183020. lajstromszámú szabadalom • Eljárás androsztán-3,17-dion-származékok előállítására
1 18.? 020 2 jelentésű és Rj jelentése megegyezik R( jelentésével vagy jelenthet még hidrogénatomot is. R3 jelentésében rövidszénláncú telített vagy telítetlen szénhidrogéncsoporton előnyösen metil-, etil-, vinilvagy etinilcsoportot kell érteni. Az (I) általános képletű androsztán-3,I7-dion-származékok 17-ketocsoportjának redukcióját a szakember számára ismert eljárásokkal végezzük [lásd például Fried, John: Organic Reactions in Steroid Chemistry, van Nostrand, Reinhold Comp., New York, 1. kötet 61. oldal (1972)]. Így például ezeket a vegyületeket ketállá történő átalakítás után nátriuinbórhidriddel vagy lítiumalumíniumhidriddel reagáltathatjuk, és a ketálcsoport elbontása után a megfelelő, (III) általános képletű 17/3- hidroxi-androsztán-3-on-származékokat kapjuk, amelyek ismert módon anabolikus és/vagy androgén hatásúak. Ugyanígy ismertek módszerek a 17-ketocsoport alkilezésére [lásd például Fried, John: Organic Reactions in Steroid Chemistry, van Nostrand Reinhold Comp., New York, 2. kötet 53. oldal (1972)]. így az (I) általános képletű androsztán-3,17-dion-származékokat adott esetben a 3-oxocsoport ketálcsoporttá történő átalakítása után például alkilmagnéziumhalogenidekkel, vinillítiummal vagy alkálifémacetilidekkel reagáltathatjuk, és az adott esetben jelenlévő ketálcsoportok lehasítása után a (III) általános képletű 17aR-17/3-hidroxi-androsztán- 3-on-származékokat kapjuk, amelyek ismerten farmakológiailag hatásos anyagok vagy farmakológiailag hatásos szteroidok előállítására használhatók kiindulási anyagokként. A találmány szerinti eljárásban kiindulási anyagokként alkalmazott (II) általános képletű szterin-származékokat a megfelelő szterinekből állíthatjuk elő olyan módszerek segítségével, amelyeket a megfelelő 1- és/vagy 2-helyzetben levő szubsztituensek szteroidokba történő bevitelére általánosan alkalmaznak. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 1. példa 2 literes Erlenmeyer lombikban levő 500 ml térfogatú Erii táptalajt, amely 1% élesztőextraktumot, 0,45% látriumhidrogénfoszfátot, 0,34% káliumdihidrogénfoszfátot és 0,2% Tween 80 emulgeátort tartalmaz, és amelynek pH-értékét 6,7-re állítottuk, a Mycobacterium spec. NRRL-B-3805 törzs száraz kultúrájának szuszpenziójával beoltunk, és három napon át rázzuk 30 °C hőmérsékleten, percenként 190 fordulattal. 20 darab, Erlenmeyer lombikban levő 100-100 ml steril táptalajt, amely 2,0% kukoricalekvárt, 0,3% diammóniumhidrogénfoszfátot és 0,25% Tween 80 emulgeátort tartalmaz, és amelynek pH-értékét 6,5-re állítottuk be, beoltjuk a Mycobacterium spec, tenyészkultúrájának 5-5 ml-ével, és 24 órán át rázzuk 30 °C hőmérsékleten, percenként 220 fordulattal. Ezután mindegyik kultúrához hozzáadunk 50 mg, 1 ml dimetilformamidban feloldott la-metil-5a-kolesztán-3-ont, és további 96 órán át fermentáljuk 30 °C-on. Az egyesített kultúrákat etilénkloriddal extraháljuk, az extraktumot vákuumban bepároljuk, a maradékot kovasav oszlopon végzett kromatografálással tisztítjuk, és így diizopropiléterből végzett átkristüyosítás után 0,5 g la-metil-5a-androsztán-3,17-diont kapunk, amelynek olvadáspontja 140 °C. A kiindulási anyagot az alábbi módon állítjuk elő. a) 97 g 3/?