183823. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kötszeranyag készítésére
1 183 823 2 A találmány tárgya eljárás kötszeranyag előállítására, mely szerint kollagén-hordozóra fibrinogén komponenst és trombinkomponenst tartalmazó réteget viszünk fel. Ismeretes, hogy a kollagént, mely a kötőszövet lényeges fehérjéjéből áll, sebkezelésre használják. A kollagént például lenyúzott állati bőrből és inakból fizikai és kémiai módszerekkel lehet elválasztani és kidolgozni és mint kollagénlapot, fatyolt vagy habot a sebre helyezni. (16 17 780 sz. Német Szövetségi Köztársaságbeli közzétételi irat). Ismeretes továbbá, hogy helyi vérzéscsillapítás és szövettapadás érhető el olyan véralvadási faktorokkal, mint a fibrinogen, trombín és a véralvadásfaktor XIII. írásos ismertetést közöl a bécsi Orvosi Hetilap 7. kötet 86—89 old. (1976) arról, hogy a fibrinogen és kollagén kombinációját vérzéscsillapításra használják a szívsebészetben. Kétségtelen azonban, hogy ez a felhasználás idő- és anyagigényes. A fagyasztással szárított emberi fibrinogént 37 °C-ra fel kell melegíteni, kollagén-fátyolra felhordani és ott trombin vizes oldatának és faktor XIII vizes oldatának hozzáadásával megalvasztani, majd az ilyen módon képződött fibrinnel bevont oldalát a vérző helyre szorítani. Nehéz azt az időpontot helyesen eltalálni amikor a sebre való rátétéit kell végezni. Ha a tapasz rátétele korai; akkor az alvasztási faktorok szétfolynak a környezetbe, oda ahova nem kívánatos, mint például véredényekbe; ha a tapaszt későn helyezik el, úgy már nem érhető el megfelelő tapadás. Hogy műtét közben váratlanul fellépő vérzésre reagálni lehessen, mindig megfelelő nagy mennyiségű fibrinnel átitatott kollagénnek kell előkészítve lennie, melyet gyakran nem is használnak fel és el kell dobni. Nem oldja meg ezt a problémát a 29 14 822 sz. Német Szövetségi Köztársaságbeli nyilvánosságrahozatali irat szerinti megoldás sem, melyben sebek gyógyítására szolgáló anyagként vérkoaguláló faktor XIII-at és trombint önmagában írnak le, hiszen a vér megakadásához éppen úgy szükséges fibrinogént az anyag nem tartalmazza, ami azt jelenti, hogy az anyag például alvadási bántalmak esetében való felhasználásra nem felel meg. A találmány célkitűzése olyan eljárás kidolgozása, amely lehetővé teszi, hogy valamennyi szükséges komponenst felvigyük egyetlen hordozóra úgy, hogy azok egymással ne lépjenek reakcióba. Meglepő módon egy olyan anyagot találtunk, mely az összes véralvadáshoz szükséges alkotóelemeket együttesen tartalmazza, de ezek csak a felhasználáskor lépnek egymással reakcióba úgy, hogy ez az anyag még hosszabb raktározás esetében is felhasználható állapotban marad. Ily módon lehetővé vált, hogy a véralvadáshoz szükséges faktorokat egyetlen kollagén-hordozóra vigyük fel úgy, hogy az alkatrészek jól tapadjanak a kollagén-hordozón és ugyanakkor a fibrin-képződés nem, vagy legalábbis nem említésre méltó mértékben következik be. A találmány tárgya ennek megfelelően, olyan kötszer előállítására irányuló eljárás, melyben kollagén és véralvasztó hatású anyagok vannak, és melyet az jellemez, hogy egy kollagén-hordozót olyan keverékkel vonunk be, mely a következő anyagokból áll: fibrinogén-kompnens, mely fibrinogént, faktor XIII-at tartalmazó fibrigonént vagy ezek keverékét tartalmazó anyag, trombin-komponens, mely trombint, testfolyadék jelenlétében trombint kiválasztó anyagot vagy ezek keverékét tartalmazó anyag, a szokásos adalékokon kívül mint kalciumon, proteaze-inhibitor, heparin-antagonista anyag, fibroplasztikus anyagok sarjadását és növekedését