182902. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vérnyomáscsökkentő hatású dipeptid származékok előállítására
1 182 902 2 újabb 15 percen át tartjuk az említett pH-tartományt, szükséges esetben nátrium-hidroxidot adagolva. Ezt követően a harmadik 0,53 g-os klórecetsav-adagot mérjük be, majd a pH-t az említett tartományban tartjuk 15 percen át. Ezt követően a reakcióelegyet 85°C-on még további 15 percen át keverjük, majd lehűtjük. Ezután a reakcióelegyet H+-formájú Dowex 50 gyantából álló oszlopon átbocsátjuk, majd a gyantát vízzel mossuk és 2 térfogat % piridint tartalmazó vízzel eluáljuk. A pozitív ninhidrin-reakciót mutató frakciókat összeöntjük, vákuumban kis térfogatra betöményítjük és fagyasztva szárítjuk. Az így kapott anyagot néhány ml vízben oldjuk, majd a kapott oldatot Na+-formájú Dowex 50 gyantából álló oszlopra felvisszük. Az oszlopot nátriumhidroxiddal 3,3-es pH-ra beállított, 0,5 mólos citromsavoldattal eluáljuk. Az előállítani kívánt termék jelenik meg először (ezt ninhidrin-teszttel vizsgáljuk) az eluátumban, jól szeparálódva a reagálatlan L-alanil-L-prolintól. A terméket tartalmazó frakciókat vákuumban bepároljuk, mintegy 300 g mennyiségben koncentrátumot kapva. Ezt a koncentrált oldatot ezután felvisszük hT-formájú Dowex 50 gyantából álló oszlopra. Vizes mosás után az oszlopot 2 térfogat % piridint tartalmazó vízzel eluláljuk. A terméket tartalmazó frakciókat vákuumban kis térfogatra betöményítjük, majd a koncentrátumot fagyasztva szárítjuk. így 417 mg mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk. NMR spektrum (D20, metanol belső standard): 1,58 (d, J=6), gyenge kísérőjelként 1,53 (d, J=6) (összesen 3H); 1,77-2,68 (széles m, 4H), 3,63 (s), 3,28-3,92 (m) (az előző szingulettel összesen 4H); 4,05-4,72 (széles m, 2H), az utóbbit 4,68-nál víznek megfelelő csúcs fedi át. 13. példa N-(l-Karboxi-etil)-L-alanil-L-prolin 115 ml víz és 250 ml dioxán elegyében feloldunk 45 g piroszőlősav-benzilésztert és 4,5 g L-alanint, majd az így kapott elegy pH-ját nátrium-hidroxiddal 5,5-re beállítjuk. Ezután az elegyhez 9,4 g nátrium-ciano-bórhidridet adunk, majd a kapott reakcióelegyet szobahőmérsékleten 6 napon át keverjük. Ezt követően a reakcióelegy pH-ját tömény sósavoldattal 1-re beállítjuk. Az így kapott oldatot H+-formájú Dowex 50 gyantából álló, 50% dioxán és 50% víz elegyével készült oszlopra felvisszük. Az oszlopot először az említett oldószerelegygyel, majd vízzel mossuk, ezután pedig 2 térfogat % piridint tartalmazó vízzel eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat összeöntjük, majd vákuumban szárazra pároljuk. A szilárd maradékot vízzel eldörzsöjük, majd a vizes elegyet szűrjük és a kiszűrt csapadékot vízzel mossuk. Szárítás után 6,8 g mennyiségben N-(l-benziloxikarbonil-etil)-L-alanint kapunk a diasztereoizomerek keverékeként. Az anyalúgból további 1,0 g termék különíthető még el. Az így kapott vegyületből 208 mg-ot és 217 mg L- prolin-benzilészter-hidrokloridot feloldunk vízmentes dimetil-formamidban, majd az így kapott oldatot 0°C-ra lehűtjük. Ezután az oldathoz 0,193 ml difenil-foszforilazid dimetil-formamiddal készült oldatát, majd 10 perc leforgása alatt cseppenként 0,24 ml trietil-amin dimetilformamiddal készült oldatát adagoljuk, az adagolás során a hőmérsékletet 