183276. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7Ó-metoxi-cef-3-em-4-karbonsav-származékok ésezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
183 276 2 NMR-spektrum (5, DMSO—d6): 2,45 (3H, s), 3,41 (3H, s), 4,07 (1H, d, J = 13 Hz), 4,36 (1H, d, J = 13 Hz), 5,04 (1H, s), 5,66 (1H, d, J = 7 Hz), 6,73 (2H, d, J = 8 Hz), 6,96 (1H, s), 7,27 (2H, d, J = 8 Hz), 7,39 (1H, s), 8,84 (1H, s). 35. példa 7ß-[D-2-(6,7-Dihidroxi-kromon-3-karbnxamido)-2-(4- hidroxi-fenil)-acetarnido\7cc-metoxi-3-karboxi-metil-tiometil-cef-3-em-4-karbonsav Kitermelés: 25%. Infravörös abszorpciós spektrum (cm-1, Nujol): 1740— 1780,1660,1610; NMR-spektrum (5, DMSO-d6): 3,2-3,85 (6H, m), 3,41 (3H, s), 5,07 (1H, s), 5,67 (1H, d, J = 7 Hz), 6,75 (2H, d, J = 8,5 Hz), 6,99 (1H, s), 7,30 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,40 (1H, s), 8,85 (lH,s). 36. példa 7ß-\D-2-( 6,7-Dihidroxi-kromon-3-karboxarr.ido)-2-(4- hidroxi-fenilj-acetanúdo ]- 7a-metoxi-( l-etil-5-tetrazolil)tiometil-cef-3-em-4-karbonsav 127 mg 7/?-[D-2-amino-2-(4-hidroxi-feniI)-acetamido]- 7a-metoxi-3-(l-etil-5-tetrazolil)-tipmetil-cef-3-em-4-karbonsavat 7 ml etil-acetátban szuszpendálunk. A kapott szuszpenzióhoz 0 °C-on, keverés közben 345 p\ N,0-bisz (trimetil-szilil)-acetamidot adunk, és a keverést 0 °C-on folytatjuk 20 percen keresztül. Az elegyhez az 1. példa a) lépése szerint előállított 48 mg karbonsav-kloridot adunk, majd az elegyet további két órán keresztül 0 °C- on keverjük. A kapott reakcióelegyhez 150 ml etil-acetátot adunk, és a szerves réteget elválasztjuk, 30 ml 0,5 N vizes sósavoldattal, háromszor 30 ml vízzel mossuk, magnéziumszulfát felett szárítjuk, és az oldószert ledesztilláljuk. A maradékot feloldjuk 30 ml acetonban, és az oldatot egy éjszakán át állni hagyjuk. Az oldószert ledesztilláljuk, és a maradékot dietil-éter hozzáadásával megszilárdítjuk. A szilárd anyagot összegyűjtjük, majd etil-éter, aceton és metanol 9:1:1 arányú elegyével mossuk. Szárítás után 41 mg cím szerinti vegyületet kapunk. Kitermelés: 28%. A termék olvadáspontja, infravörös abszorpciós spektruma és NMR-spektruma megegyezik a 32. példában kapott termék megfelelő adataival. 3 7. példa 7ß-[D-2-(6,7-Dihidroxi-kromon-3-karboxamido)-2-(4- hidroxi-fenil)-acetamido\7a-metoxi-3-( 1-karboxi-meril-5-tetrazolil)-tíometil-cef-3-em-4-karbonsav 301,2 mg 7/3-[D-2-amino-2-(4-hidroxi-fenil)-acetamido]-7a-metoxi-3-(l-karboxi-metil-5-tetrazolil)-tiometil-cef-3-em-4-karbonsav-trifluor-ecetsav-sót 15 ml tetrahidro-furánban szuszpendálunk. A szuszpenzióhoz 0 °C- on, keverés közben 503 pl N,0-bisz(trimetil-szilil)-acetamidot adunk. Az elegyet 20 percen át szobahőmérsékleten keverjük, majd lehűtjük 0 °C-ra. Ezután 109,1 mg a 3. példa a) lépésben kapott sav-kloridot adunk az elegyhez, amelyet ezt követően 2 órán át 0 °C-on keverünk. A reakcióelegyet körülbelül 7 ml térfogatra kon' 1 centráljuk, majd a koncentrátumot 50 ml IN vizes-sósavoldat és 100 ml jéggel