsere termékeit és ezek származékait, különböző hormonokat, önmagukban rossz immunogén hatású hapteneket, valamint antibiotikumokat. Ezt követően az alkoholos és vizes fázisokat egyesítjük. Igv a partikularendszer képzése és a biológiailag aktív anyag kötése egyetlen lépésben történik. Lehetőség van két lépéses előállítási technológia alkalmazására is. Ebben az esetben az alkoholos fázisban feloldjuk a szemcse képző anyagokat, amit elektrolit fázissal összehozva nyerjük a partikulákat. így „üres partikulákat tudunk előállítani, ami biológiailag aktív molekulák későbbi kötésére alkalmas. Ezt követően mindkét technológiai úton nyert szuszpenziót centrifugáljuk, dekantáljuk és a csapadékot vízben vagy előre elkészített vizes elektrolit oldatban szuszpendáljuk. ultrahanggal kezeljük. Tárolását liofilezéssel, vagy hűtéssel oldjuk meg. Befejező lépésként a liofilezett anyagot sugársterilezzük. Ezen kompozíciók gyártási technológiája, valamint felhasználási területe új. Találmányunk értelmében ezeket a kompozíciókat úgy állítjuk elő. hogy az alkoholban vagy egyéb oldásra képes szerves oldószerben oldott szemcseképző anyagot a) és a vízbe vagy 2—10 pH-értékű vizes elektrolitoldatba vitt biológiailag aktív anyagot 0,1-900 : 100 térfogatarányban folyamatosan keverővei ellátott edénybe visszük, amikoris a lipoid szemcseképző anyag és a biológiailag aktív anyag mennyiségének aránya szárazanyagban kifejezve 1 : 1 és 1 : 1000 közötti, a kapott reakcióelegyet legalább egy percig keverjük, keverés után a reakcióelegyet legfeljebb 7 napig állni hagyjuk, majd az oldatból kivált részecskéket elkülönítjük, vagy b) folyamatosan vízzel vagy 2—10 pH-értékű vizes elektrolit-oldattal keverjük össze, 0.1—900 : 100 tér4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
