184041. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glükopiranozil-peptidek előállítására
184 041 A Klebsiella pneumoniae fertőzéshez a 2-biotípusú dtörzs 16 órás tenyészetét alkalmazzuk. A tenyésztéshez pneumococcus (No. 53515, Pasteur Intézet) számára leírt táptalajt használunk. A fertőzéshez 2.104 Klebsiella-dózist intramuszkulárisan adunk be. A találmány szerinti vegyületeket intravénásán, 0,2 ml apirogén fiziológiás oldatban adtuk be. Kontrollként ez utóbbi oldatot önmagában használtuk. A hatóanyag beadását 24 órával a fertőzés előtt eszközöltük. Fenti körülmények között azt tapasztaltuk, hogy a Mur-NAc-LAla-D-Glu butil- és decil-észterei fertőzés ellenes hatást mutatnak. Ez a hatás a kontroli-állatokhoz viszonyított magasabb túlélési százalékban mutatkozott meg. 27 5, táblázat Termék Egerek száma Túlélés %-ban Védelem %-ban DO D3 D5 D10 Kontroll 24 29 12,5 12,5 Mur-NAc-L-Ala-D-Glu (nh2>-oc4h9 24 92 75 75 63 6. A koagulációs mechanizmusra való befolyás elmaradása Ismeretes, hogy adjuváns tulajdonsággal rendelkező vegyületek, mint pl. az LPS, mellékhatással rendelkezhetnek. Például azt tapasztalták, hogy nyulaknak adott LPS csökkenti a koagulációs időt. Ennek a jelenségnek az oka nem teljesen ismert. Minden esetre hasznosnak látszik a találmány szerinti vegyületeknek a koagulációra kifejtett hatását megvizsgálni. A méréseket Lerner (Thrombosis Research, 11. kötet 253-261 /1977/): „Endotoxinok által okozott intramuszkuláris rögképződés terjedése, és a szöveti faktorok neutrofil termelésének szerepe ) szerint leírt eljárás alapján végezzük. Az összes vér mennyiségét kettéosztjuk, egyik részét centrifugáljuk, ílymódon részecske-mentes plazmát kapunk (PFP), 1 ml teljes vért műanyag csőben lOOjug vizsgálati anyag jelenlétében inkubálunk. Olyan vizsgálati csöveket is készítünk, amelyek 0,1 ml PEP-t tartalmaznak, s amelyhez óránként 5 alkalommal 0,1 ml inkubált elegyet, majd 0,1 ml (0,025 mól) kálciumklorid-oldatot adunk. Mérjük a koagulációhoz szükséges időt, majd a koagulációs hatást a kontrolinál mért koagulációs időhöz viszonyított időcsökkenés alapján értékeljük. Kontrollként fiziológiás víz szerepel. Az eredményeket összehasonlítottuk a koagulációt nagymértékben befolyásoló LPS-anyaggal. A vizsgálatok eredményeit a következő táblázat tünteti fel. A koagulációs időt másodpercekben fejezzük ki. Azt tapasztaltuk, hogy a Mur-NAc-L-Ala-D-Glu butil- és metilészterei az LPS-hez viszonyítva a koagulációt nem gyorsítják. 28 6. táblázat Inkubációs idő órában Víz LPS Metilészter Butilészter 0 131 129 125 129 2 129 118 118 120 3 122 98 109 122 4 119 88 110 114 5 113 77 104 108 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az (I) általános képletű, glükopiranozilpeptidek előállítására, ahol a képletben R jelentése 1-4 szénatomos alkilcsoport, Rj jelentése -NH2, aminofenil- vagy hidroxilcsoport, R6 jelentése hidroxil- vagy oxi-szukcinilcsoport, X jelentése L-alanil-, L-valil-, L-szeril- vagy L-glicil-csoport, R? jelentése 1-10 szénatomos egyenes, vagy elágazó, alkilcsoport, azzal jellemezve, hogy valamely (V) általános képletű vegyületet, ahol R6 jelentése hidroxilcsoport, vagy borostyánkősavanhidriddel szemben reakcióképes csoport és Rj jelentése a fenti, valamely (VI) általános képletű vegyülettel, ahol X és R7 jelentése a fenti, vagy e vegyület R? helyében hidrogénatomot tartalmazó származékával reagáltatjuk, majd adott esetben e művelet után, vagy pedig ezt megelőzően az (VI) általános képletű vegyületeket vagy ezeknek a (VI) általános képletű vegyületekkel képzett reakciótermékeit borostyánkősavanhidriddel reagáltatjuk, majd adott esetben a kapott vegyületben lévő szabad savcsoportot valamely R?OH általános képletű alkohollal (a képletben R7 jelentése a fenti) észterezzük, majd adott esetben az R6 helyében lévő védőcsoportot hidrolizáljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy (VI) általános képletű glutaminsav-származékként ahol X és R? jelentése a fenti, egy észter-származékot alkalmazunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a glutaminsav észterezését a dipeptid-láncon, az (V) általános képletű muraminsav származékhoz - ahol a képletben R6 jelentése hidroxilcsoport, vagy borostyánkősavanhidriddel szemben reakcióképes csoport és Rj jelentése az 1. igénypontban megadottal azonos - való kapcsolás előtt végezzük. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a (VI) általános képletű gluta-15 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