0 °C-on tartva. Ezután ugyanezen a hőmérsékleten 3 órán át, majd szobahőmérsékleten egy éjszakán át keverjük a reakcióelegyet. Ezt követően etil- 6 acetáttal hígítjuk, vízzel, majd 5%-os nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal mossuk és vákuumban kis térfogatra betöményítjük a reakcióelegyet. A kapott koncentrátumot preparatív vékonyrétegkromatográfiás szilíciumdioxid lemezen kromatografáljuk, etil-acetátot használva futtatószerként. A 0,5—0,6 Rf-értéknél megtalálható széles sávot lekaparjuk, etil-acetáttal eluáljuk és az oldószert lehajtjuk, 212 mg mennyiségben diasztereoizomerkeverék formájában N-(l-benziloxikarbonil-etil)-L-alanil- L-prolin-benzilésztert kapva. Az utóbbi vegyületből 135 mg-ot feloldunk metanol és víz elegyében, majd az így kapott oldathoz 50 mg 10% fémtartalmú szénhordozós palládiumkatalizátort adunk. A reakcióelegyet ezután 2,8 at hidrogéngáz-nyomáson szobahőmérsékleten hidrogénezzük. A reakció befejeződése után a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet pedig vákuumban bepároljuk és a maradékot fagyasztva szárítjuk. így 95 mg mennyiségben diasztereoizomerkeverékként a cím szerinti vegyületet kapjuk. NMR spektruma a 2. példa szerinti vegyületéhez hasonló, illetve szililezett származékának tömegspektruma ugyanazt a fragmens-eloszlást mutatja. 14. példa N-( 1 -Karboxi-etil)-L-alanil-L-prolin 0,75 g N-(l-benziloxikarbonil-etil)-alanin piridines oldatához 7,5 ml 1 mólos piridines trietil-amin oldatot adunk, majd a kapott oldatot lehűtjük és 1,09 g L-proiinbenzilészter-hidrokloridot, továbbá 0,678 g diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá. Az így kapott reakcióelegyet 0 °C-on 20 órán át tároljuk, majd szűrjük és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot etil-acetátban feloldjuk, majd az így kapott oldatot először telített kálium-karbonát-oldattal, ezután pedig nátrium-kloridoldattal mossuk. Szárítás után a szerves fázist vákuumban bepároljuk, majd a maradékot szilikagélből álló oszlopon kromatografáljuk, etil-acetát és hexán elegyével eluálva. így diasztereoizomer-keverékként N-(l-benziloxikarbonil-etil)-alanil-L-prolin különíthető el. Az utóbbi vegyületet víz és etanol elegyében súlyára vonatkoztatva 10% mennyiségben vett, 10% fémtartalmú szénhordozós palládiumkatalizátor jelenlétében a 13. példában ismertetett módon hidrogénezzük, majd feldolgozzuk és fagyasztva szárítjuk. Fehér csapadékként a cím szerinti vegyületet kapjuk. NMR spektrum (D20): 1,65 (d, 6H), 1,9—2,6 (m, 4H), 3,5-4,2 (m, 3H) és 4,3-4,8 (m, 2H) p.p.m. 15. példa N-(l-Metoxikarbonil-3-metiltio-propil)-DL-alanil-L-prolin 185 mg piruvoil-L-prolin, 600 mg L-metionin-metilészter és 200 mg nátrium-ciano-bór-hidrid 20 ml metanollal készült oldatát híg metanolos nátrium-hidroxidoldattal semlegesítjük, majd szobahőmérsékleten 3 napon át állni hagyjuk. Az ekkor képződött terméket erősen savas ioncserélő gyantán adszorbeáltatjuk, majd a gyantát 2 térfogat % piridint tartalmazó vízzel eluáljuk, 80 mg mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapva. NMR spektrumában metoxicsoportnak megfelelő jel észlelhető 3,95 értéknél, S—CH3 csoportnak 2,2-nél és CH—CH3 csoportnak megfelelő 1,55 és 1,7-nél. A szililezett szár-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