előmozdító anyag, mint fibronektin, továbbá gyulladásgátló gyógyszerek. A találmány szerinti anyag előállítása céljából különböző fajtájú kollagént használhatunk, mint természetes kollagént vagy kémiailag módosított kollagént, mint amilyen például a kereszthálós kollagén, észterifikált kollagén vagy módosított aminocsoportot tartalmazó kollagén. A kollagén hordozója lehet hab, gyapjú vagy film, de legelőnyösebb a kollagén-hab. Fibrinogén-komponens gyanánt a következőket használhatjuk: állati vagy emberi fibrinogén célszerűen 0,25—20 ng/cm2 mennyiségben, melyen belül a 0,5—5 mg/cm2-es tartomány különösen előnyös. A fibrinogén lehet nagymértékben tisztított, tartalmazhat kis mennyiségű alvadási-faktor XIII-at, de lehet alvadási-faktor XHI-ban dúsított is. Szokás szerint fibrinogénből 0,5—20 U/cm2 tartalomhoz, előnyösen az 1—10 U/cm2 mennyiségű alvadásifaktor Xffl használata. Lehetséges az alvadási-faktor XIII- at külön is hozzátenni. A fibrinogént mind kristályos, mind amorf alakban vagy liofilizátumban lehet felhasználni. A trombin-komponens állati vagy emberi eredetű lehet és célszerűen 1 fjg—5 mg/cm2 mennyiségben alkalmazható, melyen belül az 50 /ag—1 mg/cm2 mennyiségtartomány a legjobb. Alkalmazható a faktorok olyan kombinációja is, melyből trombin szabadul fel. Ilyen faktorok pl. protombin és az alvadási faktor Xa. Alvadási faktorok mellett felvihetünk szokásos véralvadási folyamatot és sebgyógyulási folyamatot befolyásoló anyagokat is a kollagén-hordozóra. Különösen előnyös proteáz-inhibitorok, mint pl. agrotonin (1—1000 U/cm2), valamint heparin-antagonisták pl. protamin-klorid (0,01—5 mg/cm2), vagy olyan faktorok felvitele a kollagénre, melyek elősegítik a rostanyagok sarjadzását és növekedését és ezáltal meggyorsítjáka sebgyógyulást, mintpl. fibre nectin. Ugyanígy lehetséges kalcium-ionokat kalciumki orid segítségével 2 nmól—2 /emól/cm2 mennyiségben alkalmazni. A találmány szerinti szer gyulladásgátló gyógyszereket, mint baktericideket is tartalmazhat. A találmány szerinti szer bevont oldalának megjelölése céljából, a felviendő anyagokhoz, megfelelő festéket pl. he mint lehet hozzákeverni. Lényegében a találmány célja az, hogy lehetséges legyen fibrinogén részecskék és trombin, illetve trombint felszabadító részecskék egymás melletti jelenléte egy kollagénhordozón anélkül, hogy egymással reagálnának. Ezt az által érjük el, hogy fibrinogént és trombint, ill. trombint szabaddá tevő részeket, mint kristályokat, mint liofilizátumot vagy amorf alakban, organikus oldószerrel keverjük össze, amikor belsőséges keveredés révén, nagy fordulatszámú mixerrel, szükség esetén a nagy kristályokat felaprítva , szuszpenziót állítunk elő. Elérhető ez úgy, hogy a két ah adási-faktort külön-külön vagy egyetlen munkamenetben dolgozzuk fel. Ugyanígy a többi, alvadást és sebgyógyalást befolyásoló faktort, ionokat vagy gyógyszert már az oldószerben szuszpendálhatjuk vagy oldhatjuk fel. Ezután a szuszpenziót a kollagén-hordozó egy oldalára vagy mindegyik oldalára felhordjuk kenéssel, öblítéssel vagy bemártással és az oldószert szobahőmérsékleten vagy hűtve, normálnyomáson vagy vákuumba helyezve hagyjuk elpárologni. A fibrinogén- és trombin-részecskék a kollagén felületén megtapadnak. Az alvadási faktorok szuszpendálására sokféle organikus módszert használhatunk. Az oldószer kis mennyiségű vizet tartalmazhat, eléggé illónak kell lennie és nem szabad, hogy az alvadási faktorokat hatástalanná tegye. Ilyen oldó, illetve szuszpendáló szerek az egyenesláncú vagy 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
