183154. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 11ß-hidroxi-szteroidok előállítására
1 : U 154 2 után összesen 4,3 g hidrokortizont nyerünk, melynek olvadáspontja 210-213 °C. 3. példa a) 5,3 g piridinium-tozilátnak és 53 g 17a,21 -dihidroxi-6a-mctil-4-prcgncn-3,20-díoniiak 370 ml dimetil-formamiddal készített oldatát 2,5 I benzollal felhígítjuk. Azután 130 °C-os fürdőhőmérsékletnél, vízleválasztóval ellátott készüléken 1 I benzolt ledesztillálunk. A forró reakció-oldatba 127 ml ortoecetsavas trietil-észtert lassan belefolyatunk, majd további 1 órán át a benzolt és a többi könnyen illó reakciókomponenst kidesztilláljuk. Ezután 63 ml piridint adunk hozzá, és vízsugárszivattyúval létesített vákuumban 60 °C-os fürdőhőmérsékletnél 2 óra alatt teljesen szárazra pároljuk. A visszamaradó 66,8 g olajos anyag a 17a,21-(l-etoxi-etilidén-dioxi)-6a-metil-4-pregnen-3,20-dion. Ha a visszamaradó anyagból egy kisebb mintát desztillált vízzel intenzíven keverünk, az olaj lassan kristályos állapotú lesz. Olvadáspontja 92-95 °C. b) Az 1b) példában leírt reakciókörülmények között (? g nyers 17a,21-(l-etoxi-etilidén-dioxi)-6a-metil-4-pregnen-3,20-diont, mely 4,8 g tiszta anyagot tartalmaz, Curvularia lunata tenyészetével 5 I órán át fermentálunk. Feldolgozás és az extraktum bepárlása után visszamaradó anyagnak diizopropil-éterből történő átkristályosítása után 3,4 g 6a-metil-hidrokortizont (6a-metil-1 l/3,17«,2l-trihidroxi-4-pregnen-3,20-diont) nyerünk, melynek olvadáspontja 217-219 °C. 4. példa a) 4 g piridinium-tozilátnak és 40 g 17a,21-dihidroxi-l,4-pregnadien-3,20-dionnak 280 ml dimetil-formamiddal készített oldatát 2 1 benzollal felhígítjuk. Ezután 120 °C-os fürdőhőmérsékleten, vízleválasztóval ellátott készüléken 600 ml benzolt ledesztillálunk. A forró reakcióelegybe lassan 96 ml ortoecetsavas trietil-észtert adagolunk, ezután a benzolt és a többi könnyen illó reakciókomponenst is kidesztilláljuk, majd 48 ml piridint adunk hozzá, és erős vákuumban 60 °C-os fürdőhőmérsékletnél 2 óra alatt teljesen szárazra pároljuk. Ily módon sárgás kristályos anyagként 58 g 17a,2l-(l-etoxi-etilidén-dioxi)-l,4-pregnadien-3,20-diont nyerünk. Ha egy mintát aktív szénnel való kezelés után 1 % ecetsavat tartalmazó éterből átkristályosítunk, akkor tiszta terméket kapunk, melynek olvadáspontja 153-154 °C. b) 2 1-es Erlenmeyer-lombikban lévő, 30 percig 120 °C-os autoklávban sterilizált 500 ml tápoldatot, mely 3 % glükózt, 1 % kukoricalekvárt, 0,2 % NaN03-ot, 0,1 % KH2P04-ot, 0,2% K2HP04-ot, 0,05 %MgSO„. .7H2(D-t, 0,002 % FeS04.7H20-t és 0,05 % KCI-ot tartalmaz, Curvularia lunata (NRRL 2380) liofilizált tenyészetével beoltunk, és a lombikot 30 '’C hőmérsékletnél egy rotációs rázóasztalon 60 órán át rázatjuk. Ezzel a tenyészettel (250 ml) beoltunk egy 20 1-es előfermentorban lévő, 121 °C-on és 2,1 atm nyomáson sterilizált 15 I tápközeget, mely tápközeg 2 % glükózt és 2 % kukoricalekvárt tartalmaz, és amelynek pH-ját 6,5-re állítjuk be. Silicon SH-nak mint habzásgátló anyagnak hozzáadása közben 29 °C-on és 0,7 atm