183379. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil, koncentrált ciszplatinoldatok előállítására
1 2. táblázat 183 379 2 CARBOWAX Jellemző Metoxi-polietilénglikolok molekulasúly tartomány 350 335-365 550 525-575 750 715-785 2000 1850-2150 Ismeretes, hogy a polietilénglikolok bizonyos szervetlen sókkal komplexeket képeznek. így a polietilénglikolok ammónium-kobalt-tiocianáttal való reagálásakor képződő kék komplex képezi az alapját az egyik kolorimetriás módszernek, mellyel különböző keverékek polietilénglikol-koncentrációját meghatározzák. Úgy hisszük, hogy a ciszplatin egyedülálló stabilitása a találmány szerinti oldatokban annak a komplexnek köszönhető, amely a ciszplatin és a polietilénglikol között képződik, ez azonban csak elmélet és nem képezi a találmány részét. Komplex képződését rétegkromatográfiás módszerünk segítségével bizonyítottuk. Az alább leírt eljárásokat használva a vizes ciszplatin körülbelül 0,65 Rf-értékű foltot ad. Ha azonban ciszplatint 90% polietilénglikol 400 — 10% víz (vagy 10% 0,5 n sósavoldat) elegyében oldunk, körülbelül 0,3 Rf-értékű foltot kapunk, amely mintegy Rf 0,65-ig nyúlik fel. Jelentős mennyiségű vízzel való hígítás a komplexet azonnal elbontani látszik, mivel a fenti polietilénglikol — víz (vagy sósav) oldat 5 térfogat vízjel hígítva csak egy körülbelül 0,65 Rf-értékű ciszplatin-fcltot ad. Vékonyrétegkromatogrdfia (TLC) Készülék és reagensek a) TLC-lemezek — „EM Laboratories” szilikagél 60 lemezek, katalógusszám 5763, vagy ennek megfelelő. b) Eluens — Aceton/lrt salétromsavoldat (9:1). Naponta frissen készítendő. c) Előhívó - Feloldunk 5,6 g ón(II)-kloridot 10 ml tömény sósavoldatban. Hozzáadunk 90 ml desztillált vizet és 0,2 g kálium-jodidot. Alaposan elkeverjük. Naponta frissen készítjük. d) Laboratóriumi szárítószekrény 100°C-ig. Eljárás a) A mintát 5 térfogat dimetil-formamiddal (DMF) hígítjuk (Burdick és Jackson, üvegben desztillált). b) A TLC lemezre felcseppentünk 5 pl mintát, valamint ciszplatint (és szükség esetén transz-platinát és B platinát) tartalmazó 5 pl standard oldatot, az analizálandó minta várható koncentrációjával körülbelül azonos koncentrációban. Az oldószert 10 cm magasra hagyjuk a lemezen felfutni az eluenssel előzőleg egyensúlyba hozott TLC futtatótartályban. A megszárított lemezeket bepermetezzük a frissen készített előhívó oldattal és 10 percre 100°C-os szárítószekrénybe helyezzük. Megjelöljük a sárga/bíbor zónákat. c) Megközelítő Rf-értékek: 0,65 — ciszplatin 0,76 — transz-platina 0,9 B platina. A találmány szerinti oldatok nagynyomású folyadékkromatográfiás (HPLC) elemzése ciszplatin-tartalomra a munkatársaink által a 20211946A számú Egyesült Királyság-beli szabadalmi leírásban közölt eljárással hajtható végre. Mozgó (25:16:5:5) elegyet használunk. Standardként előnyösen DMF-ban oldott ciszplatint alkalmazunk 1 mg/ml koncentrációban. Az analizálandó mintákat DMF-dal hígítjuk 1 mg/ml hozzávetőleges ciszplatin-koncentrációig. Bár jelenlétéből nem származik különösebb előny, a találmány szerinti oldatok kívánt esetben szokásos, fiziológiailag elfogadható kötőanyagot, mint mannitot tartalmaznak. A korszerű stabilitási vizsgálatok alapján a találmány szerinti oldatok előrelátható stabilitása (a hatásosság 10%-os veszteségeként jellemezve) szobahőmérsékleten meghaladja a 2 évet. A találmány egy előnyös kivitelezésénél az oldatok sterilek és pirogénmentesek, és steril, pirogénmentes edényekben vannak tárolva. Az ilyen oldatok azután például injekciókhoz használatos steril vízzel (gyógyszerkönyvi minőség) vagy steril normál konyhasóoldattal (gyógyszerkönyvi) hígíthatok és intramuszkuláris vagy intravénás úton alkalmazhatók. Előnyösen az oldatokat steril, pirogénmentes, 0,22 p-os Millipore (Millipore Corporation) membránszűrőn vezetjük át aszeptikus technika alkalmazásával, steril nitrogéngáz-nyomás alatt. A csíramentes szűrletet steril, pirogénmentes tartályokban gyűjtjük össze, majd végül a kívánt mennyiségben megfelelő steril, pirogénmentes fiolákba töltjük, steril, pirogénmentes — előnyösen teflonbevonatos - dugóval bedugaszoljuk és steril alumíniumgyűrűvel lezárjuk. Rosszindulatú daganatok kezelésére használva a tömény oldatok a kívánt koncentrációig (jellemzően 1 mg ciszplatin per ml) hígítjuk, például injekciók számára használatos steril vízzel (gyógyszerkönyvi minőség), steril normál konyhasóoldattal (gyógyszerkönyvi minőség) és intramuszkuláris, intravénás injekció, vagy intravénás infúzió formájában alkalmazzuk, amint az ciszplatin készítményeknél szokásos. Enyhe vagy mérsékelten elfogadható mérgezőképességű szokásos intravénás dózistartomány a 60—100 mg/M2, amit egyszeri vagy 3-5 napon át elosztott dózisban alkalmazunk, 4 hetenként megismételve. A 60 mg/M2 dózis durván 1,5 mg/kg dózisnak felel meg, ami viszont nagyjából egy 70 kg súlyú beteget alapul véve 105 mg/70 kg dózist jelent. Gyakran a legjobb eredmények elérése céljából egyidejűleg egyéb kemoterápiás kezelést is alkalmazunk. A leírásban és az igénypontokban használt kloridionekvivalens” per ciszplatin „ekvivalens” meghatározás mólekvivalenst jelent. így például ha előnyösen mintegy 3—7 ekvivalens kloridiont alkalmazunk 1 ekvivalens ciszplatinnal, akkor ez azt jelenti, hogy 1 mól ciszplatinra körülbelül 3—7 mól nátrium-kloridot, viszont körülbelül 1,5—3,5 mól kalcium-kloridot számítunk. A használt B platina megjelölés önkényes elnevezése a ciszplatin egy savas reakció termékének, amely fele az ismert Magnus-vörös komplexnek és amelyet kísérletesen a 3 képlettel ábrázolunk. A találmányt bemutatják, de semmilyen tekintetben nem korlátozzák a következő példák. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