-hidroxi-5a-kolesztánt 1,5 liter acetonbun szuszpendálunk, és 20 perc alatt 125 ml krómkénsavoldattal [amelyet 267 g króm(VI)oxidból, 400 ml víz bői és 230 ml tömény kénsavból állítottunk elő, majd vízzel 1000 ml térfogatra feltöltöttünk] keverjük össze. A reakcióelegyet ezután 1 órán át keverjük szobahőmérsékleten, majd jeges vízbe keverjük és a kivált csapadékot leszűrjük. Szárítás után diizopropiléterből átkristályosítjuk, így 72 g 5a-kolesztán-3-ont kapunk, amelynek olvadáspontja 127,5-128,5 °C. b) 50 g 5a-kolesztán-3-ont feloldunk 750 ml ecetsav és 5000 ml éter elegyében, összekeverjük 1 ml, ecetsavval készített, 37%-os brómhidrogénsawal, és lassan hozzácsöpögtetjük 22 g bróm 50 ml ecetsavval készített oldatához. Ezután 30 percen át keverjük, metilénkloriddal felhígítjuk, és egymást követően vízzel, nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk. Szárítás és bepárlás után 61.5 g nyers 2a-brónv5a-kolesztán-3-ont kapunk. c) 61,5 g nyers 2a-bróm-5or-kolesztán-3:ont 20 órán át keverünk 100 °C hőmérsékleten 29,3 g lítiumkarbonáttal és 34,5 g litiumbromiddal 615 ml dimetilformamidban. Ezután jeges vízbe keverjük, a kivált csapadékot leszűrjük, vízzel jól kimossuk, és metilénkloridban felvesszük. A szárítás és bepárlás után kapott maradékot szilikagélen kroinatografáljuk, és metanolból átkristályosítjuk. Így 32 g 5a-koleszt 1-én-3-ont kapunk, amelynek olvadáspontja 99,5-100 °C. d) 6,5 g magnéziumforgácsot 160 ml abszolút éterben metilmagnéziumjodiddá alakítunk 22 ml metiljodid 40 ml abszolút éterrel készített oldatával. Ezután jeges hűtés közben hozzáadunk 405 ml abszolút tetrahidrofuránt, majd az étert 62 °C forráspont eléréséig ledesztilláljuk. A Grignard-oldatot jégfürdőben lehűtjük, és keverés közben, nitrogén atmoszférában, hozzáadunk 1,3 g réz(!)kloridot. 25 g 5 a-koleszt-l-én-3-ont feloldunk 81 ml abszolút tetrahldrofuránban, és a fenti oldathoz csepegtetjük. Az elegyet 30 percen át keverjük hűtés közben, és a feleslegben levő reagenst telített ammóniumklorid-oldattal elbontjuk. Ezután a reakcióelegyet éterrel felhígítjuk, a vizes fázist elválasztjuk, és az éteres fázist telített ammóniumklorid-oldattal és vízzel mossuk. A szárítás és bepárlás után kapott maradékot szilikagélen kromatografáljuk, és metanolból átkristályosítjuk. Így 16,5 g la-metil-5a-kolesztán-3-ont kapunk, amelynek olvadáspontja 132,5-133 °C. 2. példa 20 darab Erlenmeyer lombikban az 1. példa szerinti körülmények között 50-50 mg la,2a-metilén-5a-kolesztán-3-ont (1 183 500 számú német szövetségi köztársaságbeli szabadalmi leírás) a Mycobacterium spec. NRRL-B-3805 törzs kultúrájával reagáltatunk és feldolgozzuk. tgy la,2a-metilén-5a-androsztán-3,17-diont kapunk. Az androsztán-3,17-dion-származékokat az alábbi példákban ismertetett módon alakíthatjuk át. I. példa 7,2 g la-metil-5a-androsztán-3,17-diont 150 ml abszolút metanolban feloldunk, összekeverjük 100 mg p-toluobzulfonsavval, és 20 percen át forraljuk visszafolyató hűtő alkalmazásával. A lehűlt oldatot 5 ml 10%-os 3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