túlnyomásnál levegőztetve (10 i/perc) és kevertetve (220 ford/perc), 24 órán át növesztjük. Ezután a tenyészetből steril körülmények között 1,5 1-t kiveszünk, és ezzel egy 20 1-es főfermentort beoltunk, melyben a fentiek szerint sterilizált 14 I tápközeg van. Ez a tápközeg 3 % kukoricalekvárt és 0,7 % glükózt tartalmaz, és pH-ját 5,5 értékre állítjuk be. Az előfermentoréval megegyező körülmények között lefolyó 12 órás növekedési fázis után 100 ml dimetil-formamidban oldott 7,5 g 17a,21-(l-etoxi-etilidén-dioxi)-l,4-pregnadien-3,20-diont adunk hozzá steril körülmények között, és a kevertetést és levegőztetést folytatjuk. A fermentációs folyamat alakulását oly módon követjük nyomon, hogy időnként mintát veszünk, ezt metil-izobutil-ketonnal extraháljuk és vékonyrétegkromatográfiás módszerrel analizáljuk. 36 óra alatt a szubsztrátum átalakulása befejeződik. A fermentlevet szűrjük, a szűrletet, valamint a kiszűrt micéliumot metil-izobutil-ketonnal extraháljuk, az extraktumokat egyesítjük és először egy keringtető bepárlóba sűrítjük be, azután 50 °C fürdőhőmérsékletnél vákuumban forgó bepárló készülékkel 100 ml-es térfogatra sűrítjük be, majd szobahőmérsékleten hagyjuk kikristályosodni. A terméket leszívatjuk, vákuumban szárítjuk és ily módon 5,7 g prcdnizolont (11/1,17a,2l-trihidroxi-l,4-prcgnadién-3,20-dion) nyerünk, melynek olvadáspontja 229— 231 °C. 5. példa a) 0,62 g piridinium-tozilátnak és 6,2 g D-homo-Reichstein S anyagnak (a-homo-17a,21-dihidroxi-4-pregnén-3,20-dion) 43,4 ml dimetil-formamiddal készített oldatát 270 ml benzollal felhígítjuk, majd 120 °C-os fürdőhőmérsékleten egy vízleválasztóval ellátott készüléken 116 ml benzolt ledesztillálunk. A forró reakcióoldatba lassan 14,9 ml ortoecetsavas trimetil-észtert adagolunk, és további 1 órán át a benzolt és más, könynyen illó reakciókomponenseket ledesztilláljuk. Ezután 7,5 ml piridint adunk hozzá, és 60 °C-os fürdőhőmérsékletnél vízsugárszivattyúval létesített vákuumban 2 óra alatt teljesen beszárítjuk. A visszamaradó olajos anyagot éterből kikristályosítjuk, és ily módon sárga, kristályos anyagként 7,3 g 17,21-(l-metoxi-etilidén-dioxi)-D-homo-4-pregnen-3,20-diont nyerünk, melynek olvadáspontja 167-169 °C. b) Egy 2 I-es Erlenmeyer-lombikban lévő, 30 percig 120 °C-on autoklávban sterilizált 500 ml tápoldatot, mely 3 % glükózt, 1 % kukoricalekvárt, 0,02 % NaN03- ot, 0,1 % KH2P04-ot, 0,2 % K2HP04-ot, 0,05 % MgS04.7H20-t, 0,002 % FeS04.7H20-t és 0,05 % KCI-ot tartalmaz, Curvularia lunata (NRRL 2380) liofilizált tenyészetével beoltunk, és a lombikot 30 °C hőmérsékletnél rotációs rázóasztalon 60 órán át rázatjuk. Ezzel a tenyészettel (250 ml) egy 20 1-es előfermentorban lévő, 121 °C-on és 2,1 atm nyomáson sterilizált 15 I mennyiségű tápközeget beoltunk, mely tápközeg 2 % glükózt és 2 % kukoricalekvárt tartalmaz, és amelynek pH-ját 6,5 értékre állítjuk be. Silicon SH-nak mint habzásgátló anyagnak hozzáadása közben 29 °C-on és 0,7 atm nyomáson levegőztetve (10 I/perc) és kevertetve 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