hűtött víz elegyébe öntjük. A kapott csapadékot kiszűrjük majd vízzel mossuk. A terméket feloldjuk 100 ml tetrahidro-furánban, és az oldatot magnézium-szulfát felett szárítjuk. Az oldatot 5 ml térfogatra koncentráljuk. A koncentrátumot 100 ml dietiléterbe öntjük. A kivált csapadékot kiszűrjük, majd szárijuk. így 203,6 mg cím szerinti vegyületet kapunk. A szűrletből újabb 40,6 mg cím szerinti vegyület különíthető el. Kitermelés: 70%. Az olvadáspont, az IR abszorpciós spektrum és az NMR-spektrum megegyezik a 15. példában kapott vegyület megfelelő jellemzőivel. 38. példa 7/3- [D-2-( 6,7-Dihidroxi-kromon-3-karboxamido )-2-( 4- hidroxi-fenil)-acetamido]-7a-metoxi-3-( 1 -karboxi-metil-5-tetrazolil)-tiometil-cef-3-em-4-karbonsav 35 mg a 19. példában kapott vegyületet feloldunk 1 ml metanolban. Az oldathoz 1,37 ml 1 N vizes nátrium-hidroxid oldatot csepegtetünk. 20 perc múlva 40 p] C,1 N vizes nátrium-hidroxid oldatot csepegtetünk az oldathoz. A reakcióelegy pH-értékét 7-re állítjuk be IN vizes sósav-oldat hozzáadásával. A metanol legnagyobb részét ledesztilláljuk szobahőmérsékleten, csökkentett nyomáson. Ezután az oldat pH-értékét IN vizes sósavoldattal 2,5-re állítjuk be. A kapott csapadékot szűréssel összegyűjtjük, vízzel majd dietil-éterrel mossuk, végül szárítjuk. így 25 mg cím szerinti vegyületet kapunk. Kitermelés: 73%. A termék olvadáspontja, infravörös abszorpciós spektruma és NMR-spektruma megegyezik a 15. példában kapott vegyület megfelelő jellemzőivel. Az ebben a példában kapott vegyületek antibakteriális hatását in vitro vizsgáltuk. l'izsgálati módszer A minimális gátló koncentrációt (MIC) a Japán Society of Chemotherapy standard agar hígítási módszerével határoztuk meg. A vegyületeket feloldottuk alkalmas oldószerekben (sterilizált víz a nátrium sók esetében és aceton és víz 1:1 arányú elegye a szabad savak esetében), és kétszeres hígítási sorozatot készítettünk. Összehasonlítóként a Cefalozin nátrium-sóját használtuk. Minden egyes hígításból vett alikvot mintát 9 ml Mueller Hinton agarral kevertünk el Petri-csészékben, és így olyan agar lemezeket készítettünk, amelyek a hígítási sorozat egymást követő tagjaiban szereplő mennyiségben tartalmazzák a vizsgált hatóanyagot. Miután az agar megszilárdult, a lapokat 1,5—2 órán át 37 °C-os inkubátorban tartottuk, miközben az edények fedelét kissé nyitva tartjuk, hogy lehetővé tegyük az aceton elpárolgását. A vizsgált mikroorganizmusokat 18 órán át 37 °C-on triptikáz-szója táptalajon tenyésztettük, és konyhasóoldattal hígítottuk, úgy, hogy egy ml körülbelül 106 telepképző egységet tartalmazzon. Egy-egy adag sejt szuszpenziót felvittünk az agar lemezekre, amelyeket 18 órán át 37 °C-on inkubáltunk a minimális gátló koncentráció meghatározása előtt. A kapott eredményeket a 2. táblázatban adjuk meg. Az 5. vegyületet szabad karbonsav formájában vizsgáltuk, az 5. példa a) lépésének megfelelően. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 16
