183549. lajstromszámú szabadalom • Eljárás metanobaktériumokkal végzett B-12 vitamin fermantáció fermentlevének elválasztására
1 183549 2 összefoglalva a technika eddigi állását, kétségtelen, hogy az elmúlt időszakban a Bn-vitamin termelést a fermentáció, a feltárás stb. útján komoly mértékben sikerült emelni, bár komoly többletköltség árán (például a tápanyag, a feltáráshoz használt FeCl3 mennyiségének emelése stb.), de mindezen műszaki intézkedések révén nyert többlet termelés jelentős részét már a gyártás második lépésében elvesztették az előnytelen elválasztás miatt. A találmány célkitűzése a fentiekben részletesen kifejtett hátrány kiküszöbölése, azaz a fermentlé hatékonyabb szétválasztása a B!2-koenzimet és III. faktort tartalmazó sűrítményre, illetve felülúszóra. A továbbiakban Hatóanyagon a B12-koenzim és III. faktor összegét értjük. A találmányt az a felismerés jellemzi, hogy ha a 159 356 számú magyar szabadalmi leírás szerint félfolyamatosan végzett fermentációban naponta elvett cca 10% fermentlevet új tápanyagokat is tartalmazó tápoldat jelenlétében utófermentációnak vetjük alá, úgy a sűrítményben a fermentáció során megtermelt hatóanyag 85—90%-át kapjuk és a felülúszóban csupán 10—15%-ot veszítünk el. Találmányunk ilymódon nemcsak új, mert a tárgy szerinti félfolyamatos metántermelő szeptikus fermentáció során utófermentációt mindezideig nem végeztek, hanem haladó is, mert a kitermelést jelentősen emeli azáltal, hogy a szeparálhatóság nagymértékben megjavul. Az elválasztás ezen nagymértékű előnye a szakemberek előtt is meglepő. Haladó a találmány azért is, mert csupán a félfolyamatos fermentáció során elvett és utófermentálásra vitt mintegy 10% fermentléhez kell nagymennyiségű tápanyagot adni és nem a fermentlé egészéhez, amely nem csupán gazdaságilag hátrányos, de az el nem használt tápanyagok nem dúsúlnak fel, a fermentlé nem „sűrűsödik be”, továbbmenőleg a poliszatharid-szerű melléktermékek sem rontják az elválasztást. A találmány megoldása tehát azon az elven alapszik, hogy a törzsfenntartó fermentorban a fermentlevet (az össztérfogat 90%-a) a régiekben alkalmazott mintegy 10 mg/1 B,2-koncentráción tartjuk a vegyes populáció stabilitását biztosító kis tápanyagmennyiséggel és csupán a félfolyamatosítás során naponta elvett mintegy 10% fermentléhez adunk intenzív hatóanyagtermelést biztosító tápoldatot. Ilymódon több előnyhöz jutunk: a) lényegesen kevesebb tápanyagot használunk fel (csak a szaporodás fenntartásához szükséges mennyiséget), így tehát nagytérfogatú törzsfenntartó fermentorba anyagfelhalmozódás (például besűrűsödés, viszkozitásnövekedés stb.) nem történhet, b) a törzsfermentorból naponta elvett mintegy 10 tf% fermentlé körülbelül 48 órás utófermentorban történő termelés intenzifikálás művelete nem veszélyezteti — az eddigi magasszintű eljárásokkal (például 167 658 számú magyar szabadalmi leírás) szemben — a törzsfenntartást, c) b) szerint intenzifikálással naponta kapott fermentlé teljes mennyiségét a hatóanyag 80—90%-át tartalmazó sűrítményre és felülúszóra választjuk szét. A találmány eljárás mezofil, metántermelő vegyes mikropopulációval, szeptikus körülmények között ismert tápanyag-komponenseket és prekurzorokat tartalmazó tápoldat jelenlétében metanobaktériumos fermentáció sűrítményének elválasztására, oly módon, hogy a törzsfenntartó fermentáció fermentlevének mintegy 10%-át naponta elvesszük, az elvett mintegy 10 tf% fermentlé helyébe azonos térfogatú ismert tápanyagokat és prekurzorokat tartalmazó tápoldatot adagolunk, az elvett mintegy 10 tf% fermentléhez ismert tápanyagokat és nátriumtripolifoszfátot, acetont és 5,6-dimetil-imidazol-acetátot tartalmazó tápoldatot adunk, majd 24—48 órás utófermentációnak vetjük alá, majd az utófermentált fermentlevet sűrítményre és felülúszóra választjuk szét. A találmány értelmében oly módon járunk el, hogy egy 10 literes kísérleti fermentorba 2 liter, az Országos Közegészségügyi Intézetnél 76., 77., 78. és 79. szám alatt deponált Corynebacterium sp.-t (jelzése 24 Al), Corynebacterium sp.-t (jelzése 62 B9), Lactobacillus sp.-t (jelzése 244 B/Cl) és Propionibacterium sp.-t Gelzése 239 Al/6) tartalmazó mezofil, metántermelő, vegyes mikropopulációjú inokulumot töltünk, amelyet a 167 658 lajstromszámű magyar szabadalmi leírás szerint állítottunk elő, majd az inokulumot 8 liter 28—32 0 C-os csapvízben oldott alábbi tápanyagokkal töltjük fel. Kukoricalekvár 50 g (szárazanyagtartalom: 40%) melasz 20 g (szárazanyagtartalom: 50%) sörélesztőhidrolizátum 10 ml szárazanyagtartalom: 20—30% ipari máj extraktum 20 ml szárazanyagtartalom: 20—30% ammónium-lignoszulfonát 6 g (Totanin B) ammóniumhidrogénkarbonát 30 g ammóniumhidroxid 24%-os 10 ml diammóniumhidrogénfoszfát 2 g magnéziumklorid 1 g kobaltklorid 0,1 g o-xilidin 0,1 g borostyánkősav 0,06 g glicin 0,06 g 5,6-dimetilbenzimidazol 0,06 g metanol 50,0 ml A táptalaj beadagolása után 5—8 napon át olymódon végezzük a fermentálást, illetve indítjuk a továbbiakban ún. törzsfenntartó fermentációt, hogy fermentlevet nem veszünk el, csupán naponta 50 ml metanolt adunk hozzá, miközben a fermentlevet alaposan átkeverjük. A fermentor száját gumilappal fedjük be. \ 32—34 °C-on végzett fermentáció 6—8. napján a fermentálást félfolyamatossá tesszük. Ez alatt azt értjük, hogy a fermentlevet felkeverjük, majd mintegy 10%-át elvesszük, ezt külön edénybe tesszük, majd az elvett mintegy 10% fermentlé helyébe 1 liter 28—30 °C hőfokú csapvízben oldott alábbi tápanyagokat adjuk. kukoricalekvár 5 g (szárazanyagtartalom: 40%) melasz 2 g (szárazanyagtartalom: 50%) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
