183154. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 11ß-hidroxi-szteroidok előállítására
1 183 154 2 (220 ford/perc) 24 órán át növesztjük. Ezután a tenyészetből steril körülmények között 1,5 l-t kiveszünk, és ezzel egy 20 1-es főfermentort beoltunk, melyben a fentiek szerint sterilizált 14 1 mennyiségű tápközeg van. Ez a tápközeg 3 % kukoricalekvárt és 0,7 % glükózt tartalmaz, és pH-ját 6,5 értékre állítjuk be. Az előfermentációval megegyező körülmények között lefolyó 12 órás növekedési fázis után 100 ml dimetil-formamidban oldott 7,3 g 17,21-(l-metoxi-etilidén-dioxi)-D-homo-4-pregnen-3,20-diont adunk hozzá steril körülmények között, és tovább kevertetjük és levegőztetjük. A fermentációs folyamat alakulását oly módon követjük nyomon, hogy időnként mintát veszünk, ezt metil-izobutil-ketonnal extraháljuk, és vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel analizáljuk. 48 óra alatt a szubsztrátum átalakulása befejeződik. A fermentlevet szűrjük, a szűrletet, valamint a kiszűrt micéliumot metil-izobutil-ketonnal extraháljuk, az extraktumokat egyesítjük és először egy keringtető bepárlóban sűrítjük, azután 50 °C-os fürdőhőmérsékletnél vákuumban forgó bepárlóban szárazra pároljuk. A visszamaradó anyagot meleg metil-alkoholban feloldjuk, az oldhatatlan szilikonolajat kiszűrjük és a szilikonmcntesített oldatot újból szárazra pároljuk. A maradékot Kieselgel-oszlopon (gradiens: 4,5 1 metilén-klorid/0,5 I aceton-4 1 metilén-klorid/1 I aceton) kromatografáljuk és acetonból kikristályosítjuk. Ily módon 5,7 g D-homo-hidrokortizont nyerünk (I lß, 17o,2 l-trihiüroxi-D-homo^-pregnen-S^O-dion), melynek olvadáspontja 212- 215 °C (boml.). 6. példa a) 1,5 g piridinium-tozilátnak és 15 g 17a,21-dihidroxi-D-homo-l,4-pregnadien-3,20-dionnak 120 ml dimetil-formamiddal készített oldatát 800 ml benzollal felhígítjuk, majd 120 °C-os fürdőhőmérsékletnél egy vízválasztóval ellátott készüléken 250 ml benzolt ledesztillálunk. A forró reakcióoldatba lassan 40 ml ortoecetsavas trimetil-észtert adagolunk, és folytatjuk a benzol és más, könnyen illó reakciókomponensek desztillálását. Ezután 20 ml piridint adunk hozzá, majd 60 °C-os fürdőhőmérsékletnél vízsugárszivattyúval létesített vákuumban 2 óra alatt teljesen beszárítjuk, miáltal 18,8 g olajos, kristályos, nyers termék marad vissza. Egy mintát aktív szénnel való kezelés után izopropil-éterből kikristályosítunk, és így a tiszta 17«,21-(l-metoxi-etilidén-dioxi)-D-homo- ! ,4-prcgnadien-3,20-diont nyerjük, melynek olvadáspontja 142-144 °C. b) Egy 2 1-es Erlenmeyer-lombikban lévő, 30 percig 120 °C-on autoklávban sterilizált 500 ml tápoldatot, mely 3 % glükózt, 1 % kukoricalekvárt, 0,2 % NaN03-ot, 0,1 % KH2P04-ot, 0,2 % K2HPO4-0t, 0,05 % MgS04. .7H20-t, 0,002 % FeS04.7H20-ot és 0,05 % KCl-ot tartalmaz, Curvularia lunata (NRRL 2380) liofilizált tenyészetével beoltunk, és a lombikot 30 °C-náI rotációs rázóasztalon 60 órán át rázatjuk. Ezzel a tenyészettel (250 ml) egy 20 1-es előfermentorban lévő, 121 °C-on és 2,1 atm nyomáson sterilizált 15 1 tápközeget beoltunk, mely tápközeg 2 % glükózt és 2 % kukoricalekvárt tartalmaz, és amelynek pH-ját 6,5-re állítjuk be. Silicon SH- nak, mint habzásgátló anyagnak hozzáadása közben 29 cC-on és 0,7 atm túlnyomáson levegőztetve (10 1/perc) és kevertetve (220 ford/perc) 24 órán át növesztjük. Ezután a tenyészetből steril körülmények között 1,5 l-t kiveszünk, és ezzel egy 20 1-es főfermentort beoltunk, melyben a fentiek szerint sterilizált 14 1 tápközeg van. Ez a tápközeg 3 % kukoricalekvárt és 0,7 % glükózt tartalmaz, és pH-ját 5,5-re állítjuk be. Az előfermentációval megegyező körülmények között lefolyó 12 órás növekedési fázis után 100 ml dimetil-formamidban oldott 7,5 g 17«,21-(l-metoxi-etiIidén-dioxi)-D-homo-l,4-pregndien-3,20-diont adunk hozzá steril körülmények között, és tovább kevertetjük és levegőztetjük. A fermentációs folyamat alakulását oly módon követjük nyomon, hogy időnként mintát veszünk, ezt medl-izobutil-ketonnai extraháljuk és vékonyrétegkromatográfiás módszerrel analizáljuk. 52 óra alatt a szubsztrátum átalakulása befejeződik. A fermentlevet szűrjük, a szűrletet, valamint a kiszűrt micéliumot metil-izobutil-ketonnal extraháljuk, az extraktumokat egyesítjük és először kevertető bepárlóban, majd 50 °C-os fürdőhőmérsékletnél vákuumban forgó bepárló készülékkel 100 ml-re koncentráljuk be, és szobahőmérsékleten kristályosodni hagyjuk. A terméket leszívjuk és vákuumban szárítjuk. 6,1 g D-homo-prednizolont ( 11/3,17«,21 - -trihidroxi-D-homo-l,4-pregnadien-3,20-dion) nyerünk, melynek olvadáspontja 226-228 °C. Szabadalmi igénypont Eljárás I általános képletű 11 ß-hidroxi-szteroidok előállítására, ahol a képletben — ——— jelentése egyes kötés vagy kettős kötés, X jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport, és V jelentése metiléncsoport vagy etiléncsoport, azzal jellemezve, hogy egy II általános képletű 11-dezoxi-szteroidot, ahol a képletben X és V jelentése a fenti, Rí jelentése egy hidrogénatom vagy egy 1-4 szénatomos alkilcsoport, és R2 jelentése 1—4 szénatomos alkilcsoport, Curvularia lunata fajhoz tartozó mikroorganizmussal fermentálunk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 1 db ábra
