184041. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glükopiranozil-peptidek előállítására
184 041 értékeltük; a vizsgálathoz bárány vörösvérsejteket alkalmaztunk. A művelet előtt a vérsefteket formáimnál, majd antigénnel kezeljük Hirata, A.A. és Brandiss, M.W. (J. Immunoi.: 100. 641-648 /1968/) módszere szerint. Az első antigén injekció beadása után, továbbá az emlékeztető injekciót követően mintát veszünk, és értékeljük a primer, ill. szekunder hatást. Az eredményeket a 3. táblázat foglalja össze. Az antitest titer fogalma egy adott mennyiségű bárány vörösvérsejt aggén tinációjához szükséges szérum-higítást jelenti. 25 3. táblázat Antitest titer primer válasz szekunder válasz BSA kontroll <3 161 16 BSA * MDP 100 Mg 50 300+ 100 BSA + Mur-NAc-L-Ala-D-G1u(NH2)-OCH3 lOOjug 100 500+ 150 BSA + Mur-NAc-L-Ala-D-Glu(NH )-OC H lOO^ig 12 600 + 200 BSA + Mur-NAc-L-Ala-D-G1u(NH2) 100/jg 25 200+ 90 Az eredmények azt mutatják, hogy a metil és butil-észterek (amelyeket izotóniás só oldatban adunk be) az antitest szint jelentős növekedését idézik elő. A találmány szerinti vegyületek hatása az összehasonlító anyagként alkalmazott MDP-nél észlelt hatásnál nagyobb. 4. Mur-NA c-L-A la-D-Glu(NH7 j-OCH^ adjuváns hatásának vizsgálata olajos fázisban E vizsgálatokkal egy specifikus antitest szint növekedését értékeljük, a vizsgálati anyag beadását követően. A készítményt víz/olaj emulzió formájában adjuk be. A hatást az adjuváns nélküli kezelés esetében észlelt hatáshoz viszonyítjuk. A vizsgálatokhoz 350 g-os nőstény Hartley-tipusú tengeri malacok 6-os csoportjait alkalmazzuk. Az injekciót az állatok hátsó talpába intradermálisan adjuk be. Az antigént tartalmazó oval bum int 0,1 ml izotóniás sóoldatban visszük be. A beadott antigén dózis értéke : 1 mg. Az injekciót Freund-féle inkomplett adjuváns (FIA) formájában, olajos fázisban adjuk be. A találmány szerinti vegyületeket 0,1 mg dózisban adjuk a FIA-tartalmú emulzióval együtt. összehasonlító anyagként MDP-t alkalmazunk. Az im- 14 munizációt követő 18 nap eltelte után vizsgáljuk az antigén hatására fellépő késleltetett hiperszenzitivitást oly módon, hogy ultra dermális utón 0,01 mg ovalbumint adunk be az állatok oldalába. Az injekció helyén fellépő reakciót 48 órával később ellenőrizzük. A fellépő bőr-reakció átmérőjét mm-ben adjuk meg. 21 nappal az injekció beadása után az állatok vérét leengedjük; az összegyűjtött szérumban mérjük az ovalbuminra specifikus antitest mennyiségét olymódon, hogy az antitest-antigén komplexet semleges zónában lecsapjuk. Az üymódon lecsapódó protein nitrogén-tartalmát Folin módszerével ellenőrizzük. Az antitest-tartalom átlagértékét a 4. táblázat tünteti fel. A táblázatban megadjuk a lecsapott antigén nitrogén-tartalmát yug/szérum értékben kifejezve. 26 4. táblázat Az antigént tartalmazó emulzió összetétele Szérumban lévő antitestek (ng/ml) Bőrreakció átmérője mm-ben FIA 800 0 FIA + MDP(100>ug) 5.000 15 FIA + Mur-NAc-L-Ala-D G1u(NH2)-0CH3 (100 jug) 6.000 17 FIA + Mur-NAc-LAla-D-G1u(NH2)-OC4H9 2.000 8 A fenti eredmények azt mutatják, hogy a találmány szerinti metil- és butil-észtereket olajos emulzióban alkalmazva, az antitest szintet az antigén beadása után ezek lényegesen megnövelik, vagyis egy késleltetett hiperszenzitivitás reakciót hoznak létre, az alkalmazott antigénnel szemben. Az észlelt reakciók legalább olyan mértékűek, mint az összehasonlításként alkalmazott MDP esetében mért hatás. 5. Fertőzés ellenes hatás vizsgálata Klebsiellával A vizsgálati módszert Chedid, L. és társai (Proc. Natl. Acad. Sei. USA.: 74.2089 /1977/) ismertetik. A fent leírt módszer segítségével értékelhetjük a találmány szerinti vegyületek fertőzés ellenes hatását. Azt tapasztaltuk, hogy 1—2.10^ Klebsiella pneumoniae dózist intramuszkulárisan egereknek beadva az állatok nagy része a következő héten elpusztul. 8 nap után megállapítottuk a megmaradt állatok túlélési arányát. A találmány szerinti anyagokkal kezelt állatok túlélését a kezeletlen állatokéhoz viszonyítottuk. A vizsgálatokhoz a Pasteur Intézet hibrid egereit (C57B1/6 X AKR/FI) alkalmaztuk. Ezek az egerek az orleans-i C.N.R.S. törzsekből lettek kitenyésztve. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
