183283. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunokémiailag reaktív komponensek kvalitatív és kvantitatív meghatározására
1 183 283 2 használtunk. Ezen hígítások, illetve negatív kontroliszérumok 0,1 ml-es mintáit az 1.4 pontban ismertetett eljárás szerint vizsgáltuk (3—8. lépések). A Xmax (etanol) érték a 9. példában található. A SamaronR színezékes konjugátra 16—23 ng/ml-es (ad), illetve 24—38 ng/ml-es (ay) kimutatható sági határt kaptunk. Összehasonlításul: EIA (HepanostikaR): 3 ng/ml; EIA (Hepanostika—TR): 0,7 ng/ml (kimutathatósági határ: átlagos negatív érték + 5 X SD); és SPIA: 20—40 ng/ml (kimutathatósági határ: Kontroll + 2 X SD); (kolorimetriás kimutatás). A DIA/szendvics-vizsgálatot felhasználtuk több monoklónális antitestminta összehasonlítására. Az összehasonlítást egy standard, heterogén bárány anti-HBsAg IgG készítménnyel végeztük. Három minta szolgáltatott a standardéhoz hasonló válaszjel-görbét, míg a többi készítmény határozottan gyengébb minőségű volt. 4. példa Humán placenta laktogén (HPLj vizsgálata DIA-val; szendvics-vizsgálat 4.1 Színezék szol előállítása Az 1.1 pontban megadottak szerint jártunk el, de kolloid nyomjelzőkként PalanilR Red BF és PalanilR Yellow 3G diszperziós színezékeket használtunk. A megfelelő Xmax értékek a 9. példában találhatók. 4.2 Nyúl (anti-HPL) IgG/színezék konjugát előállítása Az 1.2 pontban megadottak szerint jártunk el, de anti-HCG helyett anti-HPL-t használtunk. 4.3 MicroelisaR lapok bevonása nyúl anti-HPL IgG-nal Az 1.3 pontban megadottak szerint jártunk el, de anti-HCG helyett anti-HPL-t használtunk. 4.4 Standard görbék meghatározása HPL-re FFB-vel (lásd 1.4 pontot) elkészítettünk egy HPL hígítási sorozatot a 0,4—100 ng/ml-es koncentrációtartományban. Az FFB és a hígítások 0,1 ml-es részleteit az 1.4 pontban megadottak szerint vizsgáltuk (3-8. lépések). A Xmax (etanol) érték a 9. példában található. 1,2—1,7 ng HPL/ml-es kimutathatósági határt kaptunk, összehasonlításul: RIA: 0,03—0,14 ng/ml; EIA: 2 ng/ml; és SPIA: 0,12 ng/ml (kolorimetria). 5. példa DIA anti-Rucellá-ra; szendvics-vizsgálat 5.1 Színezék szol előállítása Az 1.1 pontban megadottak szerint jártunk el, de kolloid nyomjelzőkként PalanilR Red BF és ResolinR Brilliant Blue RRL diszperziós színezékeket használtunk. A megfelelő Xmax értékek a 9. példában találhatók. 5.2 Bárány anti(humán-IgG) IgG/színezék konjugát előállítása Az 1.2 pontban megadottak szerint jártunk el, de nyúl immunoglobulin helyett bárány immunoglobulint használtunk. 5.3 MicroelisaR lapok bevonása inaktivált Rubella vírus-antigénnel (szövettenyészetből kinyert) Az 1 3 pontban megadottak szerint jártunk el, de az immunoglobulin helyett Rubella antigént használtunk. 5.4 Standard görbék meghatározása humán anti- Rubellá-ra Hígítóként bárány negatív kontrollszérumot használva elkészítettünk egy humán anti-Rubella hígítási sorozatot a 0,4—320 IU/ml-es koncentrációtartományban. E hígítások, illetve a negatív kontrollszérum 0,1 ml-es részleteit az 1.4 pontban ismertetett eljárás szerint (3-8. lépések) vizsgáltuk. AXmax (etanol) érték a 9. példában található . A (Kontroll + 2 X SD)-ként definiált kimutathatósági határt 2,5 IU/ml-nek találtuk, ami a Rubenostika becsült kb. 10'U/ml-s kimutathatósági határával összevetve kedvező. 6. példa Humán Prolaktin (PRL) vizsgálata DLA-val; szendvics-vizsgálat 6.1 Színezék szol előállítása Az 1.1 pontban megadottak szerint jártunk el, de kolloid nyomjelzőkként PalanilR Luminous Red G és PalanilR Luminous Yellow G diszperziós színezékeket használtunk. A megfelelő Xmax értékek a 9. példában találhatók. 6.2 Monoklón (anti-PRL) IgG/színezék konjugát előállítása Az 1.2 pontban megadottak szerint jártunk el, de nyúl immunoglobulin helyett monoklón IgG-t használtunk. 6.3 M:croelisaR lapok/szalagok bevonása monoklón (anti-PRL) IgG-vel Az 1.3 pontban megadottak szerint jártunk el, de nyúl immunoglobulin helyett monoklón IgG-t használtunk. Megjegyzés: A konjugát előállításához (6.2) és a lapok/szal igok bevonásához különböző klónokból származó imrrunoglobulinokat használtunk. 6.4 Standard görbék meghatározása PRL-re A 0,4-100 ng/ml-es koncentrációtartományban FFB-vel elkészítettünk egy PRL hígítási sorozatot (lásd 1.4 pontot). E hígítások és az FFB 0,2 ml-es részleteit az 1.4 pontban ismertetett eljárás (3—8. lépések) szerint vizsgáltuk a következő módosításokkal: — az antigén inkubálása: 20 óra, szobahőmérsékleten;- a konjugát inkubálása: 20 óra, szobahőmérsékleten. A Xmax (etanol) érték a 9. példában található. 1 -4 ng'ml-es kimutathatósági határt kaptunk. Összehasonlításul: EIA: 1—4 ng/ml; és SPIA: 6-10 ng/ml. 7. példa HCG és HPL szimultán meghatározása a DIA eh alapján; szendvics-vizsgálat 7.1 Színezék szolok előállítása Az 1.1 pontban megadottak szerint jártunk el, de kolloid nyomjelzőkként ResolinR Brilliant Blue RPL és Pa-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
